孟建升 王偉麗 楊文文 朱明偉

（1 河南省商丘市食品藥品檢驗所，商丘476000；2 天津天獅集團有限公司，天津301700）

HPLC法測定左歸丸中馬錢苷的含量

孟建升1王偉麗1楊文文2朱明偉1

（1 河南省商丘市食品藥品檢驗所，商丘476000；2 天津天獅集團有限公司，天津301700）

目的 建立HPLC法測定左歸丸中馬錢苷含量的方法。方法 采用Eclipse XDB-C18色譜柱，以乙腈-水（15:85）為流動相；流速1.0ml?min-1；檢測波長240nm。結(jié)果 馬錢苷在0.3701～1.2336μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為99.86%，RSD=1.20%（n=6）。結(jié)論 本方法快速簡便，準確可靠，可用于左歸丸的質(zhì)量控制。

馬錢苷；高效液相色譜法；含量測定；左歸丸

左歸丸是由山茱萸、熟地黃、菟絲子、牛膝等藥材加工制成的制劑，具有滋腎補陰之功效。用于真陰不足，腰酸膝軟，盜汗遺精，神疲口燥。本實驗采用高效液相色譜法測定馬錢苷，以馬錢苷為指標性成分[1]，控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，方法易于操作，結(jié)果準確，重現(xiàn)性良好，可用于該制劑質(zhì)量的控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀，AUW 220D電子分析天平

1.2 試藥 馬錢苷對照品（批號：111640-200604，中國藥品生物制品檢定所提供）；乙腈為色譜純（科密歐公司），水為娃哈哈純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Eclipse XDB-C18色譜柱（50mm× 4.6mm，5um）；檢測波長240nm，柱溫：25℃，流動相：乙腈:水（15:85）；體積流量：1.0ml·min-1；自動進樣10μl。

2.2 對照品溶液的制備 稱取馬錢苷對照品適量，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加80%甲醇制成0.20mg/ml溶液，作為對照品儲備液；精密量取2ml，置于10ml棕色量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 左歸丸供試品及陰性樣品溶液的制備 取本品，研細，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞，稱定重量，加熱回流60min，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；按處方配比，取除山茱萸的各位藥材，按處方工藝制成樣品，同法制成陰性樣品溶液。

2.4 專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液，供試品溶液及陰性樣品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明陰性樣品溶液對測定無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.5 標準曲線的制備 精密量取馬錢苷對照品溶液（40ug/ml)，按照“2.1”項色譜條件，分別進樣6、8、10、12、15、20μl，記錄馬錢苷峰面積值，以馬錢苷對照品進樣量（X）對峰面積積分值（Y）進行線性回歸，得回歸方程：Y=1325.37X-158.04 r=0.9999。結(jié)果得出馬錢苷對照品的線性范圍為0.3701～1.2336μg。

2.6 精密度試驗 精密量取馬錢苷對照品溶液（40ug/ml)10μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積，計算得RSD為0.92%（n=5）。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一樣品，制備供試品溶液，分別在0、1、2、3、4、5、6、8h進樣，測定馬錢苷峰面積，結(jié)果RSD為0.86%，表明供試品溶液在8h內(nèi)測定穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 分別精密稱取同一樣品6份，研細，制備供試品溶液，進樣分析，測定每份樣品中馬錢苷的含量，結(jié)果馬錢苷平均含量為0.9896mg/g，RSD為0.91%（n=6）。

2.9 加樣回收率試驗 分別稱取已知含量為0.9893mg/g的樣品約0.6g，6份，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入對照品儲備液2ml，按“2.3”項下供試品制備方法制備，按照“2.1”項下色譜條件，分別測定，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測定 取3批樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，各進樣10μl，按外標法計算馬錢苷的含量，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

表2 樣品中馬錢苷的含量

3 討論

山茱萸味酸，性微溫，有補益肝腎、收斂固脫的功能。具有明顯的免疫調(diào)節(jié)、強心、抗休克、抗心律失常、降血糖、抗氧化和抗衰老作用。其成分主要為環(huán)烯醚萜和鞣質(zhì)[2]，馬錢苷為其中環(huán)烯醚萜類成分之一，本文以高效液相色譜法測定馬錢苷的含量，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，可用于控制左歸丸的質(zhì)量。

通過紫外掃描發(fā)現(xiàn)，馬錢苷在240nm處有最大吸收，故選擇240nm為測定波長。參考有關(guān)文獻[3-4]，比較了不同的流動相，發(fā)現(xiàn)采用乙腈:水（15:85）為流動相時，樣品中馬錢苷峰分離度較好。

本方法操作簡便，具有較強的專屬性，回收率好，能夠更有效地控制該制劑的質(zhì)量。

[1] 劉洪,許惠琴.山茱萸及其主要成分的藥理學研究進展[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2003,19(7):254.

[2] 楊學東,丁小軍.山茱萸屬植物化學成分和藥理活性研究進展[J].時珍國藥國藥,2007,20(9):2284-2286.

[3] 席美鳳.HPLC法測定知柏地黃顆粒中馬錢苷[J].中草藥,2006,37(7): 1036-1037.

[4] 李文蘭,趙稷,王曉冬,等.HPLC法測定金匱腎氣丸中馬錢苷、芍藥苷的含量[J].哈爾濱商業(yè)大學學報,2008,24(1):13-15.

HPLC Determination of Loganin in Zuogui Pill

Meng Jiansheng1Wang Weili1Yang Wenwen2Zhu Mingwei1
(1 Shangqiu Insititute for Food and Drug Control, Shangqiu 476000, China; 2 Tianjin Tiens Group Co. Ltd, Tianjin 301700, China)

Objective To establish a HPLC method for the determination of Loganin in Zuogui Pill. Methods The chromatographic system consisted of Eclipse XDB-C18 column,using Acetonitrile-water (15:85) as mobile phase.The flow rate was 1.0ml?min-1, and the detecting waveleng was 240nm. Results The Loganin have a good tincar rolatim in the range of0.3701～1.2336μg（r=0.9999）, the average recovery was 99.86% and RSD=1.20%（n=6）. Conclusions The method is simple, accuracy, and suitable for the determination of constituent in Zuogui Pill.

Loganin; HPLC; Determination; Zuogui Pill

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.18.107

1672-2779（2012）-18-0152-02

2012-08-01）