王勇 李琴 （濟(jì)寧出入境檢驗(yàn)檢疫局 山東 濟(jì)寧 272000）

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腌制姜中涕滅威及其代謝產(chǎn)物殘留量的檢測方法研究

王勇 李琴 （濟(jì)寧出入境檢驗(yàn)檢疫局 山東 濟(jì)寧 272000）

本研究建立了腌制姜樣品中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜農(nóng)藥殘留的檢測方法。樣品用乙腈提取，以弗羅里硅土固相柱凈化，用丙酮+乙腈(4+1)洗脫液洗脫，以多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)對涕滅威及其代謝產(chǎn)物殘留量進(jìn)行檢測。用外標(biāo)法定量分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.9990~0.9992，平均回收率為82.4%~86.9%。結(jié)果表明，本方法雜質(zhì)干擾少，操作簡便，基線降低，回收率與靈敏度高。

弗羅里硅土固相柱 腌制姜 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀

涕滅威及其代謝產(chǎn)物系氨基甲酸酯類農(nóng)藥，由于高效、經(jīng)濟(jì)而被廣泛應(yīng)用于蔬菜生產(chǎn)過程，對生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重的污染。食物中農(nóng)藥殘留量過高而引發(fā)的中毒事件頻繁發(fā)生。越來越多的科研人員關(guān)注農(nóng)副產(chǎn)品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測方法的研究，建立高效、快速、靈敏的多品種農(nóng)殘檢測方法成為迫切需要解決的課題[1]。

本文在現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，通過對樣品的前處理?xiàng)l件的改變和色譜條件優(yōu)化，采用反應(yīng)監(jiān)測(MRM)的高效液相色譜儀對蔬菜中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，目的在為蔬菜、農(nóng)產(chǎn)品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測探索出一種高效、準(zhǔn)確、靈敏且可操作性較強(qiáng)的分析方法。

1 材料與方法

1.1 試劑

甲醇、甲酸和丙酮(HPLC級(jí))，乙腈(LC級(jí))；無水硫酸鈉：650℃灼燒4h，貯存于燥器中，冷卻后備用；弗羅里硅土：650℃烘烤4h(使用前于140℃烘2h，5%水脫活)；0.1%甲酸溶液；0.22μm有機(jī)相微孔濾膜。涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜標(biāo)準(zhǔn)溶液(均為100mg/L，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用甲醇稀釋成10mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使用時(shí)再用甲醇稀釋成1mg/L混標(biāo)使用液。

1.3 儀器和設(shè)備 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源(ESI)源；均質(zhì)器；天平，感量為0.01g；振蕩提取器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；旋渦混勻器；固相萃取裝置；氮吹儀。

1.4 色譜、質(zhì)譜條件

1.4.1 色譜條件 Hypersil GOLD-1.9μm，50mm×2.1mm (i.d)色譜柱；柱溫30℃；進(jìn)樣體積10μl。梯度洗脫程序見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

1.4.2 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測；電噴霧電壓4500V；鞘氣壓力30Arb；清掃氣壓力0；輔助氣壓力10Arb；離子源溫度350℃；涕滅威及其代謝物的采集參數(shù)見表2。

表2 涕滅威及其代謝物的采集參數(shù)

1.5 樣品處理

1.5.1 固相萃取小柱制備 稱取0.5g弗羅里硅土填入固相萃取空柱上，用5ml丙酮+乙腈(4+1)淋洗，棄淋洗液。小柱待用。

1.5.2 提取 稱取5g試樣(精確至0.01g)于50ml離心管中，加入20ml乙腈，均質(zhì)2min，振蕩提取20min，上清液過無水硫酸鈉收集到分液漏斗中，殘?jiān)偌尤?0ml乙腈，重復(fù)上述操作1次，合并2次濾液，加入20ml用乙腈飽和正己烷，振蕩10min，靜止分層，棄正己烷層，乙腈層于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，用2ml丙酮+乙腈(4+1)溶解，待凈化。

1.5.3 凈化 將提取液全部轉(zhuǎn)移至活化好的弗羅里硅土柱中，用5ml丙酮+乙腈(4+1)洗脫，收集全部流出液，氮?dú)獯蹈珊?，?ml乙腈-0.1%甲酸水溶液(10+90)定容，過0.22mm微孔濾膜，上液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀，待測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理的優(yōu)化

采用自制弗羅里硅土(florish)柱對提取物進(jìn)行凈化。用不同比例的丙酮+乙腈的淋洗液進(jìn)行測試，本實(shí)驗(yàn)室比較了丙酮、乙腈、甲醇、乙酸乙酯作洗脫劑，單用乙酸乙酯、甲醇、丙酮作洗脫劑，色素會(huì)被洗脫液洗脫，處理液呈綠色。而用乙腈作洗脫液，色素殘留在柱子上，但有一部分極性農(nóng)殘組分留在柱上，不能完全洗脫。用丙酮+乙腈按4+1，1+1，9+1比例進(jìn)行洗脫測試，得出丙酮+乙腈為4+1時(shí)，既能完全洗脫所測試的組分，也能讓色素絕大部分留在柱上，達(dá)到去除干擾的目的。目前所采用的SN/T2441-2010標(biāo)準(zhǔn)采用NH2SPE小柱[2]，洗脫液為甲醇—二氯甲烷(1+99)，其回收率在72%~76%之間，而本試驗(yàn)通過更換固相萃取柱和洗脫液使樣品的回收率有所提高。

2.2 儀器條件的優(yōu)化

2.2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化 首先對涕滅威及其代謝物進(jìn)行質(zhì)譜條件的優(yōu)化，選擇ESI+作為電離模式，在多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式下對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)先進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜分析(Q1掃描)，得到分子離子峰，選取相應(yīng)的母離子峰，對其子離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析(Q2掃描)，得到碎片離子信息。然后，再對得到的質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，得到相應(yīng)的碰撞能量。

2.2.2 色譜條件的優(yōu)化 取涕滅威及其代謝物的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，進(jìn)樣10μl，使用水-乙腈為流動(dòng)相，調(diào)節(jié)各組分的比例和流速對色譜條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，在流動(dòng)相流速為300μl/min，乙腈-水梯度為5~95時(shí)涕滅威及其代謝物有較好的峰形和響應(yīng)值。

2.3 線性范圍及定量限

制備濃度系列為0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述分析條件進(jìn)樣，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表3 方法線性回歸方程和檢出限 (mg/kg)

3 結(jié)論

通過對前處理方法的改進(jìn)和儀器條件的優(yōu)化，可增強(qiáng)樣品凈化后待測組分的洗脫能力，以提高樣品回收率和改善待測組分色譜峰形。本方法采用弗羅里硅土作為固相填充料來檢測腌制姜中的涕滅威及其代謝物，雜質(zhì)干擾少，操作簡便，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果可靠，且試劑用量較少，是批量樣品多組分檢測分析的好方法。

[1] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. SN/T 2441-2010 進(jìn)出口食品中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜殘留量檢測方法液相色譜－質(zhì)譜/質(zhì)譜法[S].

[2] 徐陸妹, 樓冰冰. 蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測方法研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2007, 17(5): 852-853.

（2011–10–20）

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