高 輝

(黑龍江省澳利達(dá)藥業(yè)股份有限公司·哈爾濱 150001)

山枚注射液是由山楂、刺枚果兩藥味組成。山楂味酸甘，微溫，為藥食兩用之品，有消食化積、行氣散瘀的功效。刺玫果甘酸、微溫，具有健脾理氣，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用。本實(shí)驗(yàn)通過對山枚注射液有效成分的含量測定，為本產(chǎn)品的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

島津SCL-10A高效液相色譜儀，島津SPD-10A紫外檢測器，昆山KQ-200DB型超聲儀。

1.2 藥品

牡荊素鼠李糖苷對照品(批號111668-201101)、金絲桃苷對照品(批號111521-201103)、蘆丁對照品(批號110752-201009)(購自中國藥品生物制品檢定所)，山枚注射液自制。

1.3 試劑

甲醇為色譜純，乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HypersilODS2(5μm，5mm×200mm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液(40：60)；流速：1ml/min；檢測波長：359nm。

2.2 對照品溶液的配制

精密稱取牡荊素鼠李糖苷對照品3.925mg，金絲桃苷對照品2.775mg，蘆丁對照品9.675mg，置于25ml容量瓶中，用50%乙醇溶解并稀釋至刻度，制成混合溶液，作為對照品溶液，進(jìn)樣10μl。

2.3 供試品溶液的配制與測定

精密量取樣品50ml，置于干燥蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?0%乙醇使溶解，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，并用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，進(jìn)樣10μl。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取干燥至恒重的牡荊素鼠李糖苷對照品2mg，金絲桃苷對照品2mg，蘆丁對照品5mg，置于25ml容量瓶中，加入適量的50%乙醇超聲振蕩使其溶解，加50%乙醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液1、2、3、4、5ml于10ml容量瓶中，用50%乙醇稀釋至刻度，再分別注入高效液相色譜儀各10μl，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程如下：

牡荊素鼠李糖苷：Y=4.10×10-8X+5.17×10-2，r=0.9993， 線 性 范 圍 0.08-0.4μg， 峰 面 積RSD=1.20%。

金絲桃苷：Y=1.801×1O-8X-7.39×10-3，r=0.9989，線性范圍0.08-0.4μg,峰面積RSD=1.20%。

蘆 ?。篩=8.74×10-8X+6.73×10-3，r=0.9987， 線性范圍0.2-1.0μg，峰面積RSD=0.85%。

2.5 精密度試驗(yàn)

取線性關(guān)系項(xiàng)下牡荊素鼠李糖苷濃度為0.008mg/ml，金絲欏瞄濃度為O.008mg/ml，蘆丁濃度為0.02mg/ml的混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣六次，測定其峰面積，經(jīng)計算，牡荊素鼠李糖苷峰面積RSD=0.93%，金絲桃苷峰面積RSD=0.11%，蘆丁峰面積RSD=0.12%。

蘆丁含量峰面積積分值1 349891 317519 748774 2 350084 317369 748251 3 347186 317487 749563 4 342401 317612 747998 5 345957 317447 748106 6 343259 318301 750112平均含量 346463 317623 748801 RSD% 0.93 0.11 0.12樣品 牡荊素鼠李糖苷峰面積積分值金絲桃苷含量峰面積積分值

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號下樣品進(jìn)行五次平行試驗(yàn)，分別進(jìn)行測定，測得牡荊素鼠李糖苷0.0105mg/ml，RSD=1.7%；金絲桃苷O.0052mg/ml，RSD=1.9%；蘆丁0.0170mg/ml，RSD=0.93%。

表1

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，室溫下放置，在配制后的0、2、4、6、8、24依次測定，結(jié)果在24小時內(nèi)的RSD如下：牡荊素鼠李糖苷1.36%，金絲桃苷1.9%，蘆丁0.83%。

時間(h)牡荊素鼠李糖苷含量(mg／ml)蘆丁含量(mg／ml)0 0.0104 0.0052 0.0170 2 0.0105 0.0051 0.0168 4 0.0103 0.0053 0.0172 6 0.0106 0.0054 0.0169 8 0.0104 0.0053 0.0171 24 0.0102 0.0052 0.0170 RSD% 1.36 1.9 0.83金絲桃苷含量(mg／ml)

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的同批樣品6份，精密加入一定量的對照品，依供試品處理方法，測定樣品中牡荊素鼠李糖苷，金絲桃苷和蘆丁的含量，計算平均回收率。結(jié)果分別為：牡荊素鼠李糖苷99.45%(RSD=1.72%)，金絲桃苷98.87%(RSD=0.82%)，蘆丁97.15%(RSD=1.68%)，(n=6)。見表 1、2、3。

表1

表2

表3

2.9 樣品含量的測定

取三批樣品，按上述方法制備成供試品溶液，每批測定3次，見表4。

表4

3 討論

3.1 進(jìn)行溶劑選擇

比較了50%乙醇、30%乙醇，結(jié)果以后者的牡荊素鼠李糖苷，金絲桃苷和蘆丁提取完全，且分離較好。

3.2 色譜條件篩選

在流動相中曾選擇用甲醇-水系統(tǒng)，試驗(yàn)結(jié)果表明采用甲醇-磷酸溶液系統(tǒng)，三對照品的峰形對稱，保留時間適中，分離效果好。

[1] 中國藥典.一部[S].2005.273.

[2] 王福成，豆文太，等.HPLC測定山楂精中牡荊苷、牡荊苷-2″-O-鼠李糖苷、金絲桃苷、蘆丁的含量.中成藥.2002，24(2)，122-124.