楊宗發(fā)，江尚飛，張榮發(fā)，胡娟娟

(重慶醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，重慶 400030)

鹽酸可樂(lè)定具有降壓、鎮(zhèn)痛、止瀉等藥理作用。鹽酸可樂(lè)定脈沖釋藥微丸膠囊可按預(yù)定的模式迅速而短暫地釋放定量的藥物，并且能迅速停止釋放。高血壓等病因發(fā)作具有節(jié)律性，不需長(zhǎng)時(shí)間維持體內(nèi)恒定藥物濃度，采用脈沖給藥不僅療效很好，而且降低了藥品的不良反應(yīng)。鹽酸可樂(lè)定的含量測(cè)定常采用高效液相色譜法[1]、毛細(xì)管電泳法[2]、離子對(duì)萃?。止夤舛确╗3]、氣相色譜法[4]等方法。筆者采用C8色譜柱檢測(cè)鹽酸可樂(lè)定脈沖釋藥微丸膠囊中可樂(lè)定的含量，為建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC－10AT型高效液相色譜儀，SPD－10A型紫外檢測(cè)器;HS3120型超聲波提取儀(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司);AUX220型雙量程分析天平(日本島津)。鹽酸可樂(lè)定脈沖微丸膠囊 (自制，100 μg/粒，批號(hào)分別為 20100312，20100316，20100322);鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品(批號(hào)為10071－199905，中國(guó)藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為純化水，磷酸、辛烷磺酸鈉、氫氧化鈉為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Diamonsil C8柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.22%辛烷磺酸鈉－甲醇－磷酸(500∶500∶1，用1 mol/L氫氧化鈉溶液或磷酸調(diào)pH至3.0);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm;進(jìn)樣量:20 μL。在此條件下，鹽酸可樂(lè)定保留時(shí)間為13.257 min，峰理論板數(shù)為 16 902.695，拖尾因子為 1.095，分離度為22.937，滿(mǎn)足2010年版《中國(guó)藥典(二部)》規(guī)定要求。

2.2 溶液制備

取樣品20粒，去膠囊殼，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于鹽酸可樂(lè)定10 μg)，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理(功率280 W，頻率60 kHz)10 min使鹽酸可樂(lè)定溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，用0.45 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱(chēng)定鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品10.24 mg，加流動(dòng)相溶解并稀釋至100 mL，搖勻，從中再吸取1 mL，置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。取鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL中約含80 ng的溶液，即得對(duì)照品溶液。按脈沖微丸膠囊處方制備不含鹽酸可樂(lè)定的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):精密量取鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各20 μL，分別注入色譜儀。色譜圖見(jiàn)圖1。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜主峰相應(yīng)位置上有相同的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間處無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液(1.024 μg/mL)1，2，4，8，12 mL，置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，分別精密吸取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積(A)對(duì)鹽酸可樂(lè)定質(zhì)量濃度(C)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=28.995 7 C －0.573 1，r=0.999 2(n=5)。結(jié)果表明，鹽酸可樂(lè)定質(zhì)量濃度在10.24～122.88 μg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為20100312)適量，依法制備供試品溶液，分別制備6份，按擬訂的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果鹽酸可樂(lè)定的平均標(biāo)示百分含量為99.44%，RSD為0.78%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，于室溫(20～25℃)下放置，在 0，1，3，5，7，9，11 h 時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果鹽酸可樂(lè)定峰面積的 RSD為0.46%(n=7)，表明供試品溶液在11 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密稱(chēng)取空白輔料9份，分別精密加入鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品貯備液 (1.024 μg/mL)2.0，8.0，10.0 mL，每種質(zhì)量濃度平行3份;按擬訂的方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸可樂(lè)定加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品各20粒，依法制備供試品溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取鹽酸可樂(lè)定對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL約含80 ng的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果批號(hào)為20100312，20100316，20100322的樣品每片中鹽酸可樂(lè)定的平均百分標(biāo)示含量分別為 100.4%(RSD=0.71%)，99.5%(RSD=0.62%)和99.6%(RSD=10.32%)。

3 討論

在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)紫外掃描，發(fā)現(xiàn)鹽酸可樂(lè)定最大吸收波長(zhǎng)為220 nm，而空白輔料最大吸收波長(zhǎng)為198 nm，兩者之間紫外吸收光譜有重疊干擾現(xiàn)象，顯然無(wú)法選擇紫外分光光度法測(cè)定供試品含量，只能選擇高效液相色譜法測(cè)定供試品的含量。

考察流動(dòng)相不同比例時(shí)鹽酸可樂(lè)定的出峰情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)文中流動(dòng)相的保留時(shí)間較理想，柱效高，出峰峰形好，故選擇了此流動(dòng)相。

采用C8色譜柱、高效液相色譜法測(cè)定鹽酸可樂(lè)定脈沖釋藥微丸膠囊中鹽酸可樂(lè)定的含量，樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，因此可作為本制劑含量的控制方法。

[1]楊繼斌，湯曉樞.HPLC測(cè)定珍菊降壓片中鹽酸可樂(lè)定的含量[J].藥物分析雜志，2006，26(12):1 854 －1 856.

[2]高蘇亞，李 華，曹曉芹.區(qū)帶毛細(xì)管電泳法測(cè)定珍菊降壓片有效成分的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(11):2 656 －2 657.

[3]魏世超，徐麗君，賀國(guó)芳，等.可樂(lè)保林片中鹽酸可樂(lè)定含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2002，21(9):583 －584.

[4]楊雪梅，陳顯瑤.血漿中鹽酸可樂(lè)定的氣相色譜測(cè)定法[J].藥物分析雜志，1994，14(2):24－26.