黃廣龍，吳欣洪，郭邦明，漆松濤

(1南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院，廣州 510515;2廣東省東莞市塘廈人民醫(yī)院)

顱咽管瘤是鞍區(qū)常見腫瘤，腫瘤與周圍重要結構粘連緊密，手術剝離困難，術后可遺留嚴重并發(fā)癥，且復發(fā)率較高，是神經(jīng)外科的難題之一。顱咽管瘤的炎癥反應是導致其與周圍組織粘連的重要原因［1，2］。IFN-α 和骨橋蛋白(OPN)都是重要的炎癥相關細胞因子，與腫瘤的發(fā)病密切相關。2010年5月～2012年5月，本研究觀察了顱咽管瘤組織中IFN-α、IFN-α 受體(INF-αR)及 OPN 的表達變化，并探討其意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集南方醫(yī)院神經(jīng)外科收治并手術切除，術后病理證實為顱咽管瘤的患者58例(顱咽管瘤組)，所有患者術前均未接受過放化療。其中男42例，女16例。年齡2～61(31±18.9)歲。造釉細胞型顱咽管瘤41例，鱗狀乳頭型17例。初發(fā)43例，復發(fā)15例。其中首次手術43例，術后復發(fā)再次手術者15例。另取12例正常腦組織標本(為同期腦腫瘤造瘺切除組織)作為對照組。

1.2 試劑 一抗為兔抗人IFN-α干擾素多克隆抗體(稀釋1∶200)，兔抗人IFN-αR多克隆抗體(稀釋1∶200)，鼠抗人 OPN 單克隆抗體(稀釋 1∶100)，用PBS替代一抗作為陰性對照。二抗為辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG。即用型快帶免疫組化EnvisionTM試劑盒。HE染色試劑盒。

1.3 組織學觀察 實驗前將標本從液氮罐中取出，經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)4 μm厚切片，進行HE染色。切片常規(guī)用二甲苯脫蠟，乙醇脫水，蘇木素染色1～2 min，自來水沖洗10 min，鹽酸乙醇分化30 s，自來水沖洗5 min，水洗返藍，伊紅液染色30 s～1 min。常規(guī)脫水，透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。

1.4 IFN-α、IFN-αR、OPN 的檢測 石蠟包埋標本塊以4 μm 厚切片分別進行 IFN-α、IFN-αR 及 OPN免疫組化染色。①EnvisionTM二步法免疫組化染色:按試劑盒說明書操作。將已知陽性片(采用Santa Cruz公司陽性對照片)設為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。②結果判定:以細胞核、細胞質被染成棕黃色或棕褐色為IFN-α、OPN陽性細胞，以細胞膜被染成棕黃色或棕褐色為IFN-αR陽性細胞。在400倍光鏡下每張切片隨機選取5個視野，計算每個視野區(qū)內(nèi)陽性細胞以及總細胞數(shù)，取平均值。陽性細胞百分比=(陽性細胞數(shù)/總細胞數(shù))×100%。陽性細胞百分比＜5%或被污染者為陰性(－)，5% ～20%為弱陽性(+)，21% ～50%為中度陽性(++)，＞50%為強陽性(+++);+、++、+++判定為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用Mann-WhitneyU檢驗。相關性分析采用Spearman相關分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 組織學觀察結果 41例造釉細胞型顱咽管瘤標本均可看到角蛋白小結和囊實性混合的上皮分化為特征，還有纖維化、鈣化、陳舊性出血和膽固醇沉積等退化性改變的特征性表現(xiàn)。17例鱗狀細胞型顱咽管瘤主要為成熟的鱗狀上皮細胞，細胞呈多角形，腫瘤只有實性結構呈乳突狀生長，沒有囊性表現(xiàn)和退化成分。顱咽管瘤組織間質中有血管分布，腫瘤組織中可見炎性細胞浸潤，腫瘤周圍腦組織可見膠質細胞增生。正常腦組織中未見炎性細胞聚集。

2.2 兩組 IFN-α、IFN-αR的表達比較 顱咽管瘤組IFN-α表達陽性共52例，陽性率89.7%，對照組2例弱陽性表達，陽性率17%，兩組相比，P＜0.05。造釉細胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中IFN-α陽性表達率分別為 92.68%(38/41)、82.35%(14/17)(P＜0.05)。復發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤組織中IFN-α陽性表達率分別為 93.33%(14/15)和88.37%(38/43)，兩者相比，P＜0.05。顱咽管瘤組 IFN-αR 表達陽性共54例，陽性率93.10%，對照組分別為1例和8%，兩組相比，P＜0.05。造釉細胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中IFN-αR陽性表達率分別為100%(41/41)、76.47%(13/17)(P＜0.05)。復發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤中IFN-α陽性表達率分別為100%(15/15)和 90.70%(39/43)，兩者相比，P＜0.05。顱咽管瘤組織中IFN-αR與IFN-α的表達呈正相關(rs=0.902，P＜0.01)。

2.3 兩組OPN表達情況 顱咽管瘤組OPN表達陽性共51例，陽性率87.93%，對照組未見表達，兩組相比，P＜0.05。造釉細胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中OPN陽性表達率分別為100%(41/41)、58.82%(10/17)(P＜0.05)。復發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤中OPN陽性表達率分別為93.33%(14/15)和86.04%(37/43)，P＜0.05。

2.4 顱咽管瘤組織中IFN-α與OPN表達的相關性顱咽管瘤組織中IFN-α與OPN的表達呈正相關(rs=0.814，P＜0.01)。

3 討論

顱咽管瘤是顱內(nèi)最常見的鞍區(qū)腫瘤之一，盡管在病理學上其屬于良性腫瘤，但是由于腫瘤組織與周圍重要結構如視神經(jīng)、視交叉、垂體柄、下丘腦、顱底動脈環(huán)等緊密粘連，使得手術全切除難度大，術后復發(fā)率高，術后并發(fā)癥嚴重，致殘率及病死率高［1，2］。臨床研究證明，顱咽管瘤的炎癥反應是導致其與周圍結構緊密粘連的一個重要原因［3～6］。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，在造釉細胞型顱咽管瘤中，腫瘤組織及腫瘤間質中炎癥細胞聚集，炎癥相關因子明顯增強，患者血清、腦脊液及囊液中炎癥相關的C反應蛋白明顯升高，都說明了造釉細胞型顱咽管瘤存在嚴重的炎癥反應［7～9］。

各種原因引起的炎癥介質的過度和(或)持續(xù)性釋放是急慢性炎性疾病的主要病理機制，IFN-α是重要的炎癥標記物，通過檢測IFN-α可以判斷炎癥的程度。同時，IFN-α具有抗腫瘤作用［10］，其可直接作用于腫瘤細胞，抑制原癌基因表達，誘導抑癌基因表達，抑制腫瘤細胞增殖。有學者［11］發(fā)現(xiàn)IFN-α可通過JAK-STAT信號通路，激活STAT蛋白家族，作用于IFN激活的反應原件(ISRE)，從而引發(fā)一系列IFN刺激基因的轉錄，如2'-5'腺苷酸合成酶(OAS)、Fas/FasL、XAF-1、DAP 激酶、TRAIL/Apo2L、Caspase-4、Caspase-8、IRFS、PML 等，從而促進細胞凋亡，抑制細胞增殖。亦有研究認為IFN-α的抗腫瘤效應與 p53、COX-2等相關［12］。IFN還可調節(jié)機體免疫，激活包括巨噬細胞、NK細胞、CD+4T細胞、CD+8T細胞、Th1細胞、樹突狀細胞等多種免疫細胞攻擊腫瘤細胞，使機體產(chǎn)生保護性免疫機制抑制腫瘤增殖［12］。IFN-α還有很強的抗血管形成作用，可通過下調VEGF、堿性成纖維細胞生長因子(BFGF)，抑制腫瘤血管生成，進而抑制腫瘤的生長［13～15］。IFN-α 發(fā)揮作用需要與 IFN-αR 結合。研究表明，IFN-αR在顱咽管瘤中有廣泛表達，在造釉細胞型表達高于在鱗狀乳頭型，在復發(fā)者中的表達較初發(fā)者更強，這與本研究結果一致。IFN-α與IFN-αR作為一個功能整體，所組成的信號系統(tǒng)可能參與了顱咽管瘤細胞的生長調控過程，但其具體作用及機制目前尚不明確［16］。

OPN是炎癥激活的重要因子，OPN通過對炎癥細胞的趨化作用誘導某些細胞因子的表達，從而促進炎癥的發(fā)生與發(fā)展［7，8］。本研究結果顯示，顱咽管瘤組織中OPN表達高于正常組織，且在造釉細胞型及復發(fā)的顱咽管瘤分別高于鱗狀乳頭型和初發(fā)者，顱咽管瘤組織中OPN與IFN-α的表達呈正相關，這表明IFN-α及其受體、OPN共同參與了顱咽管瘤的發(fā)生發(fā)展過程。本研究結果同時證實，顱咽管瘤發(fā)病過程中存在炎癥反應，且造釉細胞型較鱗狀乳頭型、復發(fā)者較初發(fā)者炎癥反應更重。

綜上，IFN-α、IFN-αR 及 OPN 在顱咽管瘤組織中高表達，三者共同參與了顱咽管瘤的發(fā)病，與腫瘤炎癥反應程度有關。在以后的治療中有望通過對IFN-α的干預，在術前減輕顱咽管瘤的炎癥反應，從而降低顱咽管瘤的手術風險，術后利用IFN-α對腫瘤生長的抑制作用降低腫瘤復發(fā)的幾率。

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