方麗 陳獻花 李家忠 李雪來 趙金川 （浙江省醫(yī)療器械檢驗所 杭州 310009）

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復方卡波姆誘導的兔慢性高眼壓模型探討

方麗 陳獻花 李家忠 李雪來 趙金川 （浙江省醫(yī)療器械檢驗所 杭州 310009）

采用新西蘭兔16只，每只兔的左眼為模型眼，右眼為對照眼。注入復方卡波莫溶液0.3ml，測量眼壓、角膜厚度并觀察兔眼的變化。結果表明，16只兔均造模成功，在手術4周內(nèi)平均眼壓值為23~25mmHg，術后4周的實驗眼平均眼壓仍有23.17mmHg，對照眼為14.33 mmHg，2組相比較有顯著性差異(P<0.05)。因此，兔眼前房注射復方卡波姆是一種理想的慢性高眼壓模型。

高眼壓 模型 動物 卡波姆

青光眼是一種以視神經(jīng)損害和視野缺損為特征的致盲眼病，其發(fā)病機制目前尚不十分明確，普遍認為眼壓升高是青光眼視神經(jīng)損害發(fā)生和發(fā)展機制中最主要的危險因素[1]。通過實驗方法誘導動物高眼壓，是研究其發(fā)病機制的主要手段，而建立有效穩(wěn)定的高眼壓模型是進行研究的關鍵[2]。因此，筆者在2010年9~11月用復方卡波姆誘導，建立兔眼慢性高眼壓模型，以眼壓、并發(fā)癥及病理檢查作為觀察指標，評價其建模效果。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器 含0.3%卡波姆和0.025%地塞米松的復方卡波姆溶液，pH值4，卡波姆(山東正大福瑞達藥液集團生產(chǎn))，0.5%地塞米松(廣州白云山天心制藥有限公司生產(chǎn))；手持接觸眼壓計(美國Reichert公司)；裂隙燈顯微鏡(蘇州六六視覺科技有限公司)；角膜A型超聲測量儀(美國Alcon公司)；Nikon ECLIPSE E200光學顯微鏡。

1.2 試驗動物及分組 新西蘭兔16只，雌雄不限，體重2~3kg，兔齡12周。由浙江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所提供[SCXK(浙)2008-0025]。造模前用裂隙燈顯微鏡、眼底鏡檢查眼前段及眼底無異常。每只動物的左眼為模型眼，右眼為對照眼。

1.3 方法 新西蘭兔耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，0.4%倍諾喜眼液(鹽酸奧布卡因)液滴眼局部麻醉。試驗眼注射復方卡波姆溶液前，先在對側角膜緣穿刺，然后注入復方卡波姆溶液0.3ml。對照眼單純角膜緣穿刺。測量眼壓、角膜厚度并觀察兔眼的變化。手術4周后耳緣靜脈注射空氣處死動物，取雙側眼球，常規(guī)固定、脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，光學顯微鏡觀察。

1.4 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理 所獲數(shù)據(jù)作配對資料的t檢驗，使用excel進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，顯著標準P=0.05。

2 結果

2.1 眼壓變化 試驗前雙眼眼壓無明顯差異(P>0.05)，基線眼壓為12.58mmHg，試驗眼術后平均眼壓為37.3mmHg，眼壓峰值為55.5mmHg，時間為術后8h，術后4周的平均眼壓為23.17mmHg，對照眼為14.67mmHg，兩組相比差異顯著(P＜0.05)。

表1 實驗眼、對照眼眼壓比較 (mmHg)

注：試驗眼與對照眼相比，術后各時間段差異顯著(P＜0.05)。

2.2 眼前部、角膜變化 試驗眼前房注射后均出現(xiàn)不同程度的睫狀充血、角膜水腫及前房混濁。1周左右達到高峰，角膜厚度為902.33mm，后逐漸下降，4周時仍有463.67mm，與術前395.67mm相比差異顯著(P＜0.05)。

表2 試驗眼、對照眼角膜中心厚度比較 (mm)

注：試驗眼與對照眼相比，術后各時間段差異顯著(P＜0.05)。

2.3 眼組織病理改變 試驗眼角膜上皮組織有增生，可見少量淋巴細胞浸潤，部分小梁網(wǎng)纖維組織增生，變致密(圖1、2)。對照眼未見明顯異常(圖3、4)。

圖1 試驗組(HE×40)

圖2 試驗組(HE×100)

圖3 對照組(HE×40)

圖4 對照組(HE×100)

3 討論

青光眼作為人類主要致盲性眼病之一，對青光眼的發(fā)病機制、發(fā)展過程并不是十分明確，有效治療手段也欠缺，需要進行大量的動物實驗進行探討。選擇方法簡單、成本低廉、易于操作、易于控制、眼壓穩(wěn)定的理想青光眼實驗動物模型十分必要。目前國內(nèi)外建立實驗性青光眼模型的方法大致可分為3類[3]：一是破壞小梁結構，引起房水流出受阻導致高眼壓的方法，如高滲鹽水注入房水靜脈，以及激光破壞小梁網(wǎng)組織等；二是從眼球外部來妨礙房水正常引流的方法，如增加上鞏膜靜脈壓力升高眼，結扎渦靜脈、結扎眼球后部的血管、熱灼燒或化學燒灼角膜緣結膜下組織、硅膠帶眼球環(huán)扎術等；三是阻塞房角流出道引起的高眼壓法，如前房內(nèi)注入甲基纖維素、a糜蛋白酶、血影細胞、空氣、礦物油等。

復方卡波姆誘導的兔慢性高眼壓模型即為含0.3%卡波姆和0.025%地塞米松的復方卡波姆溶液注入前房阻塞房角流出道引起的。卡波姆是內(nèi)烯酸與烯內(nèi)基蔗糖或季戊四醇交鏈而成的高分子聚合物，是一種優(yōu)良的藥劑新輔料[4]。有良好的乳化性、增稠性、助懸性和成膜性。當ph值較低時呈溶液狀，隨著ph值的升高，藥液的黏稠度逐漸增加而形成水凝膠狀；而當ph值為6~12時最為黏稠；在高眼壓模型中主要應用的是該藥的黏合性、凝膠性、增稠性等特點，使注入前房的卡波姆溶液在房水作用下隨著ph值的升高變?yōu)槟z狀阻礙房水排出。將卡波姆液中加入地塞米松的目的：一是增加眼壓升高的幅度及延長眼壓升高的時間，二是減輕眼部炎性反應。而對側角膜緣穿刺形成一個針孔，是由于注入復方卡波姆溶液過程中，眼內(nèi)容物突然增加，會造成眼內(nèi)壓急劇升高，房水在過高的壓力下會自動從此針孔中滲漏出，防止兔眼角鞏膜擴張。

本試驗由復方卡波姆溶液誘導的高眼壓模型，操作簡單，眼壓升高穩(wěn)定，4周后仍有23.17mmHg，持續(xù)時間長。雖然由于眼壓升高和炎癥刺激出現(xiàn)不同程度的睫狀充血、角膜水腫及前房混濁等情況，但大部分持續(xù)一段時間后可減輕或消失。試驗術后8h眼壓即達到峰值，但角膜水腫情況為1周時最高，3周時結膜充血及前房滲出已經(jīng)不明顯，角膜厚度雖然仍比正常為高，但角膜已經(jīng)完全透明，眼壓仍高，還可持續(xù)較長時間，可進行青光眼實驗研究。同時本實驗病理改變顯示部分小梁網(wǎng)纖維組織增生，變致密，從病理上間接證明慢性青光眼模型建立成功。

兔作為實驗動物，其成本低廉，雖然其房角與人的房角有明顯的形態(tài)學差異，如梳狀韌帶、狹窄薄弱的睫狀肌系統(tǒng)以及鞏膜靜脈叢，但兔的房水外流通道卻和人眼一樣，而且由于兔眼大小接近于人眼，可用于觀察手術對高眼壓模型的降眼壓作用，是理想的青光眼模型動物。

[1] van Buskirk EM. Coiffi glaucomatous optic neuropathy[J]. Am Ophthalmol 1992,113(4): 447-451.

[2] 徐巖, 陳祖基, 宋潔貞. 復方卡波姆誘發(fā)的兔高眼壓模型與其它兔高眼壓模型的比較研究[J]. 中華眼科雜志, 2002, 38(3): 172-175.

[3] 陳曄, 崇曉霞. 慢性高眼壓動物模型的研究進展[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志, 2008, 40(5): 519-522.

[4] 羅明生, 高天惠. 藥劑輔佐大全[M]. 成都: 四川科學技術出版社, 1995: 383-386.

（2011–11–03）

浙江省實驗動物科研計劃項目2008F80008

S858.291

A

1007-1733(2012)01-0011-02