武桂娟 趙偉麗 趙 楠 孫世曉

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院·哈爾濱 150040）

我們?cè)谇捌谘芯勘砻?，白芨多糖?duì)大鼠應(yīng)激性潰瘍具有較好療效［2］，但對(duì)大鼠乙酸性潰瘍治療作用及機(jī)制尚不清楚。故本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠慢性乙酸性實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型，觀察白芨多糖對(duì)胃潰瘍的抑制作用，并通過檢測(cè)血清SOD活性、MDA含量、NO活性、ET—1含量，以及潰瘍周圍胃粘膜EGF和EGFR的表達(dá)探討白芨多糖對(duì)胃潰瘍的治療機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性清潔級(jí)wistar大鼠，體重200±20g，購(gòu)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK黑2008-004。實(shí)驗(yàn)藥品：白芨多糖由本實(shí)驗(yàn)室通過水浸醇提方法獲得，經(jīng)測(cè)定多糖含量達(dá)50%。鹽酸雷尼替丁由中諾藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)：10118012，加蒸餾水配成2.83mg/ml低溫避光儲(chǔ)存?zhèn)溆?。試劑：用于檢測(cè)SOD、MDA、NO、ET-1的試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所；大鼠EGF定量檢測(cè)試劑盒購(gòu)于尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)（北京）有限公司；兔抗大鼠EGF多克隆抗體、兔抗人鼠EGFR多克隆抗體、SABC試劑盒、DAB顯色劑購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。儀器：游標(biāo)卡尺，上海精密儀器儀表有限公司；組織勻漿器，江蘇耀華玻璃儀器廠；MRl812高速冷凍離心機(jī)，法國(guó)Jouan公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱，天津泰斯特儀器有限公司；恒溫水浴鍋，上海躍進(jìn)醫(yī)療儀器廠；722分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司；顯微鏡測(cè)微尺，上海光學(xué)儀器廠；RM2015切片機(jī)，德國(guó)萊卡；醫(yī)學(xué)圖像分析管理系統(tǒng)，麥克奧迪圖像技術(shù)有限公司。

1.2 方法

按完全隨機(jī)方法將大鼠分為6組，每組10只，分別為正常組、模型組、白芨多糖高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性對(duì)照組。除正常組外，其余按文獻(xiàn)報(bào)道方法制備大鼠乙酸性潰瘍模型。造模后第三天給藥，各組每天灌胃1次，2ml/只，連續(xù)治療14天。其中正常組、模型組給予生理鹽水；白芨多糖高、中、低劑量為60mg/kg、30mg/kg、15mg/kg；陽性對(duì)照組給予鹽酸雷尼替丁28.35mg/kg。末次給藥后，禁食（不禁水）24小時(shí)，用過量乙醚處死大鼠，觀察比較潰瘍情況，采集標(biāo)本并檢測(cè)分析各項(xiàng)相關(guān)指標(biāo)：①用游標(biāo)卡尺測(cè)定潰瘍指數(shù)（UI），首先觀察潰瘍?cè)顐€(gè)數(shù)，然后分別用游標(biāo)卡尺測(cè)量出潰瘍的長(zhǎng)徑和寬徑，將兩者相乘并求其總和作為UI；②計(jì)算潰瘍抑制百分率，公式為潰瘍抑制百分率=（模型組UI一給藥組UI）/模型組UI×100%；③按試劑盒要求測(cè)定血清SOD、MDA、NO；④用雙抗體夾心ABC-ELISA方法檢測(cè)ET-1；⑤用免疫組化方法檢測(cè)胃粘膜中EGF和EGFR。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 白芨多糖對(duì)乙酸胃潰瘍大鼠UI及潰瘍抑制百分率影響見表1

表1 各組人鼠UI及潰瘍抑制百分率的比較（±S）

表1 各組人鼠UI及潰瘍抑制百分率的比較（±S）

注：與正常組比較：*P

組別 n UI（治療14天后）潰瘍抑制率（%）正常組 10 — —模型組 10 10.74±3.16* —60mg/kg組 10 1.82±0.23# 86.64 30mg/kg組 10 2.16±0.37# 76.65 15mg/k8組 10 3.51±1.02# 70.42雷尼替丁組 10 2.65±1.33# 76.85

從表1可見，模型組UI與正常組相比存在顯著性差異，P<0.01；白芨多糖低、中、高劑量組UI與模型組比較均具有顯著性差異，P<0.01；雷尼替丁組UI與模型組相比具有顯著性差異，P<0.01；白芨多糖高、中、低劑量對(duì)潰瘍的抑制率分別為86.64%、76.65%和70.42%。

2.2 白芨多糖對(duì)乙酸胃潰瘍大鼠血清SOD、MDA、NO、ET—1的影響見表2

表2 各組大鼠血清SOD、MDA、N0、ET—1變化的比較（±S）

表2 各組大鼠血清SOD、MDA、N0、ET—1變化的比較（±S）

注：與正常組比較：*P

ET—1(pg/ml)正常組 10109.28±32.54 11.434±3.02 60.21±12.08 22.49±9.12模型組 10 62.46±29.26* 18.52±2.11* 32.56±7.22* 64.89±10.21*60mg/kg組 10 89.67±32.02# 12.22±2.13# 51.64±5.42# 26.48±6.14#30mg/kg組 10 78.24±19.34# 13.27±1.64# 39.92±10.51# 28.12±10.20#15mg/kg組 10 70.47±21.56# 13.42±2.36# 42.40±8.66# 28.02±9.15#雷尼替丁組 10 80.48±26.10# 12.36±2.20# 39.85±10.12# 29.93±11.14#組別 n SOD（U/ml）MDA(nmol/ml)NO(μmol/L)

由表2可見，與正常組相比，模型組大鼠血清SOD、MDA、N0、ET—1有顯著改變，二者紀(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理存在顯著性差異，P<0.01。各治療組SOD、MDA、N0、ET—1與模型組相比有明顯變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理具有顯著性差異，P<0.01。

2.3 白芨多糖對(duì)乙酸胃潰瘍大鼠EGF和EGFR表達(dá)的影響見表3

表3 各組大鼠EGF和EGFR表達(dá)的比較（±S）

表3 各組大鼠EGF和EGFR表達(dá)的比較（±S）

注：與正常組比較：*P

EGFR陽性面積（%）正常組 10 5.08±1.09 7.89±0.95模型組 10 16.25±9.36* 17.40±5.36*60mg/kg組 10 25.35+10.11# 24.32±10.21#30mg/kg組 10 23.43±9.46# 22.59±8.12#15mg/kg組 10 21.47±9.62# 21.01±6.33#雷尼替丁組 10 22.15±10.12# 22.37±9.05#組別 n EGF陽性面積（%）

由表3可見，模型組EGF和EGFR與正常組相比有明顯變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理P<0.01，各治療組EGF和EGFR與模型組相比有明顯變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理P<0.01。

3 討論

有研究表明［3、4］，胃粘膜在化學(xué)物質(zhì)、缺血等刺激下，可產(chǎn)生大量氧自由基導(dǎo)致粘膜損傷，氧自由基對(duì)胃粘膜損害可能為脂質(zhì)過氧化損害與共價(jià)鍵結(jié)合性損害。自由基清除劑別嘌嶺能促進(jìn)潰瘍愈合，明顯降低潰瘍的復(fù)發(fā)率［5、6］。因此，提高體內(nèi)氧自由基清除系統(tǒng)活性對(duì)治療潰瘍病具有重要意義。SOD是機(jī)體重要的抗氧化酶，可以清除自由基，MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的中間產(chǎn)物，本實(shí)驗(yàn)觀察了白芨多糖對(duì)乙酸性胃潰瘍大鼠血清SOD活性、MDA含量的影響，結(jié)果表明，白芨多糖高、中、低劑量能顯著升高乙酸性胃潰瘍大鼠血清SOD活性，升降低MDA含量，說明白芨多糖的治療作用與提高體內(nèi)氧自由基清除系統(tǒng)活性有關(guān)。

研究表明，NO作為內(nèi)源性血管舒張因子在消化系統(tǒng)有著廣泛的調(diào)節(jié)作用，對(duì)胃粘膜有明顯保護(hù)作用［7、8、9］。ET—1是強(qiáng)烈的內(nèi)源性縮血管物質(zhì)，可明顯降低胃粘膜血流量，是胃粘膜損傷的始動(dòng)因子［10、11］。本實(shí)驗(yàn)觀察了白芨多糖對(duì)乙酸性胃潰瘍大鼠血清NO活性、ET—1含量的影響，結(jié)果表明，白芨多糖高、中、低劑量能顯著升高乙酸性胃潰瘍大鼠血清NO活性，并降低ET—1含量，說明白芨多糖的治療作用與改善粘膜血流發(fā)揮胃粘膜的保護(hù)作用有關(guān)。

EGF具有抑制胃酸分泌、促進(jìn)上皮增殖及營(yíng)養(yǎng)胃粘膜作用，與EGFR結(jié)合在保護(hù)胃粘膜免受損傷因子破壞、維持胃粘膜完整性方面具有重要意義［12、13、14］。本實(shí)驗(yàn)觀察了白芨多糖對(duì)乙酸性胃潰瘍大鼠潰瘍周圍胃粘膜EGF和EGFR表達(dá)的影響，結(jié)果表明，白芨多糖高、中、低劑量能使乙酸性胃潰瘍大鼠胃粘膜EGF和EGFR表達(dá)上調(diào)，從而起到促進(jìn)潰瘍愈合的作用。

白芨多糖高、中、低劑量對(duì)潰瘍的抑制率分別達(dá)到86.64%、76.65%和70.42%，說明白芨多糖對(duì)大鼠乙酸性胃潰瘍有明顯治療作用，其治療機(jī)制與增強(qiáng)胃粘膜抗氧化能力，抑制自由基生成，促進(jìn)潰瘍局部胃粘膜上皮細(xì)胞增生，加強(qiáng)損傷組織修復(fù)有關(guān)。

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