付 穎，王稚英，李 新

(1遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，遼寧錦州121004;2遼寧醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院)

烤瓷熔附金屬(PFM))全冠能完整恢復(fù)牙體的形態(tài)及功能，抗折力強(qiáng)，且顏色、外觀逼真，色澤穩(wěn)定，表面光滑，耐磨性和抗沖擊性強(qiáng)，是目前臨床上較為常用的牙齒修復(fù)體。鎳鉻合金是我國(guó)牙科最常用的合金，具有強(qiáng)度高、金瓷結(jié)合強(qiáng)度好以及價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)，但有牙冠橋頸部變色發(fā)暗之弊，甚至累及牙齦［1］。鈷鉻合金烤瓷牙屬于非貴金屬烤瓷牙中的一種，其優(yōu)點(diǎn)是具有較強(qiáng)的金屬穩(wěn)定性，耐腐蝕性較高，一般情況下不會(huì)出現(xiàn)黑色牙齦或牙齦出血的現(xiàn)象［2］。與貴金屬烤瓷修復(fù)體以及全瓷修復(fù)體相比，鈷鉻烤瓷修復(fù)體的費(fèi)用低很多。而與鎳鉻烤瓷修復(fù)體相比，鈷鉻烤瓷修復(fù)體又比較安全。2011年3月～2012年2月，我們通過給成年犬制作鎳鉻合金PFM冠和鈷鉻合金PFM冠修復(fù)體，觀察烤瓷熔附金屬對(duì)動(dòng)物牙齦組織的影響，為臨床牙修復(fù)體的設(shè)計(jì)及開發(fā)、PFM材料的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 金剛砂車針、硅橡膠印模、縮齦線、3M ESPE水門汀黏結(jié)劑、環(huán)氧樹脂。鎳鉻合金，鈷鉻合金。TUNEL試劑盒，DAB顯色試劑盒，LEICA EM UC6超薄切片機(jī)，JEM-1200EX型透射電子顯微鏡，ZEISS A1光學(xué)顯微鏡，CIAS-1000型細(xì)胞圖像分析儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇及分組 選擇清潔級(jí)、健康成年雄性雜種犬3只，年齡2歲，體質(zhì)量15～18 kg。每只犬有42顆恒齒。每只犬右側(cè)牙作為實(shí)驗(yàn)組，上頜選8顆牙制作鎳鉻合金PFM冠，下頜選8顆牙制作鈷鉻合金PFM冠;左側(cè)牙為正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(遼)2010-0002。

1.3 標(biāo)本的制作與采集 肌肉注射氯胺酮(0.4 mL/kg)對(duì)犬進(jìn)行麻醉。使用手用齦上齦下刮治器對(duì)3只犬進(jìn)行右側(cè)牙齦齦上齦下刮治，左側(cè)不作處理。1周后，對(duì)實(shí)驗(yàn)組犬牙分別進(jìn)行鎳鉻合金PFM冠和鈷鉻合金PFM冠修復(fù)術(shù)。8個(gè)月后，切取牙齦組織，手術(shù)術(shù)式相同。

1.4 牙齦組織觀察 ①光鏡下牙齦組織病理變化:切取每顆修復(fù)體對(duì)應(yīng)的犬牙齦及其對(duì)側(cè)健康牙齦一小塊，放入質(zhì)量濃度為4%的多聚甲醛固定液中固定24 h。常規(guī)乙醇脫水，石蠟包埋，制成5 μm厚切片，行HE染色，光鏡下觀察。②電鏡下牙齦組織病理變化:切取每顆修復(fù)體對(duì)應(yīng)的犬牙齦及其對(duì)側(cè)健康犬牙齦一小塊，置2.5%戊二醛緩沖溶液固定12 h以后，再出取1 mm3的牙齦組織，放入3%戊二醛緩沖溶液繼續(xù)固定2 h，再放入1%鋨酸固定1 h;梯度乙醇、丙酮脫水，環(huán)氧樹脂包埋。用超薄切片機(jī)切片，厚度為50 nm，經(jīng)醋酸雙氧鈾—檸檬酸鉛電子染色后，透射電鏡觀察，拍攝X線片觀察牙齦組織超微結(jié)構(gòu)的變化。

1.5 牙齦組織凋亡細(xì)胞的檢測(cè) 采用TUNEL法。每組隨機(jī)選擇6張牙齦組切片(取材及防脫切片的制作同免疫組化實(shí)驗(yàn))，顯微鏡下觀察細(xì)胞核中有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。每張切片選擇5個(gè)不重疊高倍視野(10×40)，采用CIAS-1000型圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。凋亡指數(shù)=(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù))×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 光鏡下牙齦組織病理變化 光鏡下觀察到實(shí)驗(yàn)組鈷鉻合金修復(fù)體牙齦組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和局部血管充血較少;鎳鉻合金修復(fù)體牙齦組織可見大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，局部血管充血明顯。正常對(duì)照組牙齦組織血管充血較輕，炎細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯。

2.2 電鏡下牙齦組織病理變化 電鏡下細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變以細(xì)胞核的變化為主，核染色質(zhì)邊聚固縮，形成半月形、環(huán)形、球形或不規(guī)則形的高電子密度的濃縮核;細(xì)胞體積明顯縮小，形狀改變。實(shí)驗(yàn)組鈷鉻合金修復(fù)牙的牙齦組織細(xì)胞核染色質(zhì)邊聚，鎳鉻合金修復(fù)體牙齦組織細(xì)胞早期凋亡，發(fā)生細(xì)胞核固縮。

2.3 凋亡細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組鎳鉻合金修復(fù)牙的牙齦組織的細(xì)胞凋亡數(shù)較多、鈷鉻合金修復(fù)牙的牙齦組織細(xì)胞凋亡數(shù)少，正常對(duì)照組未見凋亡細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組用鎳鉻合金PFM修復(fù)后，牙齦組織細(xì)胞凋亡指數(shù)為58.63%±9.42%;用鈷鉻合金PFM修復(fù)后，牙齦組織細(xì)胞凋亡指數(shù)為35.80%±7.58%;正常對(duì)照組牙齦組織細(xì)胞凋亡指數(shù)為4.96%±2.19%;前兩者相比，P＜0.05;前兩者與正常對(duì)照組相比，P均＜0.05。

3 討論

在烤瓷牙發(fā)明的最初一段時(shí)間里，牙齒修復(fù)體主要由貴金屬(黃金)制作，為了降低烤瓷牙修復(fù)的費(fèi)用，人們開始研究其他烤瓷用合金——賤金屬烤瓷用合金。最早鎳鉻合金被廣泛應(yīng)用，它含有鎳和鈹，鎳金屬相對(duì)于別的金屬來說活性較高、具有致敏性，鈹具有較強(qiáng)的致癌性，長(zhǎng)期使用產(chǎn)生牙齦黑線的幾率較高，并且還有輕微的毒性反應(yīng)，不利于人體健康。另外，鎳鉻合金鑄造后收縮率較大，邊緣密合性相對(duì)較差，而且由于其具有一定的腐蝕性，在人造冠的齦緣易形成黑線，影響美觀［3］。

鈷鉻合金是針對(duì)鎳和鈹?shù)亩拘远_發(fā)的，有很好的生物相容性［4］，相比鎳鉻合金，其鈷含量更高，一般為25%，因?yàn)殁捄扛?，所以其耐腐蝕性比鎳鉻合金好，金屬穩(wěn)定性更好，出現(xiàn)牙齦黑線的幾率要小許多，并且無毒、無致癌物質(zhì)、和瓷的結(jié)合性更好，更加不易崩瓷。鈷鉻烤瓷牙兼具金屬的強(qiáng)度和瓷的美觀，其顏色、外觀、質(zhì)感逼真，色澤穩(wěn)定，表面光滑，耐磨性強(qiáng)，不易變形，抗折力強(qiáng)，屬長(zhǎng)久性修復(fù)體［5，6］。與貴金屬烤瓷牙以及全瓷牙相比，鈷鉻烤瓷牙的費(fèi)用低很多。與鎳鉻烤瓷牙相比，鈷鉻烤瓷牙又比較安全。

本研究結(jié)果表明，用鎳鉻合金作為金屬烤瓷修復(fù)體，犬牙齦組織可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，局部血管出血;而用鈷鉻合金作為金屬烤瓷修復(fù)體，犬牙齦組織光鏡炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及局部血管出血較少。這一結(jié)果與文獻(xiàn)［7～9］報(bào)道相符。鎳鉻合金PFM修復(fù)犬牙對(duì)犬牙齦組織超微結(jié)構(gòu)的影響較大，而鈷鉻合金PFM修復(fù)犬牙對(duì)犬牙齦組織超微結(jié)構(gòu)的影響較小。兩種金屬烤瓷修復(fù)體修復(fù)后周圍牙齦組織都存在著不同程度的細(xì)胞凋亡。目前，鈷鉻合金中鈷含量較鎳鉻合金高，一般為25%。因?yàn)楹捔枯^高，其耐腐蝕性能較鎳鉻合金好，并且金瓷結(jié)合良好，又因?yàn)楹休^多鉻，其熔點(diǎn)較高。與鎳鉻合金相比，鈷鉻合金對(duì)牙齦組織的影響較少。表明選擇鈷鉻合金制作PFM基底冠，有利用牙齦的健康。

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