童學(xué)飛 王 浩 胡耀斐

湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北十堰 442012

清熱止帶膠囊，為我院知名中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，具有清熱藻濕，收斂止帶的作用。主要適應(yīng)證為：盆腔炎、陰道炎、膀胱炎、慢性子宮內(nèi)膜炎、陰道沾膜等婦科濕熱型赤白帶癥。我們建立了高效液相色譜（HPLC）法用于測定方中黃柏有效成分鹽酸小檗堿的含量[1]。本方法重現(xiàn)性好、簡便且準(zhǔn)確，可用于鹽酸小檗堿的質(zhì)量控制。

1 試藥與儀器

清熱止帶膠囊（十堰市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備，批號：101001、101002、101003 ），乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Scientific 公司），鹽酸小檗堿（中國藥品生物制品檢定所提供，批號20090902）；水為重蒸餾水。2487雙波長紫外檢測器；Waters高效液相色譜儀；Kudos SK3200H超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究選擇用Inertil ODS-3色譜柱，檢測波長為346nm；柱溫 35℃；流速1mL/min；乙腈-0.1%磷酸（1000mL磷酸溶液中含2g十二烷基磺酸鈉）(48:52)為流動(dòng)相。

2.2 溶液制備

①鹽酸小檗堿對照品適量需在100℃干燥5h的情況下精密稱取，并加流動(dòng)相制成每1mL中含0.1g的溶液，然后即得。

②取本品粉末約0.5g，精密稱定，精密加入流動(dòng)相50mL超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，過濾即得。

③陰性對照溶液的制備：按處方及制備工藝制成缺黃柏的陰性樣品。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

精密吸取供試品溶液、陰性對照溶液和對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，并記錄色譜圖，色譜見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

分置于 10mL 量瓶中精密量取對照品溶液 1、2、3、4、5mL，并用甲醇稀釋至刻度，分別吸取20μL，注入液相色譜儀測定峰面積積分值，得回歸方程為 Y＝11512.55+4617276.53x，r＝0.9999，測定結(jié)果表明，在0.0848-0.4240（μg）范圍內(nèi)鹽酸小檗堿的線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

連續(xù)進(jìn)樣5次來精密吸取對照品溶液20μL，分別測定峰面積，結(jié)果表明，RSD 為 0.37%（n=5）。

圖1 高效液相色譜A、對照品 B、樣品 C、陰性對照品Fig 1 HLPCA、samples B、phloridzin control C、negative control

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號：101001），每 0、2、4、6、8、10、12 小時(shí)，連續(xù)進(jìn)樣，依法測定峰面積，結(jié)果，RSD為0.89%（n=6）。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

在依照此法制備供試品溶液中精密稱取同一批號樣品 （批號：101001）5份，然后測定樣品中鹽酸小檗堿含量。結(jié)果，平均含量為1.6885mg/g,RSD為0.53%(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批號(批號101001)樣品適量，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定， 共 6份,1、2、3號樣品加入 0.47mg對照品,4、5、6號樣品加入0.94mg對照品,按供試品溶液的制備方法制備并進(jìn)樣測定，依據(jù)測得的含量計(jì)算回收率，結(jié)果詳見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab 1 Results of sample recovery test(n=6)

2.9 樣品含量測定

3批樣品中鹽酸小檗堿的含量分別為：1.6908、1.7105、1.6949mg/g。

3 討論

鹽酸小檗堿為口服常釋劑型。屬甲類醫(yī)保藥品。具有清熱藻濕，收斂止帶的作用。主要適應(yīng)證為：盆腔炎、陰道炎、膀胱炎、慢性子宮內(nèi)膜炎、陰道沾膜等婦科濕熱型赤白帶癥。本組實(shí)驗(yàn)平均回收率為98.9%，RSD=1.9%（n=6）。表明本方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于鹽酸小檗堿的質(zhì)量控制。

[1]王玉杰.RP-HPLC法測定中藥材黃柏中小檗堿的含量[J].中國中藥雜志，1995,20(7):425-426.

[2]國家藥典委員匯編.中華人民共和國藥典（一部）（2005年版）[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[3]李方實(shí)，俞斌，無機(jī)與分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].江蘇：東南大學(xué)出版社，2002.

[4]高素蓮，周寧國.現(xiàn)代分離純化與分析技術(shù)-在高分子材料研究中的應(yīng)用[M].北京：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，2004.

[5]姜宏，于維森，曲青.用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)確證酸奶中甜蜜素[J].職業(yè)與健康,2001(1)：123-124.

[6]盛旅，陳昌駿，丁振華，等.固相萃取-液相色譜質(zhì)譜法同時(shí)側(cè)定食品中磺胺類人工合成甜味劑[J].分析試驗(yàn)室,2006,1(2)：75-78.