劉大鷹 胡灼君 農(nóng)天雷 林 敏

(柳州市柳鐵中心醫(yī)院呼吸科，廣西 柳州 545007)

肺癌的療效與其早診斷密切相關(guān)，傳統(tǒng)的檢查方法如影像學(xué)、纖維支氣管鏡、細(xì)胞學(xué)等對(duì)肺癌的早期診斷存在困難，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)病變就已經(jīng)是肺癌晚期。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)對(duì)肺癌的診斷具有一定的意義〔1，2〕，但研究對(duì)象多為單一標(biāo)本，針對(duì)不同標(biāo)本聯(lián)合檢測(cè)CYFRA21-1對(duì)肺癌診斷的意義少有報(bào)道。本文對(duì)臨床上容易獲得的痰液、血清和支氣管肺泡灌洗液(BALF)標(biāo)本進(jìn)行CYFRA21-1檢測(cè)，探討這些標(biāo)本聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 本研究98例患者均是2009年1月至2011年2月在我院住院的患者。試驗(yàn)組為52例未經(jīng)治療的肺癌患者，男30例，女22例，年齡28～91〔平均(63±32)〕歲;其中鱗癌19例，腺癌22例，小細(xì)胞癌9例，大細(xì)胞癌2例;TNM分期:Ⅰ期+Ⅱ期17例，Ⅲ期+Ⅳ期35例。對(duì)照組為肺良性病變46例，男25例，女21例，年齡19～87〔平均(52±35)〕歲;其中肺炎28例，肺結(jié)核15例，其他3例。兩組患者均無(wú)同時(shí)合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤證據(jù)。

1.2 方法

1.2.1 痰標(biāo)本的收集和處理

1.2.1.1 選擇清潔干燥和滅菌處理后的帶蓋樣本盒收集痰標(biāo)本 患者晨起后用清水漱口，深咳出1～2口痰入樣本盒，或纖支鏡檢查后留痰，加蓋并在0.5 h內(nèi)送檢，無(wú)痰患者用3%NaCl溶液超聲霧化留痰送檢。痰標(biāo)本涂片鏡檢應(yīng)有大量上皮細(xì)胞及塵細(xì)胞，否則重留。

1.2.1.2 痰標(biāo)本消化處理 估計(jì)痰標(biāo)本量，加入等量混勻的胰酶懸液，用消毒棉簽攪動(dòng)痰液，使兩者充分接觸，靜置30 min至液化無(wú)痰絲，吸取消化后痰液于試管中，3 000 r/min離心5 min，取上層清液待測(cè)。

1.2.1.3 胰酶消化液配制 稱取12 g胰蛋白酶溶于200 ml蒸餾水配成6%濃度，再用2%NaOH調(diào)至pH=8，混勻后成懸液，4℃保存?zhèn)溆?，有效? w，如消化液內(nèi)出現(xiàn)沉淀物不能再使用，必須重新配制。臨用前在37℃水箱溫育10 min。

1.2.2 血液標(biāo)本 所有入選患者均在入院3 d內(nèi)抽取外周空腹靜脈血5 ml，3 000 r/min離心分離血清，至-20℃保存待測(cè)。1.2.3 BALF BALF在刷檢及活檢之前進(jìn)行，以避免血液的污染。將纖支鏡前端嵌入病灶所在肺段中，灌注生理鹽水20 ml后立即負(fù)壓回收BALF，反復(fù)3次，所有回收的灌洗液立即經(jīng)過(guò)尼龍網(wǎng)過(guò)濾，3 000 r/min離心5 min，收集上層清液至-20℃保存待檢。

1.2.4 試劑及儀器 采用微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)CYFRA21-1水平。儀器為Access 2全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀(美國(guó)貝克曼公司);試劑使用配套原裝試劑。胰蛋白酶購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;2%NaOH:自配。

1.2.5 判斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)試劑盒給出的正常臨界值為:CYFRA21-1＜3.5 ng/ml。高于臨界值判定為陽(yáng)性病例。聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，如有任何一個(gè)標(biāo)本CYFRA21-1檢測(cè)結(jié)果大于正常范圍，即定為陽(yáng)性病例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以x±s表示，組間比較χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 不同標(biāo)本CYFRA21-1的檢測(cè)結(jié)果 與良性病變組相比，肺癌組三種標(biāo)本腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1檢測(cè)的濃度均明顯升高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。如果以高于臨界值即為陽(yáng)性病例，肺癌組陽(yáng)性率最高為BALF(33/52，63.5%)，最低為血清(20/52，38.5%);但良性病變組也有一些假陽(yáng)性(6.5%～17.4%)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩組陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，肺癌組三種標(biāo)本CYFRA21-1檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于良性病變組。肺癌組痰液、BALF和血液標(biāo)本之間的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.52，P=0.04)，進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)血液和BALF標(biāo)本之間的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.50，P=0.01)，表明 BALF標(biāo)本檢測(cè) CYFRA21-1對(duì)肺癌的診斷意義更大。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)肺良性病變組不同標(biāo)本之間CYFRA21-1檢測(cè)的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.55，P=0.28)。見(jiàn)表1。

表1 不同標(biāo)本CYFRA21-1的檢測(cè)結(jié)果(μg/L)

2.2 聯(lián)合不同標(biāo)本檢測(cè)CYFRA21-1的準(zhǔn)確性、敏感性、特異性 不同標(biāo)本聯(lián)合檢測(cè)CYFRA21-1可以提高陽(yáng)性率。總的來(lái)說(shuō)，與單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)相比，不管是兩個(gè)標(biāo)本聯(lián)合，還是三個(gè)標(biāo)本聯(lián)合，其敏感性均逐漸增加，但特異性也有所下降，但下降幅度不大。同時(shí)，聯(lián)合檢測(cè)3個(gè)標(biāo)本敏感性最高(80.8%)，且特異性下降不明顯(78.3%)，與單個(gè)標(biāo)本比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＞3.87，P ＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同標(biāo)本單個(gè)和聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確性、敏感性、特異性(%)

3 討論

腫瘤標(biāo)志物是反映腫瘤存在的化學(xué)類物質(zhì)。它們或不存在于正常成人組織而僅見(jiàn)于胚胎組織，或在腫瘤組織中的含量大大超過(guò)在正常組織的含量，它們的存在或量變可以反映出腫瘤組織的發(fā)生、性質(zhì)、細(xì)胞的分化及其功能，也可以對(duì)腫瘤的診斷、分類、治療、評(píng)價(jià)療效、預(yù)后判斷提供指導(dǎo)。CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19(CK-19)的片段，是對(duì)肺癌診斷有價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物。CK-19是上皮細(xì)胞中間絲的特征性蛋白組分，為上皮細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞骨架的組分之一〔3〕。當(dāng)上皮細(xì)胞惡變時(shí)，角蛋白含量增加。肺癌以上皮細(xì)胞惡性增生為特征，當(dāng)細(xì)胞分裂增生時(shí)激活的蛋白酶加速了細(xì)胞角蛋白的降解，CK-19的可溶性片段CYFRA21-1釋放，使其局部含量增加，并可進(jìn)入血液循環(huán)，臨床上就可以檢測(cè)到其含量增高〔4〕。因其經(jīng)常出現(xiàn)于肺部組織，且特別易出現(xiàn)在與肺部惡性腫瘤的結(jié)合處，是用于非小細(xì)胞肺癌檢測(cè)的新一代腫瘤標(biāo)志物。

本文進(jìn)一步比較不同標(biāo)本檢測(cè)CYFRA21-1的陽(yáng)性率差異時(shí)發(fā)現(xiàn)，肺癌組陽(yáng)性率最高，最低為血清。比較肺癌組痰液、BALF和血液標(biāo)本之間的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)血液和BALF標(biāo)本之間的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明BALF標(biāo)本檢測(cè)CYFRA21-1對(duì)肺癌的診斷意義更大。當(dāng)肺部發(fā)生癌變時(shí)，癌細(xì)胞分泌或代謝產(chǎn)生的腫瘤標(biāo)志物首先排泄到腫瘤細(xì)胞表面進(jìn)入局部支氣管肺泡內(nèi)，然后再吸收進(jìn)入血液循環(huán)中，再被血液稀釋，濃度進(jìn)一步下降。當(dāng)疾病早期腫瘤標(biāo)志物產(chǎn)生量較少時(shí)，在血清中含量低，難以檢出，所以BALF中腫瘤標(biāo)志物比血清中出現(xiàn)早、濃度更高。在本實(shí)驗(yàn)中肺癌組BALF標(biāo)本腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1濃度明顯高于血液標(biāo)本(P=0.01)，也說(shuō)明了這一點(diǎn)。BALF作為研究肺部疾病的一種方法，其關(guān)鍵作用是能在活體狀態(tài)下獲得病變部位的細(xì)胞釋放液，因而B(niǎo)ALF作為肺癌標(biāo)志物的標(biāo)本來(lái)源對(duì)肺癌病變的研究有一定的意義。

由于各種免疫標(biāo)記技術(shù)的快速發(fā)展，所檢腫瘤標(biāo)志物越來(lái)越多，對(duì)腫瘤的早期診斷、觀察評(píng)價(jià)治療效果及判斷預(yù)后具有極大意義〔5，6〕。由于目前尚未發(fā)現(xiàn)肺癌特異性抗原，用于檢測(cè)的肺癌標(biāo)志物均為腫瘤相關(guān)物質(zhì)，單一的血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)肺癌診斷的敏感性、特異性均難以達(dá)到理想水平，其原因是一些良性病變也能出現(xiàn)程度不同的陽(yáng)性反應(yīng)，即便是腫瘤本身也常可由于在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的各種因素而呈一過(guò)性或階段性陰性反應(yīng)。所以多數(shù)學(xué)者主張多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)以提高肺癌診斷的陽(yáng)性率〔7，8〕。本項(xiàng)目針對(duì)不同標(biāo)本聯(lián)合檢測(cè)CYFRA21-1的研究發(fā)現(xiàn)，不同標(biāo)本聯(lián)合檢測(cè)CYFRA21-1可以提高靈敏度?？偟膩?lái)說(shuō)，與單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)相比，不管是兩個(gè)標(biāo)本，還是三個(gè)標(biāo)本聯(lián)合，其敏感性均逐漸增加，但特異性也有所下降，不過(guò)下降幅度不大。同時(shí)聯(lián)合檢測(cè)3個(gè)標(biāo)本敏感性最高，且特異性下降不明顯，與單個(gè)標(biāo)本比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

總之，本研究選擇的痰液、血清、BALF均是臨床上常見(jiàn)且容易獲得的標(biāo)本，在臨床中對(duì)懷疑肺癌的患者進(jìn)行CYFRA21-l檢測(cè)時(shí)，以血清為標(biāo)本的檢測(cè)日益成熟，而以BALF和痰液為標(biāo)本的檢測(cè)亦有重要的意義，同時(shí)聯(lián)合三個(gè)標(biāo)本檢測(cè)CYFRA具有較高的靈敏度和特異度，值得臨床上重視。

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