黃月純

中藥薄層色譜鑒別的實(shí)習(xí)帶教探討

黃月純

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣州510405）

畢業(yè)實(shí)習(xí)是中藥學(xué)或藥學(xué)專業(yè)教學(xué)計(jì)劃中的重要組成部分，是學(xué)生從學(xué)校走入工作實(shí)踐的重要橋梁，醫(yī)院藥學(xué)部（藥劑科）的藥檢室是臨床實(shí)習(xí)帶教的主要部門之一，對(duì)藥檢室中藥檢驗(yàn)的薄層色譜鑒別的實(shí)習(xí)帶教進(jìn)行了探討。

藥檢室；中藥；薄層色譜法；實(shí)習(xí)帶教

畢業(yè)實(shí)習(xí)是學(xué)生從學(xué)校走入工作實(shí)踐的重要橋梁，通過實(shí)習(xí)可鞏固所學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)，培養(yǎng)學(xué)生的操作技能，有利于提高分析和解決實(shí)際問題的能力。我院藥劑科每年均承擔(dān)較重的中藥或藥學(xué)專業(yè)畢業(yè)實(shí)習(xí)帶教任務(wù)，藥檢室是藥劑科實(shí)習(xí)班組之一，一般安排學(xué)生實(shí)習(xí)時(shí)間多為2～4周，時(shí)間較短，但涉及的專業(yè)知識(shí)面較廣。近年國家有關(guān)部門對(duì)醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制要求不斷提高，要求制劑用的中藥盡可能檢驗(yàn)合格后投料，因此，制劑用中藥的檢驗(yàn)工作已成了藥檢室的重要工作之一。本文根據(jù)學(xué)生實(shí)習(xí)時(shí)間及以往帶教中遇到的問題對(duì)藥檢室中藥檢驗(yàn)的薄層色譜鑒別實(shí)習(xí)帶教模式進(jìn)行探討。

1 崗前安全培訓(xùn)、準(zhǔn)確度和精密度的學(xué)習(xí)

中藥薄層色譜鑒別涉及有毒或易燃易爆等危險(xiǎn)化學(xué)試劑，在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)介紹藥檢室的試劑室管理制度及化學(xué)試劑使用管理制度，鞏固學(xué)生的安全意識(shí)。藥品檢驗(yàn)的取樣量問題，是一個(gè)簡單而容易忽視的問題。因此，在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)讓學(xué)生掌握取樣量的準(zhǔn)確度和試驗(yàn)的精密度[1]，能正確“稱重”或“量取”，減少在實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的差錯(cuò)。

2 薄層色譜技術(shù)的介紹

中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣直接關(guān)系到制劑質(zhì)量的安全和有效。目前中藥真?zhèn)舞b別方面通常采用性狀鑒別、顯微鑒別和薄層色譜鑒別等。薄層色譜因具有良好的專屬性，自《中國藥典》1990年版起，被廣泛應(yīng)用于中藥鑒別中。前些年我國中藥薄層色譜鑒別基本是以手工點(diǎn)樣、實(shí)驗(yàn)室自制薄層板進(jìn)行試驗(yàn)，色譜質(zhì)量往往不高，分離度、重現(xiàn)性均難以達(dá)到滿意效果。近年政府對(duì)藥檢部門的設(shè)備投入明顯加大，為進(jìn)一步提高中藥薄層色譜鑒別技術(shù)提供了良好的條件。自《中國藥典》2005年版開始，逐漸使用商品預(yù)制薄層板，進(jìn)一步細(xì)化操作條件。對(duì)供試品溶液的制備、薄層板的活化、點(diǎn)樣、展開、顯色、色譜圖像的拍攝和制作等均有新的要求，色譜質(zhì)量有了明顯提高。

根據(jù)對(duì)近年到藥檢室的中藥或藥學(xué)專業(yè)實(shí)習(xí)生的了解，他們?cè)趯W(xué)校的實(shí)驗(yàn)課中較少涉及薄層色譜鑒別的規(guī)范化操作，或大多只是曾經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行自制薄層板手工點(diǎn)樣的簡單操作，色譜質(zhì)量往往很不理想。因此，在實(shí)驗(yàn)前就薄層色譜實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)方面的一些共性問題對(duì)學(xué)生進(jìn)行介紹非常有必要。

3 薄層色譜實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)的掌握

3.1 樣品的制備 中藥供試品溶液的制備一般用溶劑提取法（加熱回流、超聲提取等）。如樣品含有較多的雜質(zhì)，如鞣質(zhì)、葉綠素、糖、粘液質(zhì)等，多采取適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，減少雜質(zhì)的干擾，以便獲得比較清晰的薄層色譜。中藥飲片樣品的預(yù)處理相對(duì)簡單，容易操作。但應(yīng)提醒學(xué)生注意供試品溶液及對(duì)照藥材溶液制備相對(duì)量化操作，目的是使樣品的色譜與對(duì)照藥材的色譜更有可比性。

3.2 薄層板的準(zhǔn)備 學(xué)生開始實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好先用手工自制板進(jìn)行試驗(yàn)，但必須注意保證自制板的質(zhì)量。有條件的情況下最好采用預(yù)制薄層板。有學(xué)生認(rèn)為預(yù)制薄層板可以直接使用，實(shí)際上預(yù)制板貯藏時(shí)間過長，表面涂布的硅膠吸附劑容易被污染，需要在使用前用甲醇、甲醇－二氯甲烷混合溶劑或異丙醇在不密閉的展開缸中上行展開至最前沿，取出晾干，重新活化[2]。有學(xué)生認(rèn)為預(yù)制薄層板一定比手工自制板效果好，其實(shí)未必，對(duì)某些成分（如黃酮類）采用手工自制板效果往往也較理想。

3.3 點(diǎn)樣 樣品的點(diǎn)樣是影響色譜效果的主要因素之一，為了保證色譜的圖譜質(zhì)量，藥檢部門多采用半自動(dòng)或自動(dòng)的條帶式噴霧點(diǎn)樣，少數(shù)品種是點(diǎn)狀點(diǎn)樣。實(shí)際應(yīng)用中如無相應(yīng)的儀器，也可手工接觸式點(diǎn)狀點(diǎn)樣或條帶點(diǎn)樣，但操作需要細(xì)致小心，原點(diǎn)盡量減少溶劑擴(kuò)散現(xiàn)象，特別是點(diǎn)樣量較大時(shí)更要注意。學(xué)生開始點(diǎn)樣操作時(shí)技術(shù)不好，往往損傷薄層板板面，斑點(diǎn)過大；同時(shí)，當(dāng)活化后的硅膠薄層板從干燥器中取出，從準(zhǔn)備點(diǎn)樣到展開前，薄層板是暴露在實(shí)驗(yàn)室的大氣中，薄層板的活性就取決于實(shí)驗(yàn)環(huán)境的相對(duì)濕度，暴露時(shí)間過長，容易影響薄層板的活性。因此，可讓學(xué)生先在自制薄層板訓(xùn)練，掌握點(diǎn)樣技巧后方能在預(yù)制薄層板操作。此外，應(yīng)指導(dǎo)學(xué)生控制供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液盡可能定量制備，定量點(diǎn)樣，則樣品色譜不僅可以鑒別“真?zhèn)巍?，還可以粗略地進(jìn)行量化評(píng)價(jià)，在一定程度上提供“優(yōu)劣”的信息[2]。

3.4 展開 樣品的展開也是影響色譜效果的主要因素之一，也是學(xué)生容易疏忽的部分，在帶教時(shí)應(yīng)提醒學(xué)生注意一些容易疏忽的問題。薄層展開用薄層色譜專用展開箱最多的是直立式展開箱，雙槽展開箱具有節(jié)省溶劑、便于預(yù)平衡、可控制展開箱內(nèi)相對(duì)濕度等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用最多。但學(xué)生在操作時(shí)常對(duì)飽和狀態(tài)控制不好，如展開箱在通風(fēng)柜中飽和后，在加薄層板過程時(shí)間過長，使飽和狀態(tài)的溶劑蒸氣揮發(fā)，達(dá)不到飽和狀態(tài)，因此，應(yīng)迅速加入薄層板，同時(shí)展開注意展開箱的密閉。大多數(shù)中藥樣品適宜用直立式不飽合或部分飽和。展開劑用的溶劑需使用分析純級(jí)別，臨用前配制，不可多次反復(fù)使用，這點(diǎn)也需提醒學(xué)生注意。展開劑如需分層，則放置分層后按要求分取上層或下層，備用。此外，由不同極性有機(jī)溶媒組成的展開劑常有少量不易察覺的分層現(xiàn)象，會(huì)嚴(yán)重影響展開效果，因此，展開劑配好后可先放置片刻，再將上清液倒入展開箱中。多數(shù)品種展距為70～90mm，取出，晾干。

3.5 顯色 色譜斑點(diǎn)本身有顏色者可直接在日光下觀察，斑點(diǎn)在紫外光激發(fā)下可發(fā)射熒光者，可直接在紫外光燈下觀察熒光色譜。中藥大多需要用顯色劑使斑點(diǎn)顯色，常用噴霧法，但需將試劑均勻噴灑于薄層板面，直接觀察或加熱顯色后觀察。加熱顯色須注意加熱時(shí)間和溫度，如用含羧甲基纖維素鈉的手工自制薄層板代替預(yù)制板，注意加熱溫度過高或加熱時(shí)間過長，容易引起板面的焦化，如用硫酸等顯色劑，更易造成板面的炭化而影響顯色效果，需要特別留意。但有些方法只是說加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，未注明加熱溫度，學(xué)生往往把握不好，無法達(dá)到色譜要求，如白芍中芍藥苷的鑒別[3]，方法為噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，如溫度控制在60℃左右，斑點(diǎn)為清晰的藍(lán)紫色，如溫度超過100℃，則對(duì)照品斑點(diǎn)都有可能消失。有的品種需熏以試劑或試液的蒸氣顯色，如延胡索熏以碘蒸氣后檢視[3]，但應(yīng)揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365nm）下檢視，否則斑點(diǎn)顏色明顯較暗。

4 選擇有代表性的中藥 讓學(xué)生參與檢驗(yàn)全過程

大黃是常用中藥，《中國藥典》大黃項(xiàng)下薄層色譜鑒別方法[3]涉及薄層色譜的多個(gè)方面，具有代表性，可作為學(xué)生帶教的典型實(shí)例。供試品溶液的制備是先采用甲醇加熱回流提取，濾液蒸干后加水溶解，加鹽酸水解，然后用乙醚提取游離蒽醌，制備方法涉及回流提取、水解、液液萃取方法等。采用大黃對(duì)照藥材及大黃酸對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，大黃對(duì)照藥材可采用掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃，因?yàn)檫@三種大黃均具有大黃的五個(gè)游離蒽醌斑點(diǎn)。采用以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板，可為手工鋪板，但應(yīng)注意手工板質(zhì)量。展開劑采用石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上層溶液，因?yàn)槭兔眩?0～60℃）沸點(diǎn)較低，在室溫較高條件下展開，石油醚容易揮發(fā)，造成展開劑系統(tǒng)極性增大，斑點(diǎn)展距偏低，分離度不佳，因此，應(yīng)指導(dǎo)學(xué)生在適宜的實(shí)驗(yàn)溫度下操作。展開晾干后先置紫外光燈（365nm）下檢視游離蒽醌的橙黃色熒光斑點(diǎn)，然后置氨蒸氣中熏后，游離蒽醌斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。通過大黃等典型實(shí)例的帶教，讓學(xué)生參與檢驗(yàn)全過程，能加強(qiáng)學(xué)生對(duì)薄層色譜技術(shù)的掌握。

根據(jù)學(xué)生的實(shí)習(xí)時(shí)間及學(xué)習(xí)要求，本文對(duì)藥檢室中藥檢驗(yàn)的薄層色譜鑒別實(shí)習(xí)帶教模式進(jìn)行了探討，以期有效地提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)操作技能，提高實(shí)習(xí)質(zhì)量。

[1] 黃月純.藥檢室制劑檢驗(yàn)的實(shí)習(xí)帶教模式探討[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2011,11(5): 126-127.

[2] 國家藥典委員會(huì).中國藥典中藥材薄層色譜彩色圖集(第一冊(cè))[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:6.

[3] 國家藥典委員會(huì).中國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010,96 (130):22.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.18.047

1672-2779（2012）-18-0065-02

2012-07-14）