羅靜波

·實(shí)驗(yàn)研究·

HPLC法測(cè)定鹽酸左西替利嗪分散片的含量及有關(guān)物質(zhì)

羅靜波

目的使用HPLC法測(cè)定鹽酸左西替利嗪分散片的含量及有關(guān)物質(zhì)。方法HypersilBDS C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，um)，流動(dòng)相每升為0.02 mol磷酸二氫銨(用磷酸調(diào)PH-3.2):乙腈(60: 40)加入0.5%三乙胺，流速每分鐘約為0.8 mL，進(jìn)樣量20uL，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm。結(jié)果鹽酸左西替利嗪質(zhì)量濃度在0.08～0.12 g/L內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9992)，平均回收率為99.8%，RSD= 0.56%(n=9)。結(jié)論HPLC法的操作方法簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，靈敏度高。

HPLC法;鹽酸左西替利嗪分散片;含量;有關(guān)物質(zhì)

鹽酸左西替利嗪片是新一代非鎮(zhèn)靜的抗組胺藥物，是西替利嗪的R-異構(gòu)體，具有受體選擇性強(qiáng)、作用靶位明確、代謝迅速、不良反應(yīng)較少等特點(diǎn)，主要用于治療變應(yīng)性鼻炎［1］。本文主要針對(duì)鹽酸左西替利嗪分散的成分和相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行HPLC法測(cè)定。

1 資料與方法

1.1 一般資料 Waters515 hPLC儀;HypersilBDSC18色譜柱; PHS-3 c型酸度計(jì)(上海雷韻試驗(yàn)儀器制造有限公司);電子天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán));鹽酸左西替利嗪對(duì)照品(批號(hào)010220，5 m l/片)和鹽酸左西替利嗪分散片(批號(hào):010307、010306、010305，5 mg/片)均由成都英創(chuàng)科技發(fā)展有限公司提供;乙腈(批號(hào):000115101，天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司);重蒸水(第三軍醫(yī)大學(xué)薪橋醫(yī)院藥學(xué)部自制);磷酸二氫銨(批號(hào):20010112，中國(guó)成都化學(xué)試劑廠);乳糖(批號(hào): 99072601，哈爾濱制藥總廠);淀粉(批號(hào):00080502，山東聊城阿華只要有限公司);微晶纖維素(批號(hào):991025，江蘇常熟市用藥輔料廠);硬脂酸鎂(批號(hào):00052401，天津市天大化工實(shí)驗(yàn)廠)。其他試劑為分析純。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 色譜條件 HypersilBDS C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，um)，流動(dòng)相每升為0.02 mol磷酸二氫銨(用磷酸調(diào)PH-3.2):乙腈(60∶40)加入0.5%三乙胺，流速每分鐘約為0.8 ml，進(jìn)樣量20μl，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm。

1.2.2 溶液配制 ①制備供試品溶液:取鹽酸左西替利嗪分散片樣品10片，將其研碎并磨成粉末狀后，取100 ml的容器將藥物樣品放入，再加入40 ml水，對(duì)其進(jìn)行10 min的超聲處理，之后讓溫度下降至室溫，并加水稀釋將其搖晃均勻，使用0.45 um的微孔濾膜過(guò)濾取得濾液。②制備空白溶液:鹽酸左西替利嗪分散片的構(gòu)成主要是由淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素等。按照①的制備方法將其制作成空白的溶液。③制備對(duì)照品溶液:用精密儀器測(cè)定鹽酸左西替利嗪分散片藥物5 mg，按照①的制備方法將其制成對(duì)照品溶液，放置在100 ml的容器中，并依法操作。

1.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取出制備好的空白溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液，按照1.2.1的色譜條件取得色譜件，研究結(jié)果表明，樣品保留在5 min處沒(méi)有見(jiàn)到其他早知干擾，理論塔板數(shù)為2000以上。

1.2.4 線性關(guān)系考察 稱取鹽酸左西替利嗪分散片，要求其干燥并恒溫，25 mg放置在100 ml的量瓶中，加入流動(dòng)相溶液將其溶解，并加水稀釋將其搖晃均勻，放置作為備用液。將備用液去25 m l放置瓶中，家如流動(dòng)相稀釋搖勻，分別將濃度調(diào)為10μg/ml、30μg/m l、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的對(duì)照品溶液，按照1.2.1的色譜條件記錄峰面積，以濃度X為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析，制出回歸曲線，其方程式為:r=0.9997，A=671421X-14428，線性范圍在10 um/ml-100 um/m l。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 選取相同的供試品溶液，于0 h、4 h、8 h、12 h，按1.2.1色譜調(diào)節(jié)操作，每個(gè)樣品均策動(dòng)五次，并記錄峰面積和色譜。研究結(jié)果顯示，供試品溶液12 h內(nèi)的RSD為0.53%，穩(wěn)定性好，并滿足試驗(yàn)的要求。

1.2.6 回收率實(shí)驗(yàn) 稱取等重的鹽酸做西替利嗪分散片對(duì)照品，將其放入容量為50 m l的瓶子中，并將適量的輔料加入其中，加入適量的水直至刻度，搖晃均勻后，便可得到高濃度92.27μg/ml溶液，中濃度65.09μg/ml溶液及低濃度11.02 μg/m l溶液。將其過(guò)濾后取所得到的過(guò)濾液，按上述的色譜條件進(jìn)樣，對(duì)樣品的鋒面值進(jìn)行記錄，以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程對(duì)其濃度進(jìn)行計(jì)算。詳情見(jiàn)表1。

2 討論

HPLC法測(cè)定準(zhǔn)確、靈敏度較高、簡(jiǎn)便易行，可以有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。流動(dòng)相選擇的方面是通過(guò)對(duì)溶液中容易發(fā)生離子化的樣品分離，使用調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值方法。因?yàn)辂}酸左西替利嗪分散片具有叔胺的結(jié)構(gòu)，和固定相表面沒(méi)有被硅烷化游離硅醇基間，發(fā)生形成氫鍵或者離子交換，西替利嗪色譜峰出現(xiàn)了拖尾，時(shí)間保留較長(zhǎng)，分離較不理想。流動(dòng)相加入有一定比例的有機(jī)胺調(diào)節(jié)劑，即可競(jìng)爭(zhēng)掩蔽或抑制固定相表面游離的硅醇基活性，則堿性藥物易于改善峰形、出峰。經(jīng)過(guò)優(yōu)化的考察，HPLC法流動(dòng)相是采用0.02 mol/L的磷酸二氫銨:乙晴(60:40)，縮短保留時(shí)間，有良好的峰形，獲得較好的重現(xiàn)性。

［1］ 陳繼川，姬長(zhǎng)友，等.鹽酸左西替利嗪對(duì)124例變應(yīng)性鼻炎的前瞻性臨床研究．重慶醫(yī)學(xué)，2006，35(4):364-366．

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005．

410005長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院藥劑科

表1 鹽酸做西替利嗪分散片回收實(shí)驗(yàn)效果比較(n=3)

加入量(mg) 測(cè)得量(mg) 回收率(mg)x(%) RSD(%) 40.2 40.4 100.4 39.4 39.3 91.1 40.3 40.0 99.2 50.1 50.3 100.3 99.7 0.55 50.3 50.0 99.5 50.6 50.2 99.1 60.0 60.2 100.2 59.3 58.9 99.2 60.2 60.3 100.1

1.2.7 精密度試驗(yàn) 分別配置濃度為100.0μg/ml、50.0 μg/ml、10.0μg/ml高中低三種濃度的樣品溶液，在1 d內(nèi)連續(xù)測(cè)定3次，1周內(nèi)連續(xù)測(cè)定3次，并計(jì)算3種濃度的日內(nèi)RSD值分別是2.12%、0.42%、0.45%(n=3)，周內(nèi)的RSD值分別是2.40%、2.62%、1.88%(n=3)。試驗(yàn)結(jié)果精密度較好。

1.2.8 樣品含量的測(cè)定 取鹽酸左西替利嗪分散片樣品20片，將其研碎并磨成粉末狀后，取50 m l的容器將藥物樣品放入，加入流動(dòng)相溶液將其溶解，并加水稀釋將其搖晃均勻過(guò)濾，取20um濾液注入色譜儀。并記錄色譜;另取鹽酸左西替利嗪分散片對(duì)照品適量，加入流動(dòng)相溶液將其溶解，將其濃度稀釋成0.10 g/L，按照外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品含量，有關(guān)物質(zhì)和樣品含量測(cè)定結(jié)果如下:批號(hào)010305，其含量99.12%，有關(guān)物質(zhì)為0.36%;批號(hào)010306，其含量100.26%，有關(guān)物質(zhì)為0.41%;批號(hào)010307，其含量99.34%，有關(guān)物質(zhì)為0.33%;

1.2.9 有關(guān)物質(zhì)的檢查 采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法［2］。取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于鹽酸左西替利嗪5 mg)，加流動(dòng)相制成約0.2 g/L的溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液;將供試品容液用流動(dòng)相稀釋100倍，為1%對(duì)照液。取對(duì)照溶液20μl進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%;再精密量取供試品溶液20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時(shí)間的3倍?？鄢軇┓搴洼o料峰，量取色譜圖上除去鹽酸左西替利嗪峰外各雜志峰的總和與對(duì)照品主峰峰面積比較，計(jì)算雜志含量，見(jiàn)表2。由此可見(jiàn)三批樣品的雜質(zhì)含量均小于1%。