孫 蓓 ，張 蓓 ，陳雙璐

（1.天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院門診辦公室，天津市腫瘤防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300060；2.天津市第一中心醫(yī)院藥劑科，天津300192；3.天津市兒童醫(yī)院藥劑科，天津300074）

肺閉寧顆粒是以天津市兒童醫(yī)院老中醫(yī)的經(jīng)驗(yàn)處方為基礎(chǔ)，經(jīng)工藝改良后制成的醫(yī)院制劑，由黃芩、枳殼、麻黃等中藥組成，具有宣肺解熱、化痰定喘之功效。麻黃在制劑中為君藥，其有效成分麻黃堿有松弛平滑肌、收縮血管作用，為麻黃平喘的主要成分；另一有效成分偽麻黃堿，可用于傷風(fēng)感冒、鼻黏膜消炎[1]。由于麻黃屬于控制的毒麻類成分，為了有效控制該制劑的質(zhì)量，提出了用高效液相色譜法測(cè)定其中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量，取得滿意效果。

1 材料和方法

1.1 儀器與試藥 LC-2010A型高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，Lcsolution工作站（日本島津公司）；雙頻恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171241-200506）、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171237-200505）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；乙腈、磷酸、三乙胺為色譜純；水為純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；肺閉寧顆粒（天津市兒童醫(yī)院制劑）；其余試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6mm)；流動(dòng)相：乙腈-水-磷酸-三乙胺（3∶97∶0.1∶0.2）；檢測(cè)波長(zhǎng)為 213 nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

1.2.2 溶液的制備

1.2.2.1 對(duì)照品溶液：精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對(duì)照品5.70mg、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品4.45mg置10mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解后，稀釋至刻度，搖勻。精密量取2mL置10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL含鹽酸麻黃堿114μg、鹽酸偽麻黃堿89μg）。

1.2.2.2 供試品溶液：取肺閉寧顆粒約3 g，精密稱定，加水20mL使其混懸均勻，加濃氨水1mL，用三氯甲烷提取 4次（20，20，15，15mL），合并三氯甲烷提取液，加鹽酸乙醇液（1→20）1mL，低溫蒸干，殘?jiān)芯芗尤臌}酸乙醇液（1→20）2mL使溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，用流動(dòng)相洗滌容器并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2.3 陰性樣品溶液：按處方比例及制法，制成缺麻黃的陰性對(duì)照樣品[2]，取約3 g，精密稱定，按照“1.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液[2]。

2 結(jié)果

2.1 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果表明，供試品溶液與對(duì)照品溶液出現(xiàn)保留時(shí)間相同的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液在相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，證明其他藥材及輔料成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾。見圖1。麻黃堿與偽麻黃堿的保留時(shí)間分別為12.259min和13.773min，分離度R≥1.5，滿足含量測(cè)定要求。

2.2 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液適量，依次注入高效液相色譜儀 4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0 μL，按照“1.2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，以濃度（μg）為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程為：鹽酸麻黃堿Y=1 810 115.79X+3 664.86，r=0.999 99（n=6）；鹽酸偽麻黃堿：Y=1 855 704.49X+4 290.53，r=0.999 97（n=6）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.456～1.596μg濃度范圍內(nèi)、鹽酸偽麻黃堿在0.356～1.246μg濃度范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn) 取“1.2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按照“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)定鹽酸麻黃堿峰與鹽酸偽麻黃堿面積。結(jié)果表明鹽酸麻黃堿峰面積平均值為2 063 725，RSD為0.60%；鹽酸偽麻黃堿峰面積平均值為1 650 330，RSD為0.45%，精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品（20111101）6份，按照“1.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按照“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，每次進(jìn)樣量為10μL，結(jié)果樣品中鹽酸麻黃堿平均含量為0.365 1mg/g，RSD為1.07%；鹽酸偽麻黃堿平均含量為0.230 7mg/g，RSD為1.11%。表明方法的重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（20111101）的樣品適量，按照“1.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按照“1.2.1”項(xiàng)色譜條件分析，分別在 0、2、4、6、8 h進(jìn)樣10μL，測(cè)得鹽酸麻黃堿峰面積值的RSD為0.71%，鹽酸偽麻黃堿面積值的RSD為0.83%。

2.6 加樣回收試驗(yàn) 取同一批號(hào)（20111101）已知含量的樣品適量，研成粉末，取1.5 g，共6份，精密稱定，分別精密加入鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液（0.565 mg·mL-1）1mL、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品溶液（0.412mg·mL-1）1mL，按照“1.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，制得供測(cè)定回收率用供試品溶液，按照“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，進(jìn)樣10μL，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率分別為：鹽酸麻黃堿99.49%，RSD為1.73%；鹽酸偽麻黃堿98.56%，RSD為1.12%（表1、2）。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收率試驗(yàn)Tab1 Ephedrinehydrochloride recovery rate test

表2 鹽酸偽麻黃堿加樣回收率試驗(yàn)Tab2 Pseudoephedrinehydrochloride recovery rate test

2.7 樣品含量測(cè)定 取4批肺閉寧顆粒樣品，按照“1.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按照“1.2.1”項(xiàng)色譜條件分析，進(jìn)樣10μL，計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量。結(jié)果見表3。

表3 肺閉寧顆粒中鹽酸麻黃堿（…）與鹽酸偽麻黃堿（…）的含量Tab3 Ephedrinehydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride content of Feibining granules

3 討論

3.1 樣品提取方法的選擇 文獻(xiàn)報(bào)道可采用超聲法提取中藥制劑中鹽酸麻黃堿，然而試驗(yàn)證明，此法雖簡(jiǎn)單易行，但肺閉寧顆粒成分復(fù)雜，簡(jiǎn)單的超聲提取后，樣品溶液在液相色譜中不能達(dá)到很好的基線分離[3-5]。本試驗(yàn)利用麻黃堿與偽麻黃堿都能溶于水，加堿后的游離物能被三氯甲烷、乙醚等有機(jī)溶劑萃取，加酸后成鹽復(fù)溶于水這一性質(zhì)，將肺閉寧顆粒的水溶液堿化后分別用乙醚、三氯甲烷萃取，從比較的結(jié)果看，用三氯甲烷萃取易分層，且三氯甲烷液在下層，處理較為方便；用乙醚萃取，易乳化，不易分層，造成有效成分提取不完全，故選用三氯甲烷為提取溶劑。提取溶劑的用量及提取次數(shù)經(jīng)比較后，結(jié)果認(rèn)為，提取4次，加入量為20、20、15、15mL的樣品中麻黃堿與偽麻黃堿的含量最高。如何將三氯甲烷回收也是本試驗(yàn)的關(guān)鍵，如果溫度過(guò)高，由于麻黃堿與偽麻黃堿的沸點(diǎn)較低，會(huì)揮發(fā)損失，因此試驗(yàn)中選用減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，溫度控制在45～55℃之間比較合適。

3.2 色譜條件的選擇 由對(duì)照品溶液掃描得知，麻黃堿在210 nm、偽麻黃堿在213 nm處有最大吸收，故選擇213 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，此波長(zhǎng)處檢驗(yàn)靈敏度高，基線波動(dòng)小。

對(duì)于流動(dòng)相的選擇，由于麻黃堿與偽麻黃堿是同分異構(gòu)體，甲醇-水、乙腈-水等流動(dòng)相無(wú)法將兩種成分有效分離，本文還試驗(yàn)了乙腈-0.2%磷酸溶液（5∶95）[6]做流動(dòng)相，兩種成分的分離也不是很好，且色譜峰有拖尾現(xiàn)象，而以乙腈-水-磷酸-三乙胺（3∶97∶0.1∶0.2）為流動(dòng)相時(shí)，由于加入了三乙胺，避免了色譜峰拖尾的現(xiàn)象，同時(shí)麻黃堿與偽麻黃堿的分離度大于1.5，且主峰與雜質(zhì)峰分離效果較好，避免了雜質(zhì)對(duì)測(cè)定的影響。

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