潘 雷, 胡發(fā)文, 高鳳祥, 菅玉霞, 張少春, 王 雪, 郭 文

(山東省海水養(yǎng)殖研究所, 山東 青島 266002)

大瀧六線魚(Hexagrammos otakii)又名歐氏六線魚、六線魚, 俗稱黃魚, 屬鲉形目(Scorpaeniformes)、六線魚科(Hexagrammidate)、六線魚屬(Hexagrammos), 為冷溫性近海底層巖礁魚類。主要分布于中國黃海和渤海, 也見于朝鮮、日本和俄羅斯遠東諸海[1]。此魚耐低溫, 生存溫度 2～26℃, 生長于中國山東、遼寧和江蘇等地的近海多巖礁海區(qū)。其肉質(zhì)細嫩、味道鮮美, 素有“北方石斑”之稱, 經(jīng)濟價值較高, 深受廣大消費者和養(yǎng)殖者青睞。大瀧六線魚是中國北方網(wǎng)箱養(yǎng)殖的理想種類, 也是開展?jié)O業(yè)增殖放流和發(fā)展游釣漁業(yè)的理想品種, 作為北方特有名貴海水魚類具有廣闊的推廣前景。

國內(nèi)外關(guān)于大瀧六線魚的研究多集中于基礎(chǔ)生物學(xué)方面[2-5], 日本于20世紀70年代開始對大瀧六線魚進行人工繁育, 目前尚處于試驗階段, 未突破形成規(guī)模[6]。中國有關(guān)大瀧六線魚苗種繁育的研究始于20世紀90年代中后期, 吳立新等[7]在實驗室內(nèi)采用海區(qū)自然受精卵塊培育出1.5 cm魚苗244尾, 孵化率22.9%, 成活率2.4%; 莊虔增等[8]采用海區(qū)自然受精卵塊和人工授精獲得的受精卵共計培育出 3.5 cm魚苗1.83萬尾, 孵化率56%, 成活率23.4%。大瀧六線魚的人工繁殖和大規(guī)格苗種的培育迄今沒有突破, 是由于大瀧六線魚自身的繁殖特性決定了其人工繁殖的難度較大。

大瀧六線魚是地方性魚種, 隨著近海經(jīng)濟魚類種類和數(shù)量的減少, 沿海漁民對大瀧六線魚的捕撈量逐漸加大, 漁獲個體也逐年減小, 其漁業(yè)資源承受的壓力越來越大, 資源衰退的趨勢日趨嚴重[9]。為了保護和恢復(fù)大瀧六線魚的自然資源, 滿足養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)對大瀧六線魚苗種的大量需求, 使大瀧六線魚養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展, 開展大瀧六線魚苗種人工繁育技術(shù)研究具有重大意義。2008年以來, 山東省海水養(yǎng)殖研究所開展了大瀧六線魚人工繁育技術(shù)研究,取得了理想結(jié)果, 作者總結(jié)了有關(guān)大瀧六線魚人工苗種繁育技術(shù)的研究結(jié)果, 以期為大瀧六線魚規(guī)模化人工繁育提供參考。

1 材料與方法

1.1 親魚的來源與培育

2009～2010年在山東省海水養(yǎng)殖研究所青島即墨鰲山衛(wèi)中試基地進行了大瀧六線魚人工繁育試驗,使用的親魚選自大連黑石礁海區(qū)海上網(wǎng)箱養(yǎng)殖的2～3齡大瀧六線魚。大瀧六線魚屬于秋季產(chǎn)卵型魚類[10], 從 9月份海水水溫下降便開始親魚的營養(yǎng)強化培育。強化培育期間, 投喂優(yōu)質(zhì)新鮮的玉筋魚、小蝦等, 投喂量為魚體質(zhì)量的 2%～3%, 日投喂 1～2次。

10月下旬, 水溫降至16～18℃時經(jīng)營養(yǎng)強化培育的親魚已經(jīng)發(fā)育成熟, 這時可以選擇體表無傷、光澤鮮亮, 腹部膨大、松軟的雌魚到室內(nèi)水泥池內(nèi)暫養(yǎng)。

親魚暫養(yǎng)池使用圓形水泥池, 面積25 m2, 池深1.0 m, 排水口設(shè)置于池底部中央, 排水口末端設(shè)閥門及活動搖臂器, 控制水位高度0.6～0.8 m。親魚暫養(yǎng)池配有進排水、充氣、控溫、控光設(shè)施等, 池內(nèi)布有水泥制遮蔽物供親魚棲息。

親魚培育密度為3～5尾/m3, 雌、雄比例為2∶1。培育用水為沙濾自然海水, 溫度 16～18℃, 換水量為 3～5個量程/d, 連續(xù)充氣, 鹽度 29～31, pH 7.8～8.1, 溶解氧保持在5 mg/L以上, 光照強度控制在500～1 000 lx, 光照時間為6: 00～22:00。

1.2 人工催產(chǎn)和平面授精

對于發(fā)育不成熟的雌魚可進行人工催產(chǎn), 催產(chǎn)激素采用促黃體素釋放激素A2(LHRH-A2, 寧波第二激素廠), 背部肌肉注射, 注射劑量 30～50 μg/kg體質(zhì)量, 分2～3次注射完畢, 每次間隔24 h。雄魚一般自然成熟, 無需注射激素即可人工擠出精液。

人工授精采用半干法授精, 首先鏡檢精子和魚卵的成熟情況, 如果成熟良好, 即可開始授精。將2～3尾雄魚的精液擠入盛有 80～100 mL海水的燒杯中, 選擇腹部膨大松軟、生殖孔紅腫、性腺發(fā)育良好的雌魚, 直接將魚卵擠入臉盆、解剖盤等容器內(nèi),迅速將燒杯內(nèi)的精液淋到魚卵上, 混合均勻后將魚卵整形成平面薄片狀, 厚度為 2～3層魚卵, 每片大小為10～15 cm左右的方形, 2 min后加入海水, 此即為人工平面授精。15 min后受精卵片凝固變硬, 經(jīng)過3～5次洗卵, 放入孵化網(wǎng)箱中孵化。

1.3 網(wǎng)箱吊式孵化

1.3.1 孵化設(shè)施

孵化池長條形(5 m×1.5 m×1 m), 進水口、出水口分別兩頭, 池內(nèi)依次排放網(wǎng)目為60目的方形孵化網(wǎng)箱3個(規(guī)格為1 m×1 m×1.2 m), 網(wǎng)箱底部放置氣石1～2個。

1.3.2 孵化條件

孵化用水為沙濾海水, 水溫 16～17℃, 鹽度29～31, pH 7.8～8.1, 溶解氧保持在5 mg/L以上, 光照強度500～1000 lx, 光照時間6:00～22:00。24小時長流水, 日流水量為8～10個全量。連續(xù)充氣, 充氣量控制在0.2～0.4 L/min。在上述條件下受精卵經(jīng)過20～23 d的孵化仔魚可以全部孵出, 仔魚孵化出后已經(jīng)開口。

1.3.3 孵化方式

孵化方式采用網(wǎng)箱吊式孵化(圖 1), 將人工授精后的平面受精卵片用棉繩或聚乙烯繩穿成串, 每串3片受精卵, 卵片間隔15～20 cm, 加墜石吊掛于網(wǎng)箱內(nèi)孵化, 孵化密度為3片×3串/m3網(wǎng)箱, 約1.0×105～1.5×105粒/m3。在上述條件下受精卵經(jīng) 20～23 d仔魚全部孵出。

圖1 網(wǎng)箱孵化示意圖Fig. 1 Sketch map of the hatching cage

1.4 苗種培育

1.4.1 設(shè)施條件

配套設(shè)施設(shè)備有: 高位水池、砂濾池、水泵房、羅茨鼓風(fēng)機、蒸汽鍋爐、車間保暖設(shè)施、照明設(shè)施、池底清潔器、潛水泵、常規(guī)水質(zhì)檢測儀、顯微鏡、解剖鏡、發(fā)電機組等。室內(nèi)苗種培育池為長方形抹角水泥池(4 m×3 m×1 m)。另有配套的餌料培養(yǎng)車間,單胞藻培養(yǎng)池和輪蟲培養(yǎng)池若干個(容積10～15 m3),0.5、1 m3的玻璃鋼水槽若干個。

1.4.2 培育密度

初孵仔魚多集中于網(wǎng)箱邊緣和底部, 當仔魚逐漸活躍并上浮到水體中上層時, 輕輕收集仔魚至培育池培育, 仔魚的布池密度為 0.5萬～0.8萬尾/m3,隨著苗種的生長及時分池稀疏密度。

1.4.3 水質(zhì)管理

每天晝夜兩次監(jiān)測培育水體的水質(zhì)情況, 保證水質(zhì)指標穩(wěn)定: 水溫 16～17℃, 鹽度 29～31,pH=7.8～8.1, 溶解氧5 mg/L以上, NH4+-N含量≤0.1 mg/L。培育初始水量為培育池體積的3/5, 前5 d采取逐漸加水至滿, 以后至采取網(wǎng)箱排水換水方式,每天換水2次, 隨著魚苗的生長逐漸增大換水量, 20日齡前換水量為60%, 40日齡前為100%, 60日齡前為150%, 60日齡后采取流水培育方式, 隨著魚苗的生長和攝食量的增加, 流水量逐漸增大到 200%～400%。魚苗培育期間每天使用清底器吸底 1次, 保證培育池底清潔無死魚、殘餌; 并在水面設(shè)置集污器,清除水面的污物, 避免水面的通透性降低而造成氣體交換的不暢。

1.4.4 光照與充氣

光照強度控制在500～1 000 lx, 陰天和夜晚可以使用人工光源。氣石密度為 0.5個/m2, 充氣量隨著魚苗的生長逐漸加大, 每只氣石的出氣量由調(diào)節(jié)閥控制, 由剛一開始的 0.2～0.4 L/min逐漸增大到6～8 L/min。

1.4.5 微藻添加與餌料投喂

魚苗培育期間每天向培育池添加新鮮的處于指數(shù)生長期海水小球藻(Chlorellaspp.), 保持培育池中密度在30萬～50萬個/mL, 直至25 d停止添加。餌料系列為輪蟲(Brachionus plicatilis)、鹵蟲(Artemia salina)無節(jié)幼體、配合飼料。投喂時期: 輪蟲5～25日齡, 鹵蟲無節(jié)幼體10～60日齡, 配合餌料在50日齡后開始投喂(圖2)。輪蟲投喂前用富含DHA和EPA的營養(yǎng)強化劑(裂壺藻(Schizochytrium limacinum)粉DHA∶EPA=2∶1, 青島越洋進出口有限公司)強化10～12 h, 每天投喂2次, 使培育池內(nèi)的輪蟲密度保持在6～8個/mL。鹵蟲無節(jié)幼體孵化前需脫殼處理,投喂前需要用富含 DHA和 EPA的強化劑裂壺藻粉強化 6～8 h, 每天投喂 2～3次, 投喂密度開始為0.3～0.5個/mL, 并逐漸增大到1～2個/mL。輪蟲和鹵蟲在營養(yǎng)強化收集后投喂前, 需要用清潔海水反復(fù)沖洗干凈, 降低攜帶污物和病原。從50日齡開始投喂市售日升全價配合飼料, 配合餌料的粒徑由開始的200 μm逐步增大, 遵循勤投少投的原則, 一般情況下馴化 10～15 d左右, 魚苗開始攝食餌料, 每天投喂8～10次。

圖2 大瀧六線魚苗種培育的餌料系列Fig. 2 Food serials during seedling production of Hexagrammos otakii

2 結(jié)果

2.1 親魚培育

表1為2009～2010年大瀧六線魚親魚培育情況,完全可以利用人工養(yǎng)殖方法培育獲得成熟親魚進行人工授精, 不需要采集自然海域的魚卵進行苗種繁育, 對于不能達到自然成熟的親魚可以采取人工催產(chǎn)促熟的辦法。

表1 2009～2010年大瀧六線魚親魚培育情況Tab. 1 Culture condition of H. otakii parent fish during 2009-2010

2.2 受精率和孵化率

表2為2009～2010年大瀧六線魚采卵、人工授精和孵化情況。采用人工平面授精方法, 受精率93%;采用網(wǎng)箱吊式孵化方法, 孵化率81%。

表2 2009-2010年大瀧六線魚采卵情況Tab. 2 Condition of H. otakii eggs production during 2009-2010

2.3 苗種培育

初孵仔魚在水溫16～17℃, 鹽度29～31的條件下, 經(jīng)90～100 d培育, 平均全長可達5.0～6.0 cm。表 3為 2009～2010年苗種培育情況, 成活率可達40%以上, 超過以往大瀧六線魚育苗成活率。表4為大瀧六線魚苗種生長狀況。

表3 2009～2010年苗種培育情況Tab. 3 Seedling production during 2009～2010

表4 大瀧六線魚生長情況(16～17℃, n=60)Tab. 4 Growth of young H. otakii (16～17℃, n=60)

3 討論

3.1 魚卵來源

大瀧六線魚為一次性產(chǎn)卵魚類, 產(chǎn)黏性卵, 卵塊多數(shù)附著于水深 2～5 m海底的扁江籬(Gracilaria txetorii)、松藻(Codium fragile)上, 少數(shù)產(chǎn)于礁石上[11]。雖然可以通過采集海邊的天然受精卵獲得孵化仔魚進行培育, 這樣對本來就日漸枯萎的自然資源人為地進行了破壞, 難以此法進行規(guī)?；娜斯っ绶N繁育,存在局限性和不穩(wěn)定性。本試驗通過親魚營養(yǎng)強化培育可以在每年的 10月下旬至11月下旬獲得成熟的雌雄親魚, 并開展了未成熟雌魚人工注射催產(chǎn)試驗。這為大瀧六線魚苗種規(guī)?；斯し庇龑ふ伊艘粭l可靠途徑, 避免了對自然資源的毀壞以及增加了人為可控性。對于人工激素催產(chǎn)與自然成熟的親魚在受精卵、孵化率和苗種成活率方面有無差別, 還需進一步研究。

本試驗受精卵均來自人工擠卵授精, 親魚自然產(chǎn)卵操作簡便, 對親魚無損傷, 卵子質(zhì)量好, 它的技術(shù)要領(lǐng)在于培育高質(zhì)量的親魚和親魚的溫光調(diào)控產(chǎn)卵技術(shù)[12]; 另外目前尚無對人工培育子一代苗種進行工廠化養(yǎng)殖培育親魚的研究報道, 這些可以作為下一步研究方向, 為開展全人工苗種繁育進行探討研究。

3.2 人工授精和孵化

大瀧六線魚魚卵較大, 卵徑1.6～2.3 mm, 親魚懷卵量低, 屬黏性卵, 自然狀態(tài)下受精后的卵?；ハ囵ぶ蓤F, 卵塊內(nèi)部的卵則因缺氧而不同程度受到影響, 導(dǎo)致人工條件下采集到的自然受精卵塊孵化率僅有20%左右。在自然海區(qū), 大瀧六線魚產(chǎn)卵于松藻和扁江蘺上, 魚卵成松散排列的球塊狀, 隨著水流的沖擊不斷搖曳, 如此可以獲得充足的溶氧,自然海區(qū)的受精卵塊孵化率達95%以上[8]。

大瀧六線魚人工擠卵授精時遇到海水后會在 10 min內(nèi)迅速凝結(jié)成塊, 這樣不利于精子與卵子的充分結(jié)合, 導(dǎo)致受精率不高。此外大瀧六線魚的孵化時間比較長, 作者的試驗證明 16～17℃的水溫下需要孵化 20～23 d, 如此長時間的孵化, 對于塊狀魚卵來說非常不利。適當提高水溫可以縮短孵化時間, 但是否會影響到孵化率這有待下一步試驗證明。由于卵塊相互重疊、擠壓, 卵塊上的死卵、卵殼等污物覆蓋于好卵之上, 使內(nèi)層卵因長期缺氧而腐敗死亡,導(dǎo)致孵化率較低。

研究表明, 充足的氧氣對于胚胎的正常發(fā)育是必需的, 水產(chǎn)動物在胚胎發(fā)育階段最容易受到水體溶解氧的影響, 當水體溶解氧過低時, 胚胎將出現(xiàn)發(fā)育遲緩、代謝紊亂、仔魚提前脫膜等現(xiàn)象, 最終導(dǎo)致較高的苗種畸形率和死亡率[13]。本研究采取了人工平面授精、網(wǎng)箱吊式孵化的方法[14], 取得了比較理想的結(jié)果, 受精率達到 93%以上, 孵化率達到81%以上。通過整形將魚卵攤成平面, 一般厚度為 2～3層魚卵, 這樣授精時精子可以充分的與成熟的魚卵結(jié)合, 不會由于大瀧六線魚魚卵中大量的黏液遇到海水迅速凝結(jié)成卵塊而導(dǎo)致受精率低。另外結(jié)合網(wǎng)箱吊式孵化, 可以充分利用孵化水體空間, 使每個受精卵都可以和海水接觸, 使受精卵孵化時能夠獲得充足的溶氧, 不會因為塊狀卵而只有外層魚卵與海水接觸, 導(dǎo)致內(nèi)層魚卵因缺氧而逐漸死亡。

3.3 苗種培育

試驗過程中發(fā)現(xiàn), 大瀧六線魚苗種培育過程中主要有 3個死亡期。第一個出現(xiàn)在仔魚孵出后開口前 3～5日齡, 這一階段的死亡率會在 30%左右, 死亡的仔魚多數(shù)為畸形、瘦弱、卵黃較小, 這主要和卵質(zhì)有關(guān), 強化親魚的營養(yǎng)所需, 提高親魚成熟度對保證卵質(zhì)至關(guān)重要[15]。第二個死亡期出現(xiàn)在仔稚魚變態(tài)期間, 約 15～20日齡, 這一階段的死亡率會在20%左右, 這期間正處于仔魚階段向稚魚階段過渡,生理變化劇烈, 各鰭相繼發(fā)生, 對外界環(huán)境和營養(yǎng)要求很高, 死亡仔魚多為營養(yǎng)不良、發(fā)育遲緩難以完成變態(tài)之魚, 除了在營養(yǎng)需求上滿足仔魚對DHA和EPA的需求外, 在培育水體中適當添加有益菌(益生素、復(fù)合細菌EM、光合細菌), 通過改善水質(zhì), 穩(wěn)定環(huán)境也可以提高仔魚的成活率[16]。第三個死亡期出現(xiàn)在 40～60日齡, 死亡率一般在 10%以內(nèi), 這階段主要是稚魚向幼魚過渡, 從稚魚頭部向體后開始逐漸褪去翠綠色出現(xiàn)淺黃色, 期間需要注意水質(zhì)環(huán)境的調(diào)節(jié)和配合餌料的轉(zhuǎn)換。

3.4 幼魚生活環(huán)境

經(jīng)過90～100 d的培育, 大瀧六線魚苗種達5 cm以上, 體色基本由綠色完全變?yōu)辄S褐色, 進入幼魚期, 幼魚的體態(tài)和生活習(xí)性基本和成魚相似。大瀧六線魚主要分布于中國的山東和遼寧等地的近海多巖礁海區(qū)[17], 同時大瀧六線魚及其幼魚的食性分析的結(jié)果表明, 大瀧六線魚的幼魚主要攝食餌料中以端足類、等足類和幼蟹等為主, 成魚主要攝食小型魚蝦蟹, 攝食的生物餌料均屬底棲動物[18], 說明大瀧六線魚的幼魚和成魚均營底棲生活。這就為作者提供了理論依據(jù), 大瀧六線魚屬于底棲性巖礁魚類, 而不屬于中上層魚類。

幼魚期后, 魚苗已經(jīng)不同于仔魚和稚魚期生活在水體中上層, 而是底棲于池底, 只有攝食時候才會游動到水面上層。作者在魚苗培育過程中在幼魚期根據(jù)其生活習(xí)性, 模仿大瀧六線魚的自然生活環(huán)境, 在池底設(shè)置了水泥制的空心磚作為其棲息場所,取得了不錯的效果。大瀧六線魚平時聚集在空心磚內(nèi), 生活狀態(tài)良好, 攝食強烈, 幾乎無死亡, 大大提高了苗種成活率和生長速度。

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