河北省蔚縣人民醫(yī)院 陳利明 苑留云陳海英楊紅兵師 正(張家口075700)

動脈粥樣硬化 (AS)是多種危險因素引發(fā)的一種慢性、進(jìn)行性病理過程。近年大量研究證實(shí)，氧化應(yīng)激(OS)與AS的發(fā)病關(guān)系密切，在AS發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。［1］研究擬從抗氧化應(yīng)激角度探討富硒靈芝防治AS的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 成年健康雄性SD大鼠50只，體質(zhì)量180～200 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號:708056。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 富硒靈芝:在液體培養(yǎng)基中加入亞硒酸鈉培養(yǎng)出富硒靈芝 (含硒量為4.32 mg/g)，［2］課題組實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，80℃烘干，超微粉碎備用。血脂康:北大維信生物科技有限公司，國藥準(zhǔn)字:Z10950029，實(shí)驗(yàn)時配置成0.02 g/mL的水溶液。SOD、MDA、GSH-PX試劑盒:均由南京建成生物工程研究所提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大鼠動脈粥樣硬化模型的建立［3］50只大鼠除10只正常飼料飼養(yǎng)外，其余40只大鼠以促動脈粥樣硬化飼料、普通飲水飼養(yǎng)9周。促動脈粥樣硬化飼料在正常飼料基礎(chǔ)上加入2%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、維生素D3粉劑 (1.25×106U/kg飼料)、3%豬油，實(shí)驗(yàn)開始予每只大鼠30萬U/kg體質(zhì)量的維生素D3右下肢肌肉注射，此后每3周重復(fù)給予上述劑量維生素D3右下肢肌肉注射。

2.2 分組與給藥 50只大鼠飼養(yǎng)于18℃ ～22℃明暗各12 h的清潔級動物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，喂養(yǎng)1周后，分為5組。正常對照組、模型對照組均灌服生理鹽水;富硒靈芝低、高劑量組分別灌服富硒靈芝 (含藥量分別為0.02 g/mL、0.08 g/mL);血脂康對照組灌服血脂康 (0.02 g/mL)。每日1次，給藥體積為1 mL/100 g。連續(xù)9周，第9周末各組大鼠末次給藥后禁食禁水12 h，10%水合氯醛4 mL/kg腹腔注射麻醉后腹主動脈取血。

2.3 檢測方法 SOD、MDA、GSH-PX檢測:采用黃嘌呤氧化酶法測定血清SOD的含量，硫代巴比妥酸 (TBA)法測定血清MDA的含量，DTNB法測定血清GSH-PX活性。

2.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的輸入和計算，其數(shù)據(jù)用(±s)來表示，多組均數(shù)比較，用單因素方差分析法 (One-way ANOVA)，當(dāng)P＜0.05時差異有顯著性。

3 結(jié)果

與正常對照組比較，模型對照組SOD含量、GSH-PX活性均顯著降低 (P＜0.01)，MDA含量顯著升高 (P＜0.01);與模型對照組比較，各治療組均可顯著升高SOD含量，降低MDA含量 (P＜0.05或P＜0.01)，各治療組間比較，差異無顯著性 (P＞0.05)。富硒靈芝高、低劑量組又可升高GSH-PX活性 (P＜0.01)。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血清SOD、MDA含量，GSH-PX活性的比較(±s)

表1 各組大鼠血清SOD、MDA含量，GSH-PX活性的比較(±s)

注:與正常對照組相比，#P＜0.01;與模型對照組相比，★P＜0.05，★★P＜0.01

組 別 n SOD(U/mL) MDA(nmol/mL)GSH-PX(U/mL)10 142.52±14.90 4.39±0.51 1 669.4±170.75模型對照組 10 114.84±8.32# 7.79±0.80# 1 193.4±134.27#低劑量組 10 123.68±12.44★ 6.91±0.82★ 1 383.9±141.46★★高劑量組 10 125.89±9.04★★ 6.52±0.67★★ 1 405.3±183.23★★血脂康組 10 129.94±14.77★★6.34 ±0.86★★正常對照組1 205.4±99.18

4 討論

靈芝是一種珍貴的藥用真菌，具有養(yǎng)心安神、補(bǔ)氣益血、補(bǔ)肺平喘、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固本等功效。靈芝含有多種有效成分，多糖類是其主要有效成分之一。靈芝多糖具有多方面的生物活性和藥理作用，能有效調(diào)節(jié)高血脂動物血脂水平。［4-5］硒是人體必需的微量元素，具有保護(hù)肌體免受氧化損害的功能。硒通過增強(qiáng)谷胱甘肽過氧化物酶GSH-PX的活性，催化氧化型谷胱苷肽 (GSSG)還原為還原型谷胱苷肽 (GSH)，使生物膜和細(xì)胞免遭自由基的損害而減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。人體的硒主要來源于食物，從營養(yǎng)學(xué)和生化代謝角度考慮，生物源有機(jī)硒以其吸收利用率高、毒副作用小等特點(diǎn)優(yōu)越于無機(jī)硒。靈芝對某些微量元素特別是硒具有高度的富集作用，并把無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒，利于人體攝入。本實(shí)驗(yàn)采用的富硒靈芝是靈芝在加硒深層培養(yǎng)中，對無機(jī)硒進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化而成為富含生物有機(jī)硒的靈芝。

根據(jù)損傷反應(yīng)學(xué)說，AS首先由高血脂使動脈的內(nèi)膜受到損傷引起，AS的發(fā)生和發(fā)展，與血清 TC、TG等水平有關(guān)。LDL是AS發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因素，而高密度脂蛋白 (HDL)被認(rèn)為是一種抗AS的脂蛋白，其作用機(jī)制是充當(dāng)逆向轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇的載體，在限制動脈膽固醇的沉積和清除膽固醇上起著重要作用。實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明富硒靈芝能有效調(diào)節(jié)AS大鼠脂質(zhì)代謝異常，并具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。［5］正常情況下肌體內(nèi)存在著氧化-抗氧化系統(tǒng)，當(dāng)人體內(nèi)氧自由基大量產(chǎn)生，或者清除自由基的酶系統(tǒng)作用減弱時，自由基會攻擊脂類、糖、蛋白質(zhì)及核酸等生物大分子，從而引起各種疾病。SOD是肌體重要的內(nèi)源性自由基清除劑，通過歧化方式清除超氧化物，它的活性反映機(jī)體對抗自由基損傷的抵抗能力;MDA是氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化。GSH-PX可以降低氧自由基，提高氧化酶活性并抑制脂質(zhì)過氧化物形成。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型對照組相比，各治療組均可升高AS大鼠血清SOD含量，降低MDA含量。富硒靈芝高、低劑量組又可升高GSH-PX活性。表明富硒靈芝對動脈粥樣硬化大鼠具有很好的抗氧化損傷作用。

［1］Aviram M.Atherosclerosis:cell biology and lipoproteins-oxidative stress and paraoxonases regulate atherogenesis［J］.Curr Opin Lipidol，2010，21(2):163-164

［2］牛麗穎，石玉娥，劉振國，等.人工富硒靈芝菌絲中微量元素及氨基酸含量分析［J］.中國食用菌，1998，17(6):31-32

［3］溫進(jìn)坤，韓梅，杜瑋南，等.一種快速建立大鼠動脈粥樣硬化模型的實(shí)驗(yàn)方法［J］.中國老年學(xué)雜志，2001，21(1):50-52

［4］羅少洪，陳偉強(qiáng)，黃韜，等.靈芝多糖對高血脂大鼠血脂水平的影響［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2005，21(5):589-590

［5］陳利明，楊紅兵，苑留云，等.富硒靈芝對動脈粥樣硬化大鼠血脂代謝及內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響［J］.河北中醫(yī)藥學(xué)報，2012;27(1):10-11