趙刃朱曉菲吳迪先小樂

（1.河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院，河北唐山063000；2.河北聯(lián)合大學(xué)，河北唐山063000；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029）

IgA腎病是一組以腎小球系膜區(qū)IgA沉積、同時(shí)伴系膜細(xì)胞增生和系膜基質(zhì)擴(kuò)張為主要表現(xiàn)的原發(fā)性腎小球腎炎，是目前公認(rèn)的全球范圍內(nèi)最常見的原發(fā)性腎小球疾病，是導(dǎo)致終末期腎?。‥SRD）的主要原因之一。紫薊益腎顆粒是筆者多年來治療IgA腎病的有效方藥，由紫草、小薊、生地黃、白茅根、半枝蓮、虎杖、白花蛇舌草、黃芪組成，該藥對(duì)IgA腎病急性發(fā)作期濕熱瘀結(jié)、熱傷血絡(luò)所致的血尿和蛋白尿具有較好的治療效果。本實(shí)驗(yàn)觀察紫薊益腎顆粒對(duì)IgA腎病的功能及病理改變的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物雄性Wistar大鼠50只，體質(zhì)量150～160 g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK（京）2009-0004，尿檢蛋白和潛血全為陰性。

1.2 藥物紫薊益腎顆粒，由唐山市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供（批準(zhǔn)文號(hào)：冀藥制字Z20050840）；腎炎康復(fù)片，由天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司提供（國藥準(zhǔn)字z10940034）。

1.3 試劑鹽酸（質(zhì)量濃度36.0%～38.0%，天津市振興化工試劑酸廠），牛血清白蛋白（BSA）（純度＞98%，北京科海榮京生物科技有限公司）；熒光素標(biāo)記抗體（FITC、IgA、BSA、NaN3）（北京成文免疫化學(xué)研究室）。肌酐（Cr），尿素氮（BUN）試劑盒（南京建成生物工程研究所）

1.4 分組大鼠經(jīng)5 d適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)分為5組，即正常組、紫薊益腎顆粒高劑量組（簡稱紫高組）、紫薊益腎顆粒低劑量組（簡稱紫低組）、陽性對(duì)照組（簡稱腎炎康組）和模型組，每組10只。

1.5 模型制備除正常組外，其余各組參照聶麗芳［1］的報(bào)道制備大鼠IgA腎病模型，于第1～6周進(jìn)行預(yù)免疫，隔日口服BSA，劑量為200 mg/kg體質(zhì)量，用0.1%鹽酸酸化水稀釋，于第6周開始尾靜脈注射BSA，劑量為20 mg/kg體質(zhì)量，用生理鹽水稀釋成3.5%的濃度，連續(xù)3次。

1.6 給藥方法 從第7周開始，紫高組和紫低組按文獻(xiàn)［2］給藥方法 計(jì)算，均以成人劑量的15倍（7.5 mg/g體質(zhì)量）和10倍（5 mg/g體質(zhì)量）灌胃給藥，腎炎康組也以成人劑量的10倍（1.2 mg/g體質(zhì)量）給藥，模型組給予相同劑量的生理鹽水。每周6次。給藥至12周末。在此過程中，根據(jù)大鼠體質(zhì)量調(diào)整劑量。

1.7 觀察指標(biāo)大鼠24 h尿蛋白定量、大鼠尿沉渣紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清肌酐尿素氮、腎小球IgA沉積、腎臟病理形態(tài)學(xué)改變。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)以（±s）表示；組間比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 尿紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果 見表1。實(shí)驗(yàn)第6周末，正常組與其他各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明造模成功。實(shí)驗(yàn)第9、12周末模型組與紫高組、紫低組、腎炎康組均可減少大鼠尿紅細(xì)胞數(shù)目（P＜0.05）；紫高組與紫低組、腎炎康組比較鏡下紅細(xì)胞數(shù)目下降明顯（P＜0.05），提示在治療過程中紫高組對(duì)IgA腎病血尿的治療作用較為顯著，而紫低組與腎炎康組療效接近（P＞0.05）。

表1 各組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)比較（104/mL，s）

表1 各組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)比較（104/mL，s）

與正常組比較，＃P＜0.05；與模型組相比較，*P＜0.05；與紫高組比較，▲P＜0.05。下同。

組別n第12周正常組100.10±0.67模型組1016.79±3.41紫高組108.45±3.14*第6周第9周0.04±0.050.08±0.06 4.14±1.35＃14.34±3.45 4.33±1.78＃10.25±1.84*紫低組1010.21±3.67*▲4.25±1.50＃12.21±2.75*▲腎炎康組103.93±1.49＃11.67±3.25*▲10.26±2.57*▲

2.2 尿蛋白測(cè)定結(jié)果 見表2。實(shí)驗(yàn)第6周末觀察，正常組與模型組、紫高組、紫低組、腎炎康組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明造模成功，其余之間比較無明顯差異，提示造模大鼠病損基本一致，存在可比性。實(shí)驗(yàn)第9、12周末模型組與紫高組、紫低組、腎炎康組尿蛋白排泄明顯減少（P＜0.05）；紫高組與腎炎康組減少蛋白尿排泄療效接近（P＜0.05）；紫高組在減少尿蛋白排泄方面優(yōu)于紫低組（P＜0.05）。

表2 各組大鼠24 h尿蛋白定量比較（mg/24 hs）

表2 各組大鼠24 h尿蛋白定量比較（mg/24 hs）

與腎炎康組比較，△P＞0.05。下同。

第12周正常組103.37±1.12模型組1019.75±2.50紫高組107.60±1.56*△第6周第9周2.26±0.903.09±1.1526 14.25±1.6343＃16.17±1.8054 15.87±1.4149＃9.34±0.9910*△紫低組1011.31±2.05*▲組別n 15.17±2.4202＃12.07±1.8489*▲腎炎康組1014.73±2.6484＃10.10±2.10890*8.70±1.63*

2.3 血肌酐、尿素氮測(cè)定結(jié)果 見表3。實(shí)驗(yàn)第12周末觀察，正常組大鼠血清BUN、Scr與模型組、、紫高組、紫低組、腎炎康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示模型建立后的大鼠腎功能受損，說明造模成功；紫高、低組和腎炎康組均可以改善實(shí)驗(yàn)大鼠血清BUN、Scr水平（P＜0.05），對(duì)大鼠腎功能有一定的治療作用；紫高組與紫低組、腎炎康組對(duì)血清BUN療效接近（P＞0.05）；紫高組和腎炎康組對(duì)血清Scr治療效果優(yōu)于紫低組（P＜0.05）。

表3 各組大鼠血清尿素氮、肌酐水平比較（±s）

表3 各組大鼠血清尿素氮、肌酐水平比較（±s）

組別n正常組10模型組10紫高組10 BUN（mmol/L）Scr（μmol/L）5.308±0.53044.042±3.292 8.335±1.577＃83.272±7.091＃6.328±1.078＃*63.961±9.616＃*紫低組106.705±1.089＃*75.551±9.531＃*△▲腎炎康組106.460±0.929＃*61.614±9.353＃*

2.4 腎小球IgA沉積實(shí)驗(yàn)第12周末觀察，熒光顯微鏡下可見造模各組腎小球系膜區(qū)均有IgA沉積，正常組腎小球系膜區(qū)無IgA；各組熒光強(qiáng)度比較，紫高組、紫低組、腎炎康組熒光強(qiáng)度均顯著弱于模型組。

2.5 腎臟病理形態(tài)學(xué)改變實(shí)驗(yàn)的第12周末光鏡觀察，空白組大鼠腎小球及腎小管均正常；模型組大鼠腎臟染色顯示為重度系膜增生性腎炎，可見彌漫性腎小球系膜區(qū)增寬，系膜細(xì)胞彌漫增生，每個(gè)系膜區(qū)細(xì)胞平均5～7個(gè)，系膜基質(zhì)增多，毛細(xì)血管腔狹窄，系膜區(qū)寬度明顯大于毛細(xì)血管直徑，腎小球毛細(xì)血管管腔有受壓變窄或閉塞，出現(xiàn)彌漫性腎小球萎縮、纖維化，毛細(xì)血管腔廣泛性受壓、狹窄，閉塞，膠原纖維形成伴局灶硬化。紫高組大鼠腎臟染色顯示為輕度系膜增生性腎炎，組織中可見腎小球系膜細(xì)胞增多不明顯，每個(gè)系膜區(qū)系膜細(xì)胞大約2～3個(gè)，基質(zhì)增生不明顯，系膜區(qū)寬度小于毛細(xì)血管直徑，毛細(xì)血管通暢，腎小球毛細(xì)血管基底膜無異常。紫低組和腎炎康組大鼠腎臟染色顯示為中度系膜增生性腎炎，與正常組相比，可見部分腎小球系膜細(xì)胞核系膜基質(zhì)輕度增生，系膜區(qū)細(xì)胞比模型組減少，每個(gè)系膜區(qū)系膜細(xì)胞平均3～5個(gè)，系膜區(qū)寬度小于毛細(xì)血管直徑，腎小球毛細(xì)血管管腔受壓不明顯，毛細(xì)血管基底膜無明顯改變。

3 討論

IgA腎病是由人體正氣虧虛之時(shí)外邪入侵而成，急性發(fā)作期多由外感風(fēng)熱、濕熱之邪，下移膀胱，熱傷血絡(luò)，或濕熱內(nèi)聚，瘀血阻絡(luò)而成；慢性遷延期多由病遷日久，反復(fù)發(fā)作，正氣損傷，導(dǎo)致脾腎氣虛、氣陰兩虛、肝腎陰虛、氣滯血瘀而致。盡管本病臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，但“虛”、“瘀”、“濕”、“熱”在發(fā)病機(jī)制中的作用最為主要［3］，其中瘀血是貫穿始終的重要環(huán)節(jié)［4］。

運(yùn)用紫薊益腎顆粒來治療IgA腎病是筆者經(jīng)過多年臨床觀察，針對(duì)其疾病急性發(fā)作期濕熱瘀結(jié)、熱傷血絡(luò)的治療而提出的新方法 。紫草有清熱涼血、活血解毒之功，還具有有免疫調(diào)節(jié)作用，并能顯著抑制滲出性增生性炎癥［5］。小薊性屬寒涼，善清血分熱而涼血止血，又略有活血化瘀功效，涼血止血而不留瘀，兼能利濕通淋故尤善治尿血、血淋。紫草、小薊二藥合用，共奏清熱涼血、活血止血之功。半枝蓮可清熱解毒，化瘀利尿，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，清熱解毒中藥除具有抗菌、抗病毒作用外，能抑制抗原抗體復(fù)合物的產(chǎn)生［5］。白茅根能清血分之熱而涼血止血，且能清熱利尿，使火熱之邪從下而走，且“濕去熱孤”，孤熱易除［6］?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，白茅根不僅能利水消腫、消除蛋白尿而且能止血降壓［7］，還有促凝、抗炎、抑菌和增強(qiáng)免疫力的作用［8］。白花蛇舌草有較強(qiáng)的清熱解毒作用，也有利濕通淋之效，常與白茅根同用，且白花蛇舌草大量應(yīng)用有免疫抑制作用［5］，對(duì)炎癥細(xì)胞生物合成分泌的細(xì)胞因子具有雙相調(diào)節(jié)作用，內(nèi)可清除濕熱瘀毒，外可抵御外邪入侵，且在腎病的任何治療階段，配用白花蛇舌草、半枝蓮等清熱解毒之品，多能取得滿意療效［9］?；⒄葘?duì)腎病的干預(yù)作用可能與其清熱解毒、利濕、活血化瘀功效有關(guān)，根據(jù)IgA腎病瘀血理論，認(rèn)為虎杖活血化瘀作用在IgA腎病防治過程中具有重要地位［10］。生地黃苦寒入營血分，為清熱、涼血、止血要藥，且甘寒質(zhì)潤，能清熱生津。用于虛火內(nèi)勝而有血尿者，有滋補(bǔ)、利尿、止血、免疫抑制、對(duì)抗激素對(duì)垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)的抑制作用［11］。黃芪既能補(bǔ)脾益氣又可利水消腫，標(biāo)本兼顧，加強(qiáng)全方消腫止血、散瘀益氣之功。黃芪含有黃芪多糖、黃芪皂苷類、多種微量元素、黃酮及黃酮類似物等成分，具有多種生物學(xué)活性，不但有清除自由基、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、誘生干擾素等作用，還可以提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)機(jī)體抗病能力［12］。此外，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腎病與脾腎兩臟關(guān)系密切，腎主藏精，腎中所藏之精來源于水谷之精，若脾虛精氣不足，濁陰不降，導(dǎo)致機(jī)體代謝產(chǎn)物不能排出，出現(xiàn)水腫，清陽不升，體內(nèi)精微物質(zhì)如蛋白下流，從尿中流失，出現(xiàn)蛋白尿［13］，故黃芪補(bǔ)氣健脾作用尤為重要。綜合全方，清熱涼血、止血消腫、益氣散瘀，治療濕熱瘀結(jié)、熱傷血絡(luò)所致IgA腎病收到良好效果。

筆者通過大鼠模型觀察紫薊益腎顆粒對(duì)IgA腎病的療效，并與全國公認(rèn)的治療慢性腎小球腎炎的腎炎康復(fù)片進(jìn)行對(duì)照，得出結(jié)論 ，高、低劑量組紫薊益腎顆?？梢燥@著降低血尿、蛋白尿與血清肌酐尿素氮的含量，改善腎小球病理組織，說明紫薊益腎顆粒可以降低血尿蛋白尿，改善腎功能，抑制腎小球系膜區(qū)系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)增多，對(duì)IgA腎病有明顯的治療作用。

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