何全磊，苗芳，李春玲

（西北農(nóng)林科技大學(xué)生命學(xué)院，陜西 楊凌712100）

生物體內(nèi)的自由基主要包括O2－·，·OH，以及H2O2等［1］，它們參與細(xì)胞調(diào)節(jié)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等活動(dòng)［2］，但也會(huì)破壞體內(nèi)的大分子如DNA，蛋白質(zhì)和脂類(lèi)［3］，同時(shí)還與衰老，癌癥等疾病有關(guān)［4］，生物體內(nèi)也有一系列的酶和小分子防御系統(tǒng)［5－7］，但在病理情況下，自由基的清除無(wú)效仍決定細(xì)胞尤其是細(xì)胞膜的損傷程度［8，9］?？寡趸镔|(zhì)可以通過(guò)一系列途徑清除自由基［10］，因而顯得尤其重要。人工合成的抗氧化劑如丁基羥基茴香醚（butyl hydroxy anisd，BHA）、2，6－二叔丁基－4－甲基苯酚（2，6－di－tert－butyl－4－methylp－h(huán)enol，BHT）等有一定的副作用，因此尋找天然抗氧化物質(zhì)成為研究的熱點(diǎn)。

毛細(xì)辛（Asarum himalaicum）是馬兜鈴科（Aristolochiaceae）細(xì)辛屬（Asarum）植物［11］，為傳統(tǒng)中藥，有發(fā)表散寒，鎮(zhèn)咳，止痛，祛痰功效，還可以提取芳香油。

以往對(duì)于毛細(xì)辛的研究主要集中在揮發(fā)油部分，據(jù)羅文蓉和牛永紅［12］報(bào)道，毛細(xì)辛中揮發(fā)油含量?jī)H為0.5%，且揮發(fā)油成分中甲基丁香酚（methyleugenol）、欖香脂素（elemicin）、黃樟醚（safrole）為各種細(xì)辛所共有，其中以欖香脂素為最多。毛細(xì)辛揮發(fā)油成分的藥理作用以鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱及局麻作用為主［13］，目前為止，未見(jiàn)關(guān)于毛細(xì)辛揮發(fā)油成分抗氧化功能的報(bào)道。對(duì)于非揮發(fā)油部分的成分及抗氧化能力研究報(bào)道也很少。謝百波等［14］利用溶劑提取、色譜技術(shù)等手段從毛細(xì)辛全草中提取鑒定了15個(gè)化合物，所有化合物均首次從毛細(xì)辛中分離得到，其中幾個(gè)化合物有很強(qiáng)的抗氧化活性。

通過(guò)50%乙醇粗提和不同極性溶劑萃取的方法對(duì)毛細(xì)辛全草進(jìn)行提取分離，采用多種抗氧化活性檢測(cè)方法綜合評(píng)價(jià)不同溶劑提取物的抗氧化能力，為毛細(xì)辛作為天然抗氧化劑的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品的采集與制備 毛細(xì)辛全草于2010年6月采自秦嶺南坡寧陜縣境內(nèi)的平和梁，自然陰干后粉碎成細(xì)末，裝瓶備用。

實(shí)驗(yàn)的主要提取分離和抗氧化活性測(cè)定工作在2011年5－7月間完成，不同濃度提取物的處理均重復(fù)3次。

1.1.2 主 要 試 劑 2，6－二 叔 丁 基－4－甲 基 苯 酚 （2，6－di－tert－butyl－4－methylp－h(huán)enol，BHT）、吩 嗪 硫 酸 甲 酯（phenazlne methosulfate）、鄰二氮菲（1，10－phenanthrollne）從上海阿拉丁試劑有限公司購(gòu)買(mǎi)；還原型輔酶I二鈉（NADH I Na2）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；1，1－二苯基－2－苦苯肼自由基（1，1－diphenyl－2－plcrylhydrazyl radical，DPPH·）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；氯化硝基四氮唑藍(lán)（nitrotetrazolium blue chloride，NBT）購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 提取物制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取毛細(xì)辛粉末80g，置于索氏提取器中，以50%的乙醇、料液比為1∶12（g／mL）進(jìn)行回流提取2h，提取3次，合并提取液，過(guò)濾，減壓濃縮得到乙醇浸膏［15］。稱(chēng)量浸膏干重，然后將浸膏轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加200mL蒸餾水制成懸浮液。依次用等體積的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每級(jí)重復(fù)3次。最后得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物。

1.3 提取物抗氧化活性的測(cè)定

分別將毛細(xì)辛4種溶劑提取物（石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提物）溶于體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇中，配制成質(zhì)量濃度為0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0mg／mL的溶液（具體濃度根據(jù)試驗(yàn)預(yù)試調(diào)整），同樣也將BHT配制成以上對(duì)應(yīng)濃度梯度的溶液。

DPPH· 清除能力測(cè)定參考Sarikurkcu等［16］的方法；·OH清除能力的測(cè)定參照 Wei等［17］的方法并稍作改動(dòng)，將試驗(yàn)中用到的H2O2體積分?jǐn)?shù)改為0.1%，鄰二氮菲和FeSO4的濃度改為7.5mmol／L；O2－·清除能力的測(cè)定采用Ozsoy等［18］的方法，提取物對(duì)金屬離子的螯合能力測(cè)定參照Gül9in和Berashvili［19］的方法。提取物對(duì)自由基的清除能力用清除率和IC50值表示。其中提取物對(duì)DPPH·、O2－·的清除和對(duì)金屬離子的螯合均適用如下公式：清除率（或螯合率）＝［（A0－A1）／A0］×100%；其中，A0為陰性對(duì)照（用溶劑代替待測(cè)樣品）在特定波長(zhǎng)下的吸光度，A1為待測(cè)樣品在特定波長(zhǎng)下的吸光度；·OH的清除率公式為：清除率＝［（As－Ap）／（Ab－Ap）］×100%；其中，As為待測(cè)樣品在536nm波長(zhǎng)下的吸光度，Ap為用溶劑代替待測(cè)樣品在536nm波長(zhǎng)下的吸光度，Ab為用溶劑代替待測(cè)樣品和H2O2時(shí)在536nm波長(zhǎng)下的吸光度。

IC50值是清除率（或螯合率）為50%時(shí)的樣品質(zhì)量濃度。IC50值越大，表明該提取物清除自由基能力（或螯合金屬離子能力）越弱，IC50值越小，表明該提取物清除自由基能力（或螯合金屬離子能力）越強(qiáng)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有測(cè)試重復(fù)3次，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（－x±s）”表示，采用Origin 8.5及Excel對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 毛細(xì)辛不同溶劑提取物清除DPPH·活性

DPPH·是一種非常穩(wěn)定的合成自由基，可以從黃酮類(lèi)化合物中吸收質(zhì)子變成黃色，進(jìn)而通過(guò)吸光值的變化反映樣品對(duì)自由基的清除能力。黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性與其清除DPPH·的能力呈正相關(guān)［20］。

毛細(xì)辛乙酸乙酯、正丁醇、水和石油醚提取物均具有清除DPPH·的能力（圖1），4種提取物相比，乙酸乙酯和正丁醇提取物清除DPPH·的能力較強(qiáng)，而石油醚提取物清除DPPH·的能力最弱。乙酸乙酯、正丁醇、水和石油醚提取物清除DPPH·的IC50值分別為0.376，0.422，1.294和2 334.231mg／mL，均小于陽(yáng)性對(duì)照BHT的IC50值（0.312mg／mL）。根據(jù)IC50值的大小，毛細(xì)辛4種溶劑提取物和對(duì)照BHT清除DPPH·的能力大小順序?yàn)椋築HT＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞水提取物＞石油醚提取物。

2.2 毛細(xì)辛不同溶劑提取物清除·OH活性

·OH是已知最強(qiáng)的氧化劑，幾乎可以與所有細(xì)胞成分發(fā)生反應(yīng)，對(duì)生物體危害極大［21］。通過(guò)Fenton反應(yīng)體系產(chǎn)生·OH，進(jìn)而可以測(cè)定各提取液對(duì)它的清除能力。

毛細(xì)辛4種溶劑提取物均具有清除·OH的能力（圖2），且隨著提取物濃度的升高，清除·OH的能力增強(qiáng)。毛細(xì)辛正丁醇、乙酸乙酯、石油醚和水提取物以及對(duì)照BHT的IC50值分別為0.776，0.781，2.082，4.325和0.266 mg／mL，依據(jù)IC50值的大小，毛細(xì)辛4種溶劑提取物和對(duì)照BHT清除·OH的能力大小順序依次為：BHT＞正丁醇提取物＞乙酸乙酯提取物＞石油醚提取物＞水提取物。正丁醇和乙酸乙酯提取物清除·OH的能力比較接近，而水提取物對(duì)·OH的清除能力最弱。

2.3 毛細(xì)辛不同溶劑提取物清除O2－·的活性

超氧陰離子自由基（O2－·）是分子氧的單電子還原產(chǎn)物，極不穩(wěn)定，具有高的反應(yīng)活性，在食品、化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域都受到廣泛關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)采用硝基四氮唑藍(lán)還原法，通過(guò)檢測(cè)吸光度的變化確定提取物清除O2－·的能力大小。

毛細(xì)辛乙酸乙酯、正丁醇、水和石油醚提取物均具有清除O2－·的能力（圖3），并且清除能力與提取物濃度呈量效關(guān)系。毛細(xì)辛乙酸乙酯、正丁醇、水和石油醚提取物的IC50分別為0.297，0.365，0.988和3.965mg／mL，依據(jù)IC50值大小，毛細(xì)辛4種溶劑提取物清除O2－·的能力大小順序?yàn)橐宜嵋阴ヌ崛∥铮菊〈继崛∥铮舅崛∥铮臼兔烟崛∥?。毛?xì)辛乙酸乙酯提取物清除O2－·的能力與對(duì)照BHT比較接近，它們的IC50值分別為0.297和0.296mg／mL。

圖1 毛細(xì)辛不同溶劑提取物清除DPPH·的活性Fig.1 The DPPH·scavenging activity of different solvent extracts of A.himalaicum

圖2 毛細(xì)辛不同溶劑提取物對(duì)·OH清除活性Fig.2 The hydroxyl free radical scavenging activity of different solvent extracts of A.himalaicum

2.4 毛細(xì)辛不同溶劑提取物對(duì)金屬離子的螯合活性

很多金屬離子在生物體內(nèi)作為脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)催化酶的活性部位，對(duì)這些離子的螯合作用在一定程度上可以降低體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。因而提取物對(duì)金屬離子的螯合能力從另一方面反映了它的抗氧化能力。

毛細(xì)辛4種溶劑提取物均對(duì)金屬離子有螯合作用，而且水提取物具有較高的金屬離子螯合能力，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)對(duì)照BHT對(duì)金屬離子的螯合能力（圖4）。毛細(xì)辛水、乙酸乙酯、正丁醇和石油醚提取物對(duì)金屬離子螯合能力的IC50值分別為0.026，0.528，0.805和26.050mg／mL，BHT的IC50值為0.373mg／mL。依據(jù)IC50值的大小，毛細(xì)辛4種溶劑提取物和對(duì)照BHT對(duì)金屬離子的螯合能力大小順序依次為：水提取物＞BHT＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物。

3 結(jié)論與討論

黃酮類(lèi)化合物是目前研究最多的一類(lèi)抗氧化物，它們多具有酚羥基，易溶于水、甲醇、乙醇等極性強(qiáng)的溶劑，且多與糖類(lèi)形成黃酮苷類(lèi)物質(zhì)。按照劉璐等［22］的方法，測(cè)得毛細(xì)辛提取物的總黃酮含量為6.43%。馮濤和莊海寧［23］研究表明：有游離3－OH 、5，7－間－二羥基，3’，4’－兒茶素（二羥基）、2－3雙鍵、4－氧代基團(tuán)的黃酮類(lèi)化合物要比其相應(yīng)沒(méi)有這些結(jié)構(gòu)特征的化合物的抗氧化活性強(qiáng)，糖苷類(lèi)取代基會(huì)降低黃酮類(lèi)化合物的抗氧化活性。謝百波等［14］從毛細(xì)辛中分離鑒定的15種化合物，其中（2S）－柚皮素－5，7－二－O－β－D－吡喃葡萄糖苷 （2S－naringenin 5，7－di－O－β－D－pyranosylglucoside）屬于黃酮類(lèi)化合物，該化合物有4’－OH 且5－和7－位被吡喃葡萄糖基取代，因而具有一定的抗氧化活性。據(jù)該文獻(xiàn)報(bào)道，毛細(xì)辛乙酸乙酯部分含有6個(gè)馬兜鈴酸衍生物，4－羥基苯甲酸（4－h(huán)ydroxybenzoic acid）、3，4－二 羥 基 苯 甲 酸 （3，4－dihydroxybenzoic acid）和 4－羥 基 肉 桂 酸 （4－h(huán)ydroxycinnamic acid）。譚榀新等［24］研究表明：酚酸類(lèi)物質(zhì)中的羥基苯甲酸及其衍生物、羥基肉桂酸（羥基苯丙烯酸）及其衍生物均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，其活性與酚羥基有關(guān)。毛細(xì)辛正丁醇部分所含的化合物是（2S）－柚皮素－5，7－二－O－β－D－吡喃葡萄糖苷，屬于黃酮類(lèi)物質(zhì)，具有較強(qiáng)的抗氧化活性。本研究表明，毛細(xì)辛全草的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物均對(duì)DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基具有較強(qiáng)的清除能力，根據(jù)以上文獻(xiàn)資料可以推斷，毛細(xì)辛全草乙酸乙酯提取物的抗氧化活性與4－羥基苯甲酸、3，4－二羥基苯甲酸和4－羥基肉桂酸有關(guān)，而毛細(xì)辛全草正丁醇提取物的抗氧化活性與（2S）－柚皮素－5，7－二－O－β－D－吡喃葡萄糖苷有關(guān)。

圖3 毛細(xì)辛不同溶劑提取物對(duì)O2－·的清除活性Fig.3 The superoxide anion free radical scavenging activity of different solvent extracts of A.himalaicum

圖4 毛細(xì)辛不同溶劑提取物金屬離子螯合能力Fig.4 The metal ion chelating power of different solvent extracts of A.himalaicum

毛細(xì)辛在陜西和甘肅等地作為藥物細(xì)辛使用，國(guó)內(nèi)外對(duì)其研究較少，但細(xì)辛屬植物在含有的天然產(chǎn)物成分和化學(xué)性質(zhì)方面都有很多的相似性。如謝百波等［14］的研究發(fā)現(xiàn)馬兜鈴內(nèi)酰胺I（aristololactam I）和（2S）－柚皮素－5，7－二－O－β－D－吡喃葡萄糖苷在多種細(xì)辛屬植物 （A.longerhizomatosum的根莖和根、A.maximum的根、A.ichangense以及A.canadense全草）中均有發(fā)現(xiàn)，故認(rèn)為這兩個(gè)成分很可能是該屬植物的共有成分。

毛細(xì)辛及其他細(xì)辛屬植物在揮發(fā)油組成和非揮發(fā)性成分上都很相似，所以它們的藥理作用也很相似。通過(guò)分析國(guó)內(nèi)外對(duì)其他細(xì)辛的研究就可以對(duì)毛細(xì)辛藥用價(jià)值有所了解。

Dan等［25］的研究發(fā)現(xiàn)北細(xì)辛（A.heterotropoidesvar.mandshuricum）的揮發(fā)油對(duì)5種植物病原菌有光譜抗菌效果，尤其對(duì)惡疫霉（phytophthora cactorum）有最佳殺滅效果，揮發(fā)油中發(fā)揮生物活性的主要是甲基丁香酚（約占揮發(fā)油質(zhì)量的59.42%）。毛細(xì)辛的揮發(fā)油含量約為北細(xì)辛的1／5［26］，且扈成浩等［27］的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)毛細(xì)辛揮發(fā)油主要成分與北細(xì)辛相近，而以欖香脂素為主，那么可以推知毛細(xì)辛揮發(fā)油對(duì)植物病原菌也應(yīng)有抗菌效果，只是可能稍弱，具體的結(jié)果仍需要實(shí)驗(yàn)支持。

Cai等［28］的研究發(fā)現(xiàn)，毛細(xì)辛、青城細(xì)辛（A.splendens）和皺花細(xì)辛（A.crispulatum）95%的乙醇提取物或水提物對(duì)4種腫瘤細(xì)胞株（HL－60，BGC－823，KB和Bel－7402）中的一或兩種有選擇性的細(xì)胞毒活性，這為開(kāi)發(fā)毛細(xì)辛的抗腫瘤藥性提供了指導(dǎo)。

前文已提到毛細(xì)辛具有鎮(zhèn)痛、解熱等藥理作用，但是其作用的機(jī)理尚不清除。Kim等［29］研究發(fā)現(xiàn)華細(xì)辛（A.sieboldii）的甲醇提取物通過(guò)激活類(lèi)鴉片受體（opioid receptor）同時(shí)抑制血管緩激肽（bradykinin）和組胺調(diào)節(jié)的機(jī)體反應(yīng)來(lái)發(fā)揮鎮(zhèn)痛和抗發(fā)炎作用。毛細(xì)辛與華細(xì)辛同屬，其鎮(zhèn)痛和解熱機(jī)理或許可以從中得到啟示。

在抗氧化研究方面，Iwashinaa等［30］研究75種廣義細(xì)辛屬植物的黃酮組成，發(fā)現(xiàn)了3個(gè)查爾酮和1個(gè)橙酮。3個(gè)查爾酮為：柑橘酮－2’，4’－二－O－葡糖苷，柑橘酮－4，2’，4’－三－O－葡糖苷，柑橘酮－4－O－葡糖苷（chalcononaringe－nin 2，4’－di－O－glucoside，4，2’，4’－tri－Oglucoside，4－O－glucoside）；1個(gè)橙酮鑒定為金魚(yú)草素－4，6－二－O－葡糖苷（aureisidin 4，6－di－O－glucoside）。此外，還發(fā)現(xiàn)一些黃酮醇類(lèi)物質(zhì)，它們是山奈酚－3，7－O－葡糖苷（kaempferol 3，7－O－glycoside），槲皮素（quercetin），異鼠李醇（isorhamnetin），黃酮，芹菜苷元－6，8－二－C－葡糖苷 （apigenin 6，8－di－C－glycoside），黃烷酮，柚苷－5，7－二－O－葡糖苷 （naringenin 5，7－di－O－glucoside），呫噸酮（xanthone）和芒果甙（mangiferin）。這些黃酮類(lèi)物質(zhì)都有一定的抗氧化活性。

毛細(xì)辛中含有 （2S）－柚皮素－5，7－二－O－β－D－吡喃葡萄糖苷，Lin和 Chiou［31］的研究顯示柚皮素對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 （ARPE219）和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 （HUVEC）有抗氧化作用，當(dāng)上述細(xì)胞面臨缺氧或者受到NaN3和H2O2氧化脅迫時(shí)，一定濃度的柚皮素能提高細(xì)胞的生存率，同時(shí)對(duì)這兩種細(xì)胞均有抗氧化作用。那么，毛細(xì)辛提取物能否通過(guò)發(fā)揮其抗氧化活性來(lái)治療老年視網(wǎng)膜黃斑變性將是一個(gè)令人期待的問(wèn)題。

盡管毛細(xì)辛及其他細(xì)辛屬植物在醫(yī)藥方面的巨大價(jià)值和潛能，但是在實(shí)際用藥過(guò)程中，仍然不得不面對(duì)一個(gè)頭疼的問(wèn)題：它們的毒性。Schaneberg和Khan［32］的研究發(fā)現(xiàn)：細(xì)辛屬植物具有腎毒性并可能致命的原因是它們都含有馬兜鈴酸 （aristolochic acid）I和II。因而，將毛細(xì)辛提取物用于抗氧化劑或其他藥用時(shí)，一定要充分考慮安全問(wèn)題。

［1］ Cerutti P A.Oxidant stress and carcinogenesis［J］.European Journal of Clinical Investigation，1991，21：1－11.

［2］ Halliwell B，Gutteridge J M C.Free Radicals in Biology and Medicine（3rd ed）［M］.London：Oxford University Press，1999.

［3］ Farber J L.Mechanisms of cell injury by activated oxygen species［J］.Environmental Health Perspectives，1994，102：17－24.

［4］ Cerutti P A.Prooxidant states and tumor promotion［J］.Science，1985，227：379－381.

［5］ Fridovich I.Fundamental aspects of reactive oxygen species，or what’s the matter with oxygen［J］.Annals of the New York Academy of Sciences，1999，893：13－18.

［6］ 邵旭平，萬(wàn)建宏，萬(wàn)東石.不同生態(tài)型胡楊異形葉對(duì)蟲(chóng)害的抗氧化反應(yīng)［J］.草業(yè)科學(xué)，2011，28（7）：1396－1399.

［7］ 趙亞民，張麗靜，傅華.維生素E在飼草及畜產(chǎn)品中的應(yīng)用研究［J］.草業(yè)科學(xué)，2011，28（6）：1167－1172.

［8］ Aruoma O I.Nutrition and health aspect of free radicals and antioxidants［J］.Food and Chemical Toxicology，1994，32：671－683.

［9］ Pezzuto J M，Park E J.Autoxidation and antioxidants［A］.In：Swarbrick J，Boylan J C.Encyclopedia of Pharmaceutical Technology［C］.New York：Marcel Dekker，2002：97－113.

［10］ Ames S N，Shigrenaga M K，Hagen T M.Oxidant，antioxidant and degenerative disease of aging［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1993，90：7915－7922.

［11］ Delectis Florae Reipublicae Popularis Sinicae Agendae Academiae Sinicae Edita.Flora Republicae Popularis Sinicae（中國(guó)植物志），Tomus 24［M］.Beijing：Science Press，1988：165.

［12］ 羅文蓉，牛永紅.甘肅細(xì)辛的生藥鑒定［J］.甘肅中醫(yī)，1999，12（1）：36－37.

［13］ 韓俊艷，孫川力，紀(jì)明山.中藥細(xì)辛的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（9）：46－50.

［14］ 謝百波，尚明英，王璇，等.單葉細(xì)辛中一個(gè)新的馬兜鈴酸類(lèi)化合物［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，46（2）：188－192.

［15］ 袁曉琴，孫蓮芬.細(xì)辛不同提取部位鎮(zhèn)痛作用及毒性的比較研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（8）：2050－2051.

［16］ Sarikurkcu C，Tepe B，Semiz D K，et al.Evaluation of metal concentration and antioxidant activity of three edible mush rooms from Mugla，Turkey［J］.Food and Chemical Toxicology，2010，48（5）：1230－1233.

［17］ Wei Q，Ma X H，Zhao Z，et al.Antioxidant activities and chemical profiles of pyroligneous acids from walnut shell［J］.Journal of Analytical and Applied Pyrolysis，2010，88（2）：149－154.

［18］ Ozsoy N，Can N，Yanardag R，et al.Antioxidant activity of Smilax excelsa L.leaf extracts［J］.Food Chemistry，2008，110（3）：571－583.

［19］ Gül9in I，Berashvili D，Gepdiremen A.Antiradical and antioxidant activity of total anthocyanins from Perilla pankinensis decne［J］.Journal of Ethnopharmacology，2005，101：287－293.

［20］ Moyer R A，Hummer K E，F(xiàn)inn C E，et al.Anthocyanins，phenolics and antioxidant capacity in diverse small fruits：Vac－cinium，Rubus and Ribes［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2002，50：166－171.

［21］ 謝云濤，馬國(guó)平，何玉鳳，等.BPR硫脲催化光度法對(duì)羥基自由基的檢測(cè)及清除作用［J］.化學(xué)通報(bào)，2006，6（6）：458－461.

［22］ 劉璐，付明哲，王俠，等.5種棘豆總黃酮含量的測(cè)定比較［J］.草業(yè)科學(xué)，2011，28（4）：683－686.

［23］ 馮濤，莊海寧.黃酮類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)特征與抗氧化性關(guān)系研究進(jìn)展［J］.糧食與油脂，2008，（10）：8－11.

［24］ 譚榀新，葉濤，劉湘新，等.植物提取物抗氧化成分及機(jī)理研究進(jìn)展［J］.食品科學(xué)，2010，31（15）：288－292.

［25］ Dan Y，Liu H Y，Gao W W，et al.Activities of essential oils fromAsarum heterotropoides var.mandshuricumagainst five phytopathogens［J］.Crop Protection，2010，29（3）：295－299.

［26］ 沈映君，張世芳，張世瑋.中藥藥理學(xué)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1997：32－33.

［27］ 扈成浩，薛敦淵，李兆林，等.寧夏毛細(xì)辛揮發(fā)油化學(xué)成分研究［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1989，25（2）：59.

［28］ Cai S Q，Yu J，Wang X，et al.Cytotoxic activity of some Asarumplants［J］.Fitoterapia，2008，79：293－297.

［29］ Kim S J，Zhang C G，Lim J T.Mechanism of anti－nociceptive effects of Asarum sieboldii Miq.Radix：potential role of bradykinin，histamine and opioid receptor－mediated pathways［J］.Journal of Ethnopharmacology，2003，88：5－9.

［30］ Iwashinaa T，Kitajima J，Shiuchi T，et al.Chalcones and other flavonoids fromAsarum sensulato （Aristolochiaceae）［J］.Biochemical Systematics and Ecology，2005，33：571－584.

［31］ Lin B Q，Chiou G C.Antioxidant activity of naringenin on various oxidants induced damages in ARPE219cells and HUVEC［J］.International Journal of Ophthalmology（IJO），2008，8（10）：1963－1967.

［32］ Schaneberg B T，Khan I A.Analysis of products suspected of containing Aristolochiaor Asarumspecies［J］.Journal of Ethnopharmacology，2004，94：245－249.