鄭 輝， 薛 松， 連 鋒， 胡振雷， 汪永義

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院心胸外科，上海200127)

冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(coronary artery bypass grafting，CABG)是目前冠心病治療的主要手段，但是術(shù)后靜脈橋再狹窄嚴(yán)重影響了橋血管的遠(yuǎn)期通暢率，已成為臨床上越來(lái)越棘手的問(wèn)題。靜脈橋再狹窄的關(guān)鍵病變是內(nèi)膜增生[1]，涉及多種因素，其中血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)過(guò)度增殖并從中膜向內(nèi)膜遷移是重要的病理基礎(chǔ)，抑制VSMCs增殖和遷移是預(yù)防靜脈橋再狹窄發(fā)生的策略之一。隨著分子生物學(xué)及其技術(shù)的發(fā)展，基因治療逐漸成為防治靜脈橋再狹窄的焦點(diǎn)。生長(zhǎng)終止特異性同源異型盒基因(growth arrest－specific homeobox gene，Gax)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生物學(xué)行為的核轉(zhuǎn)錄因子基因，屬于同源異型盒基因家族，其通過(guò)與啟動(dòng)子或增強(qiáng)子序列相結(jié)合，激活或抑制靶基因的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和遷移的基因調(diào)控作用[2]。有研究表明Gax基因在VSMCs中的表達(dá)模式類(lèi)似于gas基因(growth arrest－specific gene)、gadd基因(growth arrest and DNA damage－inducible gene)，而gas/gadd基因家族對(duì)VSMCs增殖和遷移呈負(fù)性調(diào)節(jié)，Gax(hGax)基因這種特殊的表達(dá)特性漸漸受到人們的關(guān)注，成為血管成形術(shù)后再狹窄防治的新靶點(diǎn)。本研究以人Gax(hGax)基因?yàn)榘悬c(diǎn)，構(gòu)建其重組腺病毒載體并感染兔VSMCs，觀(guān)察hGax基因過(guò)表達(dá)對(duì)血清刺激后VSMCs增殖、遷移和細(xì)胞周期的影響，為靜脈橋再狹窄基因治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

材料和方法

1 材料

兔血管平滑肌細(xì)胞、pEGFP－N1－h(huán)Gax、大腸桿菌DH5α由本實(shí)驗(yàn)室保存，pDC318－mCMV質(zhì)粒和pPE3質(zhì)粒由上海第二軍醫(yī)大學(xué)錢(qián)其軍教授惠贈(zèng);脂質(zhì)體Lipofectamine 2000TM和Trizol均購(gòu)自Invitrogen;限制性?xún)?nèi)切酶購(gòu)自NEB;DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清購(gòu)自Gibco;Taq酶和T4 DNA連接酶購(gòu)自TaKaRa;病毒DNA抽提試劑盒、PCR回收試劑盒和DNA片段純化試劑盒均購(gòu)自Qiagen;鼠抗人Gax單克隆抗體購(gòu)自Abnova;MTT購(gòu)自Sigma;PI購(gòu)自上海生工試劑公司;所有引物均由上海博尚生物公司合成。

2 方法

2.1 高表達(dá)hGax的腺病毒載體的構(gòu)建與感染 采用限制性?xún)?nèi)切酶NheⅠ和Hind III對(duì)pEGFP－N1－h(huán)Gax質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切反應(yīng)，將酶切產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，回收并純化hGax目的基因(片段大小為927 bp);然后將hGax基因片段與經(jīng)SpeⅠ和Hind III雙酶切消化后的pDC318－mCMV質(zhì)粒通過(guò)T4 DNA連接酶進(jìn)行連接構(gòu)建成pDC318－mCMV－h(huán)Gax質(zhì)粒;轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，用氨芐青霉素LB培養(yǎng)基平板進(jìn)行篩選，孵育過(guò)夜后，挑取陽(yáng)性克隆菌落，搖菌后用堿裂解法提取質(zhì)粒，分別進(jìn)行Hinc II和Kpn I、Sac I和Xho I雙酶切鑒定;酶切鑒定正確的克隆送至上海博尚生物技術(shù)公司進(jìn)行DNA測(cè)序，將完全正確的質(zhì)粒命名為pDC318－mCMV－h(huán)Gax;然后將穿梭質(zhì)粒pDC318－mCMV－h(huán)Gax與骨架質(zhì)粒pPE3通過(guò)Lipofectamine 2000TM脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞以獲得含hGax基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體，用病毒DNA抽提試劑盒提取腺病毒DNA，PCR法鑒定重組腺病毒載體是否含有hGax基因。hGax基因上游引物 5'－ATGGAACACCCGCTCTTTGGC －3'，下游引物 5'－ TCATAAGTGCGCATGCTCTGAG －3'。經(jīng)PCR鑒定正確的重組腺病毒載體命名為Ad5－h(huán)Gax，即攜帶人Gax基因的5型復(fù)制缺陷型腺病毒重組載體。經(jīng)擴(kuò)增、純化后用Ad5－h(huán)Gax感染VSMCs，并設(shè)陰性對(duì)照組(即Ad5－EGFP感染VSMCs)和空白對(duì)照組(即PBS感染VSMCs)。

2.2 RT－PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染VSMCs hGax mRNA的表達(dá) 病毒感染細(xì)胞48 h后應(yīng)用Trizol法提取總RNA，測(cè)定RNA濃度和A260/A280值，按常規(guī)行RTPCR。引物序列:hGax正義鏈 5'－ACCACCATCACCACCATCATC－3'，反義鏈 5'－ TGGAAGAGTTGGAGCACAGG－3'，擴(kuò)增序列長(zhǎng)度為174 bp;GAPDH正義鏈5'－GAACATCATCCCTGCCTCCAC －3'，反義鏈 5'－GCCTGCTTCACCACCTTCTTG －3'，擴(kuò)增序列長(zhǎng)度為183 bp。PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性3 min，95℃ 45 s，55℃ 1 min，72℃ 2 min，35個(gè)循環(huán)，72℃ 10 min。PCR產(chǎn)物以1.5%瓊脂糖凝膠電泳、顯像、拍照。

2.3 免疫熒光染色法檢測(cè)轉(zhuǎn)染VSMCs hGax蛋白的表達(dá) Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染VSMCs 48 h后，固定細(xì)胞并按常規(guī)免疫熒光染色方法進(jìn)行，Ⅰ抗為1∶400鼠抗人Gax蛋白單克隆抗體，4℃孵育過(guò)夜后PBS洗滌。Ⅱ抗為1∶1 000 FITC標(biāo)記羊抗鼠IgG，37℃避光孵育1h，PBS洗滌后置熒光顯微鏡下觀(guān)察。

2.4 Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染對(duì)血清刺激VSMCs增殖的影響 按8×103cells/well接種于96孔板，細(xì)胞貼壁后進(jìn)行干預(yù)，分別加入 Ad5－h(huán)Gax、Ad5－EGFP和PBS液，轉(zhuǎn)染4 h后用PBS液漂洗細(xì)胞去除病毒液，然后加入含1%FBS的 DMEM孵育12 h，換成含10%FBS的DMEM，使血清刺激VSMCs。分別于血清刺激 24 h、48 h、72 h、96 h 時(shí)，加入 20 μL MTT(5 g/L)，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4 h后吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150 μL DMSO，振蕩10 min使甲瓚結(jié)晶完全溶解，酶標(biāo)儀上以波長(zhǎng)570 nm檢測(cè)各孔吸光度(A值)。抑制率(%)=(1－實(shí)驗(yàn)組平均A值/空白對(duì)照組平均A值)×100%。

2.5 Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染對(duì)血清刺激VSMCs遷移的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期VSMCs接種于培養(yǎng)皿，調(diào)整細(xì)胞濃度以致第2 d覆蓋達(dá)到約90%，實(shí)驗(yàn)分組和病毒感染過(guò)程如上述，在培養(yǎng)皿底部做一直線(xiàn)標(biāo)記，用無(wú)菌槍頭在無(wú)菌條件下沿標(biāo)記線(xiàn)作劃痕，PBS液漂洗后加入含1%FBS的DMEM，孵育12 h后重新加入含10%FBS的DMEM，置37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)，分別于24 h、48 h、72 h后各組鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野進(jìn)行拍攝，測(cè)量?jī)蛇吋?xì)胞遷移邊緣之間的距離即劃痕寬度，取均值。

2.6 Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染對(duì)血清刺激VSMCs周期的影響 將VSMCs接種于培養(yǎng)皿，實(shí)驗(yàn)分組、病毒感染和血清刺激方法同MTT實(shí)驗(yàn)部分。血清刺激72 h后，消化并收集各組細(xì)胞，用4℃ 70%乙醇固定，RNA酶37℃下消化30 min，PI避光染色，300目篩網(wǎng)過(guò)濾后樣本加入流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1 含hGax基因的復(fù)制缺陷型腺病毒重組載體的鑒定

經(jīng)Sac I和 Xho I雙酶切，pDC318－mCMV－h(huán)Gax質(zhì)粒切出319 bp、791 bp和3 728 bp 3條片段，與預(yù)期的酶切結(jié)果完全相符，見(jiàn)圖1。經(jīng)Hinc II和Kpn I雙酶切，pDC318－mCMV－h(huán)Gax質(zhì)粒切出401 bp、596 bp、1 846 bp 和1 995 bp 4 條片段，與預(yù)期結(jié)果完全相同，見(jiàn)圖2。DNA測(cè)序結(jié)果示pDC318－mCMV－h(huán)Gax質(zhì)粒中的人Gax基因序列與GenBank中公布的基因序列基本一致。PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖示在927 bp的位置上出現(xiàn)特異性條帶，與預(yù)期的hGax基因片段大小相符，見(jiàn)圖3。說(shuō)明成功構(gòu)建了含hGax基因的復(fù)制缺陷型腺病毒重組載體。

2 RT－PCR分析

瓊脂糖凝膠電泳圖示，Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染的VSMCs中hGax mRNA表達(dá)呈陽(yáng)性條帶(174 bp)，而Ad5－EGFP轉(zhuǎn)染組無(wú)相應(yīng)陽(yáng)性條帶，表明在mRNA水平上目的基因hGax成功轉(zhuǎn)染入VSMCs，見(jiàn)圖4。

Figure 1.The double digestion identification of pDC318－mCMV－ hGax.M:DNA marker;Lane 1，2:Sac I and Xho I digestion.圖1 pDC318－mCMV－h(huán)Gax質(zhì)粒的Sac I和Xho I雙酶切鑒定

3 免疫熒光染色分析

Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染48 h后，免疫熒光染色結(jié)果示VSMCs內(nèi)呈紅色陽(yáng)性表達(dá)，尤以胞核為主，即為hGax蛋白，而對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)未見(jiàn)相應(yīng)的染色，提示VSMCs經(jīng)Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染后有外源性hGax蛋白過(guò)表達(dá)，見(jiàn)圖5。

Figure 4.RT－PCR result of the hGax mRNA expression.M:DNA marker;Lane 1:Ad5－EGFP－transfected cells;Lane 2:Ad5－h(huán)Gax－transfected cells.圖4 hGax mRNA表達(dá)的RT－PCR檢測(cè)結(jié)果

Figure 5.The hGax protein expression in the Ad5－h(huán)Gax－transfected cells.A:hGax protein expression in the cells 48 h after Ad5－h(huán)Gax transfection under fluorescent microscope(×100);B:EGFP protein expression in the cells 48 h after Ad5－EGFP transfection(negative control group)under fluorescent microscope(×100);C:VSMCs 48 h after PBS treatment(blank control group)under inverted microscope(×100).圖5 hGax蛋白在A(yíng)d5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中表達(dá)

4 細(xì)胞增殖分析

MTT法結(jié)果表明(表1)，Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染組中血清刺激后VSMCs體外增殖受到明顯抑制，與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(各時(shí)點(diǎn)為0)相比有顯著差異(P＜0.05)，且隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率升高，見(jiàn)圖6，而陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組之間無(wú)顯著差異，說(shuō)明hGax基因過(guò)表達(dá)能顯著抑制血清刺激后兔VSMCs增殖。

表1 hGax蛋白對(duì)血清刺激后VSMCs增殖的影響Table 1.Effect of hGax protein expression on the proliferation of serum－induced VSMCs in different groups at different time points(±s.n=5)

表1 hGax蛋白對(duì)血清刺激后VSMCs增殖的影響Table 1.Effect of hGax protein expression on the proliferation of serum－induced VSMCs in different groups at different time points(±s.n=5)

*P＜0.05 vs blank control group and Ad5－EGFP group.

Group 24 h 48 h 72 h 96 h Blank control 0.303 ±0.033 0.350 ±0.025 0.440±0.006 0.473 ±0.012 Ad5 －EGFP 0.295 ±0.029 0.348 ±0.016 0.438 ±0.008 0.467 ±0.014 Ad5 －h(huán)Gax 0.251 ±0.032 0.260 ±0.015*0.275 ±0.007*0.283 ±0.007*

Figure 6.Effect of hGax overexpression on proliferation inhibitory rates of serum－induced rabbit VSMCs at different time points.±s.n=3.*P＜0.05 vs 24 h.圖6 hGax基因過(guò)表達(dá)對(duì)血清刺激后兔VSMCs生長(zhǎng)抑制率的影響

5 細(xì)胞遷移分析

劃痕法檢測(cè)結(jié)果顯示(表2)，0 h時(shí)劃痕寬度均為(450.81 ±7.17)μm，空白對(duì)照組中劃痕寬度在不同時(shí)點(diǎn)上與陰性對(duì)照組相比差異無(wú)顯著，Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染組的劃痕寬度較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P＜0.05)，即該組細(xì)胞的遷移能力顯著減弱，說(shuō)明hGax基因過(guò)表達(dá)能顯著抑制血清刺激后兔VSMCs遷移。

表2 hGax基因過(guò)表達(dá)對(duì)血清刺激后兔VSMCs遷移的影響Table 2.Effect of hGax gene overexpression on the migration of serum－induced rabbit VSMCs(μm.±s.n=10)

表2 hGax基因過(guò)表達(dá)對(duì)血清刺激后兔VSMCs遷移的影響Table 2.Effect of hGax gene overexpression on the migration of serum－induced rabbit VSMCs(μm.±s.n=10)

*P＜0.05 vs blank control group and Ad5－EGFP group.

Group 24 h 48 h 72 h Blank control 265.548 ±12.498 225.582 ±7.961167.385 ±9.790 Ad5 －EGFP 260.548 ±11.498 222.582 ±8.761 164.385 ±7.790 Ad5 －h(huán)Gax 361.643 ±9.730* 317.582 ±9.901*289.385 ±10.783*

6 流式細(xì)胞儀分析

流式檢測(cè)結(jié)果顯示，血清刺激72 h后，Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染組中G0/G1期VSMCs比例增高，G2/M+S期細(xì)胞減少，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比差異顯著;而陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組之間無(wú)顯著差異，見(jiàn)表3、圖7。

表3 hGax基因過(guò)表達(dá)對(duì)血清刺激后兔VSMCs細(xì)胞周期分布的影響Table 3.The effects of hGax gene overexpression on cell cycle distribution of serum－induced rabbit VSMCs(%.±s.n=3)

表3 hGax基因過(guò)表達(dá)對(duì)血清刺激后兔VSMCs細(xì)胞周期分布的影響Table 3.The effects of hGax gene overexpression on cell cycle distribution of serum－induced rabbit VSMCs(%.±s.n=3)

*P＜0.05 vs blank control group and Ad5－EGFP group.

Group G0/G1 G2/M+S Blank control 44.17 ±2.0555.83 ±2.05 Ad5 － EGFP 42.57 ±2.4557.43 ±2.45 Ad5 － hGax 66.65 ±3.75*33.35 ±3.75*

Figure 7.Effect of adenovirus－ mediated hGax gene transfection on cell cycle of induced rabbit VSMCs.圖7 Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染對(duì)血清刺激后兔VSMCs細(xì)胞周期的影響

討 論

靜脈橋再狹窄實(shí)質(zhì)上是自體大隱靜脈為適應(yīng)動(dòng)脈循環(huán)中的壓力而發(fā)生的血管重塑。Manabe等[3]研究表明VSMCs是新生內(nèi)膜的主要成分之一，其異常增殖和遷移在移植血管病理性重塑過(guò)程中起重要作用。胎牛血清作為一種復(fù)合型的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，主要含有血小板源生長(zhǎng)因子、堿性成纖維生長(zhǎng)因子和溶血磷脂酸等成分，血小板源生長(zhǎng)因子作為VSMCs的促絲分裂劑和趨化劑，對(duì)血管增殖性病變起重要作用[4];堿性成纖維生長(zhǎng)因子可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和VSMCs增殖。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用血清刺激體外培養(yǎng)的VSMCs模型來(lái)模擬部分體內(nèi)過(guò)程，對(duì)于防治靜脈橋再狹窄的研究具有重要意義。

同源盒基因在核苷酸序列水平上含有一段約180 bp的高度保守序列，編碼60個(gè)氨基酸，稱(chēng)為同源結(jié)構(gòu)域，其中含有的螺旋－轉(zhuǎn)角－螺旋結(jié)構(gòu)可識(shí)別以5’－TAAT－3’為核心10～12 bp的 DNA序列，并且與DNA形成特異性結(jié)合，而其N(xiāo)－末端臂與DNA小溝的接觸能起到穩(wěn)定結(jié)合的作用。同源盒基因編碼的蛋白通過(guò)這種結(jié)合方式對(duì)下游靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而控制細(xì)胞生長(zhǎng)、分化。Gax基因是Gorski等[5]在1993年克隆出1個(gè)主要存在于心血管系統(tǒng)的同源盒基因，其編碼蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子。除保守的同源結(jié)構(gòu)域外，Gax蛋白含有特殊的CAX重復(fù)結(jié)構(gòu)，其對(duì)細(xì)胞增殖和分化的調(diào)節(jié)具有重要作用。Gax基因高表達(dá)于靜止期血管內(nèi)皮細(xì)胞和VSMCs。Liu等[6]研究發(fā)現(xiàn)血管外膜成纖維細(xì)胞正常狀態(tài)下表達(dá)Gax蛋白，并且Gax基因過(guò)表達(dá)可顯著減少S期細(xì)胞，增加G0－G1期細(xì)胞，從而抑制其增殖;經(jīng)研究驗(yàn)證在絲裂原刺激或血管損傷后VSMCs中的 Gax 基因表達(dá)迅速下降[5，7]，表明 Gax 基因在維持非增殖狀態(tài)VSMCs中起重要調(diào)節(jié)作用;Yamashita等[8]研究表明Gax是血管緊張素Ⅱ和C型鈉尿肽調(diào)節(jié)VSMCs增殖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的共同轉(zhuǎn)錄因子，前者表現(xiàn)為促進(jìn)VSMCs增殖，后者則抑制VSMCs增殖;此外，細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化是血管增生性疾病中VSMC增殖和遷移的關(guān)鍵起始步驟[9]，因而維持收縮型 VSMCs顯得至關(guān)重要，Markmann等[10]報(bào)道Gax是調(diào)節(jié)VSMCs收縮型與合成型之間相互轉(zhuǎn)化的重要調(diào)節(jié)基因之一。

為明確Gax基因?qū)ρ宕碳ず骎SMCs增殖、遷移和周期的影響，通過(guò)過(guò)表達(dá)Gax基因，檢測(cè)細(xì)胞增殖、遷移和周期的變化是可行的有效方法，這將為以Gax基因作為候選基因，進(jìn)行靜脈橋再狹窄基因治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，基于復(fù)制缺陷型腺病毒載體的優(yōu)勢(shì)和對(duì)VSMCs具有高親和性[11]，作為介導(dǎo)血管系統(tǒng)的過(guò)表達(dá)載體比較理想。通過(guò)復(fù)制缺陷型腺病毒介導(dǎo)的Gax基因可能是靜脈橋再狹窄防治的有效方法。本研究中，通過(guò)含hGax基因復(fù)制缺陷型腺病毒過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染 VSMCs，轉(zhuǎn)染48 h后，hGax在mRNA水平上和蛋白水平上均有顯著表達(dá)，說(shuō)明轉(zhuǎn)染成功，導(dǎo)入的目的基因hGax在VSMCs內(nèi)成功表達(dá)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MTT法檢測(cè)各組血清刺激后VSMCs的增殖活性，結(jié)果顯示，Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染組中的VSMCs生長(zhǎng)速度明顯減慢，與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且隨著血清刺激時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。Gorski等[12]研究表明Gax基因可通過(guò)激活細(xì)胞周期蛋白激酶抑制劑P21活性來(lái)抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖。細(xì)胞增殖是由細(xì)胞周期控制的[13]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染72 h后細(xì)胞周期變化的結(jié)果顯示，Ad5－h(huán)Gax轉(zhuǎn)染組中G0/G1期細(xì)胞顯著多于對(duì)照組，G2/M+S期明顯減少，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著，提示Gax基因過(guò)表達(dá)可能通過(guò)細(xì)胞周期限制點(diǎn)使VSMCs處于靜止期來(lái)抑制細(xì)胞增殖。

本研究的劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示hGax基因過(guò)表達(dá)可明顯抑制血清刺激后VSMCs遷移，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組之間無(wú)顯著差異。VSMCs遷移涉及細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化、局部黏附激酶、細(xì)胞骨架蛋白等多種因素。Witzenbichler等[14]研究發(fā)現(xiàn) Gax 基因通過(guò)抑制整合素 αγβ3、αγβ5表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)化學(xué)趨化因子誘導(dǎo)的 VSMCs遷移。但是Gax基因?qū)SMCs遷移抑制效應(yīng)所通過(guò)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路目前尚無(wú)定論，仍需更深一步研究。

總之，本研究將含hGax基因的重組腺病毒載體感染兔VSMCs，獲得過(guò)表達(dá)hGax基因的VSMCs。通過(guò)對(duì)細(xì)胞增殖、遷移和細(xì)胞周期的研究發(fā)現(xiàn):腺病毒介導(dǎo)的hGax基因過(guò)表達(dá)能有效抑制血清刺激后VSMCs的增殖和遷移;這可能通過(guò)阻滯細(xì)胞周期進(jìn)展來(lái)實(shí)現(xiàn)。

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