王雪芹，王軍力

(1.華南師范大學(xué)體育科學(xué)學(xué)院，廣東廣州 510006;2.臨沂大學(xué)體育學(xué)院，山東 臨沂 276005;3.懷化學(xué)院體育系，湖南 懷化 418008)

隨著生活水平的提高，尤其是高能量食品的攝入過多，體力活動(dòng)減少等，使糖尿病的發(fā)病率大幅度上升，成了嚴(yán)重危害健康的疾?。?］。尋找合適的方法預(yù)防和控制Ⅱ型糖尿病一直是人們十分關(guān)注的問題。研究表明，運(yùn)動(dòng)不足是Ⅱ型糖尿病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且已證實(shí)，運(yùn)動(dòng)對(duì)于Ⅱ型糖尿病病人的益處非常明顯［2］。白藜蘆醇別名虎杖甙元，是一些植物在受到病菌浸染或環(huán)境惡化時(shí)產(chǎn)生的一種植物抗毒素［3］。大量研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇能使CD8+和CD4+細(xì)胞比值下降，還能使血清IL－6和IL－8含量下降［4］。一定濃度范圍內(nèi)，白藜蘆醇可增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷力、抗體分泌及CH50活性;明顯提高T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率［5］。研究證明白藜蘆醇(Res)具有抗炎和提高機(jī)體免疫力的作用［6］［7］［8］。本研究主要觀察有氧運(yùn)動(dòng)和 Res 補(bǔ)充干預(yù)手段下，Ⅱ型糖尿病大鼠脾臟系數(shù)、WBC、TNF－α和IL－6濃度的變化，探討有氧運(yùn)動(dòng)和Res補(bǔ)充對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠細(xì)胞因子和免疫器官系數(shù)的影響，為進(jìn)一步研究提供幫助。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 動(dòng)物及分組

Spargue－Dawley雄性健康大鼠購于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將大鼠分為12組，每組8只。包括正常安靜組(A)、正常有氧運(yùn)動(dòng)組(B)、正常安靜+白藜蘆醇(Res)組(C)、正常有氧運(yùn)動(dòng)+白藜蘆醇組(D)、糖尿病安靜+普通飼料組(E)、糖尿病有氧運(yùn)動(dòng)+普通飼料組(F)、糖尿病安靜+Res+普通飼料組(G)、糖尿病有氧運(yùn)動(dòng)+Res+普通飼料組(H)、糖尿病安靜+高脂飼料組(I)、糖尿病有氧運(yùn)動(dòng)+高脂飼料組(K)、糖尿病安靜+Res+高脂飼料組(L)和糖尿病有氧運(yùn)動(dòng)+Res+高脂飼料組(M)。

1.2 訓(xùn)練方案

有氧運(yùn)動(dòng)組大鼠進(jìn)行為期7周不負(fù)重游泳訓(xùn)練，1周的適應(yīng)性訓(xùn)練后(10min/day)進(jìn)行正式訓(xùn)練，訓(xùn)練時(shí)間為第1周30min/day，第2周45min/day，3－7周60min/day。每周訓(xùn)練6天。

1.3 測(cè)試指標(biāo)及方法

在最后一次訓(xùn)練結(jié)束后禁食12h宰殺大鼠，采集血液、胸腺和脾臟進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)試。白細(xì)胞計(jì)數(shù)采用血細(xì)胞分析儀(sysmex F－820)。無菌摘取胸腺和脾臟電子電平稱重計(jì)算胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)。

大鼠脾淋巴細(xì)胞ConA誘生的TNF－α和IL－6濃度檢測(cè)方法。常規(guī)制備大鼠脾細(xì)胞懸液。用完全1640培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度至3×107/L，在24孔一次性無菌細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入細(xì)胞懸液1000μl，ConA100μl，置 5%CO2、37℃ 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48h，后離心(1000r/min，10min)，收集上清，置－70℃保存待測(cè)。大鼠TNF－α、IL－6 ELISA試劑盒均為美國Sigma公司產(chǎn)品，操作嚴(yán)格按試劑盒說明，最后采用酶標(biāo)儀(BIO－RAD 550，美國)以450nm為測(cè)定波長(zhǎng)，在酶標(biāo)儀上讀數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用excel和SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，顯著性水平為 P ＜0.05.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 有氧運(yùn)動(dòng)及白藜蘆醇對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠脾臟TNF－α、IL－6濃度的影響

表1 各組Ⅱ型糖尿病大鼠脾臟TNF－α和IL－6濃度

表1顯示，與 A組相比，E組、F組、G組、I組、K組和L組大鼠TNF－α濃度明顯升高(P＜0.05);E組大鼠TNF－α濃度明顯高于H組、K組和M組(P＜0.05);F組大鼠TNF－α濃度明顯高于H組和M組大鼠(P＜0.05);I組和L組大鼠TNF－α濃度明顯高于H組(P＜0.05);I組大鼠TNF－α濃度明顯高于K組和H組(P＜0.05);G組大鼠TNF－α濃度明顯高于H組(P＜0.05)。與A相比，D 組、E組、F組、G 組、H組、I組、K組、L組大鼠和M組大鼠IL－6濃度明顯升高(P＜0.05);與E組相比，I組、K組、L組和M組大鼠IL－6濃度明顯升高(P＜0.05);而F組、G組和H組大鼠IL－6濃度明顯降低(P＜0.05);與F組相比，G組和H組大鼠IL－6濃度明顯降低(P＜0.05);與I組相比，K組、L組和M組大鼠IL－6濃度明顯降低(P＜0.05);M組大鼠IL－6濃度明顯低于L組大鼠(P ＜0.05)。

2.2 有氧運(yùn)動(dòng)及白藜蘆醇對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠循環(huán)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響

表2 各組Ⅱ型糖尿病大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)

表2顯示，I組大鼠循環(huán)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于A組(P＜0.05);其他糖尿病高脂飼料組大鼠和糖尿病普通飼料各組大鼠的循環(huán)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)都高于正常安靜組，但差異沒有顯著性。

2.3 有氧運(yùn)動(dòng)及白藜蘆醇對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠脾臟系數(shù)的影響

表3 各組Ⅱ型糖尿病大鼠的脾臟系數(shù)

表3顯示，D組大鼠的脾臟系數(shù)明顯高于A組(P＜0.05);D組大鼠的脾臟系數(shù)也明顯高于B組和C組(P＜0.05);L組大鼠的脾臟系數(shù)明顯低于A組P＜0.05;其他糖尿病組大鼠的脾臟系數(shù)也都低于A組，但差異不顯著。

3 分析與討論

2型糖尿病是慢性低度炎癥反應(yīng)的一種。TNF－α主要由單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，正常情況下可以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及促進(jìn)組織修復(fù)。但TNF－α異常增高，與糖尿病的發(fā)展和并發(fā)癥的發(fā)生有關(guān)［9］。IL－6是一種多功能細(xì)胞因子，可由多種免疫細(xì)胞產(chǎn)生，在免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病組大鼠TNF－α和 IL－6明顯高于對(duì)照組，且隨著糖尿病的發(fā)展，糖尿病組TNF－α和糖尿病安靜高脂飼料組IL－6不斷增高［10］。趙綱等研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食組大鼠血清中的IL－6、TNF－α濃度高于對(duì)照組，而運(yùn)動(dòng)鍛煉可以顯著降低高脂飼料大鼠的血清TNF－α和IL－6含量［11］。而Res能夠抑制IL－6的生成而起到抗炎作用［12］，及白藜蘆醇在一定程度上能提高耐力訓(xùn)練小鼠的免疫功能［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病安靜普通飼料組和糖尿病安靜高脂飼料組大鼠脾臟TNF－α和IL－6的濃度高，而有氧運(yùn)動(dòng)及白藜蘆醇也可以降低糖尿病各組大鼠脾臟TNF－α和IL－6的濃度，這跟他人的研究結(jié)果一致［13］［11］。

WBC是炎性反應(yīng)的標(biāo)志性指標(biāo)，是糖尿病發(fā)生、發(fā)展的預(yù)警因子［14］。大量研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ型糖尿病患者白細(xì)胞總數(shù)明顯高于健康對(duì)照組［15］［16］［17］。白細(xì)胞數(shù)量增加，說明機(jī)體存在炎性癥狀，白細(xì)胞隨血液在循環(huán)系統(tǒng)中運(yùn)行，在機(jī)體預(yù)防疾病過程中起關(guān)鍵性作用［18］。而長(zhǎng)期適宜的運(yùn)動(dòng)對(duì)血液系統(tǒng)具有良好作用，能增強(qiáng)免疫功能［19］。同時(shí)白藜蘆醇對(duì)免疫功能有較好的調(diào)節(jié)作用［20］。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病安靜高脂飼料組大鼠循環(huán)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于正常安靜組，而糖尿病有氧運(yùn)動(dòng)+Res+普通飼料組和糖尿病有氧運(yùn)動(dòng)+Res+高脂飼料組大鼠的循環(huán)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)都低于糖尿病安靜高脂飼料組。說明有氧運(yùn)動(dòng)和白藜蘆醇補(bǔ)充能改善白細(xì)胞數(shù)量的增加。

脾臟是體內(nèi)最大的淋巴器官。脾臟系數(shù)指脾臟重量(mg)與體重(g)的比值。脾臟是淋巴細(xì)胞定居、增殖和產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。是合成、分泌促吞噬肽、備解素及某些補(bǔ)體成分的場(chǎng)所［21］。薛慧等研究發(fā)現(xiàn)Ⅱ型糖尿病組大鼠的脾臟系數(shù)明顯低于對(duì)照組，而60min和90min運(yùn)動(dòng)組的脾臟系數(shù)均高于糖尿病組［22］。卓杰先等研究發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)組脾臟指數(shù)均小于白藜蘆醇+有氧運(yùn)動(dòng)組，提示白藜蘆醇具有延緩疲勞小鼠脾臟結(jié)構(gòu)萎縮和功能退化及提高機(jī)體免疫機(jī)能等作用［12］。劉艷等研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組、耐力運(yùn)動(dòng)組和耐力+白藜蘆醇組小鼠脾臟指數(shù)各組間均無顯著性［23］。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病安靜普通飼料組和糖尿病安靜高脂飼料組大鼠的脾臟系數(shù)明顯小于對(duì)照組，而糖尿病加運(yùn)動(dòng)組和糖尿病加白藜蘆醇組大鼠的脾臟系數(shù)均高于普通安靜糖尿病組，也高于糖尿病安靜高脂飼料組大鼠。說明有氧運(yùn)動(dòng)和白藜蘆醇的補(bǔ)充能起到保護(hù)脾臟的作用，可以延緩它們的萎縮，防止功能退化等作用。

4 結(jié)論

Ⅱ型糖尿病大鼠循環(huán)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、脾臟TNF－α和IL－6濃度高于正常安靜組，說明糖尿病組大鼠有炎癥發(fā)生，而有氧運(yùn)動(dòng)和白藜蘆醇補(bǔ)充降低了大鼠的循環(huán)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和脾臟TNF－α和IL－6濃度，且糖尿病運(yùn)動(dòng)組和糖尿病白藜蘆醇組大鼠的脾臟系數(shù)均高于普通安靜糖尿病組和糖尿病安靜高脂飼料組大鼠，說明有氧運(yùn)動(dòng)和白藜蘆醇補(bǔ)充能改善Ⅱ型糖尿病引起的一些炎癥，及延緩Ⅱ型糖尿病大鼠的脾臟萎縮，保護(hù)免疫器官的作用。

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