李君海，徐 建，楊 波，王婷婷

(吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130012)

通脈顆粒標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第20冊(cè)(標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：WS3-B-0824-91)，由川芎、葛根、丹參3味藥材組成，具有活血通脈的功能，用于治療缺血性心腦血管疾病、動(dòng)脈硬化、腦血栓、腦缺血、冠心病、心絞痛等缺血性心腦血管疾病。原標(biāo)準(zhǔn)中未有含量測(cè)定項(xiàng)，因此本文采用高效液相方法測(cè)定了通脈顆粒中葛根素的含量，方法簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性好，可以達(dá)到全面控制通脈顆粒質(zhì)量的目的。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UItimate3000 紫外檢測(cè)器(德國(guó)戴安)；安捷倫1200紫外檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫)；Meltter AE240雙量程電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，AB204-E電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；色譜柱：依利特 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱。

1.2 試藥 甲醇為色譜純，水為重蒸水，乙醇為分析純。通脈顆粒(由修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供)；葛根素對(duì)照品(批號(hào)：110752-200511規(guī)格：20mg 供含量測(cè)定用)從中國(guó)食品藥品檢定研究院購(gòu)入。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：依利特C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-水(22∶78)，流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm，柱溫：30 ℃。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。葛根素峰與其他雜質(zhì)峰分離度不小于1.5。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取葛根素對(duì)照品約8.5 mg，精密稱定為8.48 mg，置50 mL量瓶中，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL含葛根素0.084 8 mg)。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率150 W，頻率40 KHz)30 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照樣品的制備 按處方稱取除葛根外的各藥，按其制備工藝制成空白制劑，再按“2.3”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照樣品溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照樣品溶液各5 μL，在上述色譜條件下，分別注入液相色譜儀。結(jié)果：葛根素與樣品中其他組分分離較好(與相鄰峰的分離度均>2.0)，陰性對(duì)照樣品在與葛根素對(duì)照品相同保留時(shí)間處未見(jiàn)吸收峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.6 線性關(guān)系范圍 精密吸取對(duì)照品溶液1、3、5、7、10、12、15、20 μL，按上述色譜條件分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=6.06X+0.0157 (r=1)，結(jié)果表明：葛根素在0.084 8～1.69 6 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 取本品(批號(hào):20100605)，由不同人員、不同時(shí)間，使用不同高效液相色譜儀，按2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件操作，測(cè)定葛根素的含量。結(jié)果：葛根素平均含量為6.71 mg/g，RSD%=0.4%，表明精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液(批號(hào)20100605)5 μL，分別于制備后0、4、8、12、18、24 h注入液相色譜儀中，測(cè)得葛根素峰面積。結(jié)果：葛根素峰面積平均值為48.479，RSD=0.17%，表明在24 h內(nèi)樣品的穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)20100605)6分，精密稱定，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定葛根素含量。結(jié)果：葛根素平均含量為6.73 mg/g，RSD=0.28%，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量同一批號(hào)的樣品(批號(hào)20100605,葛根素含量6.73 mg/g)0.5g，共6分，分別精密加入葛根素對(duì)照品溶液(0.376 mg/mL)8 mL。按2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定葛根素含量，計(jì)算回收率。結(jié)果供試品中葛根素的平均回收率為97.47%，RSD=1.00%，此方法準(zhǔn)確可行。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇[1]曾考察了以下流動(dòng)相系統(tǒng)：甲醇-水(25∶75)、甲醇-水(22∶78)進(jìn)行比較，結(jié)果以甲醇-水(22∶78)為流動(dòng)相，系統(tǒng)參數(shù)最佳。

3.2 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)考察 分別采用了3根不同品牌色譜柱(依利特-C18柱、Thermo-C18柱、Welch naterials-C18柱)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明系統(tǒng)適用參數(shù)符合要求。

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:312.