慕悅意， 李筱梅， 李 勇， 夏永輝， 田 鵬， 楊佳彧， 張華梅， 曹 增

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院，天津 300020)

XE-5000血液分析儀檢測有核紅細(xì)胞的評(píng)價(jià)

慕悅意， 李筱梅， 李 勇， 夏永輝， 田 鵬， 楊佳彧， 張華梅， 曹 增

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院，天津 300020)

目的 探討Sysmex XE-5000血液分析儀(簡稱XE-5000)自動(dòng)計(jì)數(shù)外周血有核紅細(xì)胞(NRBC)的方法學(xué)特點(diǎn)，評(píng)價(jià)其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 評(píng)析XE-5000重復(fù)性、線性范圍、攜帶污染率，并對(duì)391份靜脈血標(biāo)本做常規(guī)測定，評(píng)價(jià)其對(duì)NRBC的報(bào)警、定量測定，并與手工涂片法進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果 XE-5000測定NRBC的重復(fù)性較好，線性范圍較廣，攜帶污染率較小。當(dāng)NRBC比例＞5．0% 時(shí)，則引起白細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴百分比計(jì)數(shù)假性增多。以顯微鏡復(fù)檢為金標(biāo)準(zhǔn)，XE-5000與顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)外周血中NRBC數(shù)量有極好的相關(guān)性(r=0．997)，其NRBC報(bào)警的敏感性為100．0%，特異性為85．4%。結(jié)論 XE-5000可靈敏、準(zhǔn)確、精密地自動(dòng)計(jì)數(shù)外周血中NRBC，適合臨床檢測NRBC。

有核紅細(xì)胞;血液分析儀;評(píng)價(jià)

血液中出現(xiàn)有核紅細(xì)胞(NRBC)是由于骨髓幼稚的紅系細(xì)胞釋放入外周血所致，健康成年人血液中無NRBC，但在新生兒或幼兒血液中可見，成人外周血中一旦出現(xiàn)NRBC，則為病理狀態(tài)，常見于一些溶血性貧血、惡性腫瘤、骨髓纖維化等多種疾病。因此，準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血液中NRBC具有重要的臨床意義［1］。多年來，計(jì)數(shù)NRBC最經(jīng)典的方法是瑞氏染色血涂片人工在光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)。顯微鏡法計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)相對(duì)較少，其計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確和精密度受技術(shù)人員的主觀因素影響大，Sysmex XE-5000血液分析儀(簡稱XE-5000)使用聚次甲基熒光染液對(duì)NRBC和白細(xì)胞(WBC)進(jìn)行核酸染色，經(jīng)半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測，使得NRBC計(jì)數(shù)作為常規(guī)檢測項(xiàng)目成為可能。本研究通過對(duì)XE-5000計(jì)數(shù)NRBC同顯微鏡法計(jì)數(shù)NRBC結(jié)果進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)自動(dòng)化血液分析儀性能及其臨床應(yīng)用價(jià)值。

材料和方法

一、標(biāo)本來源

隨機(jī)選擇2010年10月至2011年4月在中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院門診患者391例，其中男274例，女117例，平均年齡36歲(14～65歲)。全部病例均經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查后符合相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］，其中急性白血病85例，慢性白血病58例，缺鐵性貧血52例，巨幼性貧血27例，骨髓增生異常綜合征32例，多發(fā)性骨髓瘤37例，正常人100名。

二、儀器與試劑

全部標(biāo)本用Sysmex HST-2流水線(XE-5000 2臺(tái)，SP-1000推片機(jī)1臺(tái))檢測，配套試劑、全血質(zhì)控物及校準(zhǔn)物均由Sysmex公司提供。瑞-姬氏染液由貝索生物技術(shù)公司提供。Olympus CI-I20雙目顯微鏡(Olympus，日本)。

三、質(zhì)量控制

XE-5000安裝、調(diào)試完畢后，按照儀器操作程序，用配套的全血校準(zhǔn)物將全血細(xì)胞參數(shù)校準(zhǔn)。儀器采用Sysmex公司提供的高、中、低3種配套e-CHECK質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，在每次檢測標(biāo)本前清洗并打印本底數(shù)據(jù)，試驗(yàn)前、中、后均測試質(zhì)控品監(jiān)測，結(jié)果均在其靶值允許的范圍內(nèi)。標(biāo)本均抽血2 mL置乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)真空抗凝管中，混勻，室溫放置，所有檢測均在4 h內(nèi)完成。

四、方法學(xué)評(píng)價(jià)

1．精密度 批內(nèi)精密度用新鮮全血標(biāo)本(高、中、低值)連續(xù)測定20次，計(jì)算均值 (個(gè))、標(biāo)準(zhǔn)差(s)、變異系數(shù)(CV)［3］。

2．線性 以1例 NRBC數(shù)值較高(53．0×109/L)的血標(biāo)本用生理鹽水稀釋為90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10% 的濃度，用XE-5000測定各稀釋標(biāo)本2次取其均值為測定值，各稀釋度理論值為X，實(shí)測值為Y，做出兩者相關(guān)性。

3．?dāng)y帶污染率 先測一定數(shù)量標(biāo)本，待測定數(shù)達(dá)到穩(wěn)定后。從血液分析儀已檢測出NRBC值的同一批標(biāo)本中選擇高值連續(xù)測定3次(H1、H2、H3)，隨后立即取1份低值標(biāo)本連續(xù)測定3次(L1、L2、L3)。按公式計(jì)算:攜帶污染率=(L1－L3)/(H3 － L3)×100%［3］。

4．血標(biāo)本檢測 所有標(biāo)本按臨床標(biāo)本的檢測流程和方法進(jìn)行全血細(xì)胞分析檢測，WBC分類計(jì)數(shù)參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)規(guī)定的方法，由2名富有經(jīng)驗(yàn)的主管技師采用雙盲法獨(dú)立對(duì)患者血涂片進(jìn)行復(fù)檢，每片計(jì)數(shù)200個(gè)WBC，同時(shí)計(jì)數(shù)所見的NRBC。取均值與XE-5000檢測結(jié)果進(jìn)行比較［4］。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較2種方法的相關(guān)性采用線性回歸分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、方法學(xué)評(píng)價(jià)

1．精密度 XE-5000測高、中、低值 NRBC標(biāo)本的均值、s、CV 分別為 6．0、1．2、3．7，21．7、6．5、3．0 和51．6、13．5、2．6，批內(nèi) CV 均 ＜5%?？梢娫擁?xiàng)檢測結(jié)果具有良好精密度和重復(fù)性。

2．線性 以1例 NRBC數(shù)值較高(53．0×109/L)的血標(biāo)本用生理鹽水稀釋，兩者的相關(guān)性為 Y=0．989X －0．034，相關(guān)系數(shù)(r)=0．996，P ＜0．001。

3．?dāng)y帶污染率 測得攜帶污染率為0．36%，該方法攜帶污染率較小，在可接受范圍內(nèi)。

二、NRBC對(duì)WBC計(jì)數(shù)和分類的影響

應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行NRBC的檢測，XE-5000能同時(shí)計(jì)數(shù)不同通道的WBC，包括去除Diff通道和Baso通道的WBC計(jì)數(shù)。從表1可以看出當(dāng)XE-5000測定NRBC比例＞5%時(shí)WBC計(jì)數(shù)與去除NRBCWBC計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．001)，同時(shí)人工分類淋巴細(xì)胞與XE-5000的淋巴細(xì)胞分類差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．001)。

三、儀器NRBC報(bào)警與顯微鏡鏡檢情況比較

對(duì)儀器法和顯微鏡法所計(jì)數(shù)的NRBC百分率進(jìn)行相關(guān)性分析，XE-5000分析測定值為X，顯微鏡法測定值為 Y，兩者相關(guān)性 Y=1．147 X+0．175，r=0．997，P ＜0．001。以顯微鏡計(jì)數(shù)NRBC為“金標(biāo)準(zhǔn)”，顯微鏡計(jì)數(shù) NRBC比例≥2%而XE-5000檢測到NRBC視為真陽性;顯微鏡計(jì)數(shù)NRBC≥2%而XE-5000未檢測到NRBC視為假陰性;顯微鏡計(jì)數(shù)NRBC比例＜2%而XE-5000檢測到NRBC視為假陽性;顯微鏡計(jì)數(shù)NRBC比例＜2%而XE-5000未檢測到NRBC視為真陰性。結(jié)果見表2。

XE-5000測定NRBC的敏感性為100．0%，特異性為85．4%，說明儀器性能優(yōu)越。但假陽性比例比較高，大多數(shù)都集中在NRBC比例＜2%的區(qū)間內(nèi)。

表1 XE-5000計(jì)數(shù)NRBC對(duì)儀器計(jì)數(shù)WBC及淋巴細(xì)胞分類的影響

表2 XE-5000與手工染色涂片鏡檢計(jì)數(shù)NRBC比較

討 論

血液分析儀自動(dòng)計(jì)數(shù)外周血中NRBC是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于臨床。Sysmex HST-302是世界上最先進(jìn)血液分析儀流水線之一。XE-5000具有靈活的5種檢測模式和真正隨機(jī)進(jìn)樣分析，同時(shí)設(shè)置了體液檢測和外周血干細(xì)胞檢測模式，可以滿足臨床不同標(biāo)本檢測要求。應(yīng)用WBC Baso和WBC Diff檢測通道、半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞原理結(jié)合細(xì)胞化學(xué)熒光染色技術(shù)對(duì)血液進(jìn)行檢測。XE-5000利用熒光染色對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，測定其側(cè)向熒光強(qiáng)度(反映細(xì)胞核的大小)和前向散射光強(qiáng)度(反映細(xì)胞體積的大小)，將其與WBC、RBC以及血小板區(qū)別開，通過流式技術(shù)對(duì)NRBC進(jìn)行計(jì)數(shù)，為臨床實(shí)驗(yàn)室簡便、快速的篩查NRBC提供了可能。

XE-5000計(jì)數(shù)NRBC在不同數(shù)量的標(biāo)本中有較好的重復(fù)性，高、中、低值的CV值都在理想的范圍之內(nèi)，與國內(nèi)報(bào)道低值標(biāo)本NRBC數(shù)值較小，CV值稍大，大約15%左右不太一致，可能與我們選擇的標(biāo)本不同有關(guān)。在(0～53)×109/L范圍內(nèi)計(jì)數(shù)NRBC具有良好的線性，與理論值高度相關(guān)(r=0．996)。Walters等［5］報(bào)道 XE-2100 計(jì)數(shù)NRBC在(0～50)×109/L范圍內(nèi)具有良好的線性，與本研究相似。攜帶污染率結(jié)果為0．36%，表明在測定過程中，高值標(biāo)本對(duì)低值標(biāo)本幾乎無影響［6］。以上表明 XE-5000計(jì)數(shù) NRBC基本可滿足臨床病例檢測的需要。

一般血液分析儀在計(jì)數(shù)WBC時(shí)均將NRBC計(jì)在WBC之內(nèi)，故 NRBC增多時(shí)可顯著影響WBC計(jì)數(shù)，使WBC呈假性升高。XE-5000可自動(dòng)計(jì)數(shù)NRBC，并將其從WBC中去除NRBC，報(bào)告真正的WBC數(shù)，使其在存在NRBC的情況下計(jì)數(shù)出準(zhǔn)確的WBC數(shù)量。我們的研究中可以看出，隨著NRBC比例增高對(duì)WBC計(jì)數(shù)影響逐漸顯著，NRBC數(shù)量較少時(shí)對(duì)WBC計(jì)數(shù)影響不大，當(dāng)NRBC比例＞5．0% 時(shí)則引起WBC假性增多，應(yīng)報(bào)告減去 NRBC的 WBC更為準(zhǔn)確［7］。同時(shí)，我們還發(fā)現(xiàn)在NRBC比例＞5．0% 的病例中，XE-5000篩查法較顯微鏡法人工鏡檢的淋巴細(xì)胞比例增高，外周血中出現(xiàn)的幼紅細(xì)胞多為晚幼紅細(xì)胞，晚幼紅細(xì)胞形態(tài)特征與外周血中小淋巴細(xì)胞非常相似。推測在篩查法中儀器將NRBC歸類于淋巴細(xì)胞，而且NRBC比例越高這種現(xiàn)象越明顯，此時(shí)應(yīng)以人工鏡檢為準(zhǔn)［8］。

XE-5000儀器計(jì)數(shù)法與顯微鏡目測計(jì)數(shù)法測定NRBC結(jié)果相關(guān)性良好(r=0．997)。在我們的研究中可以看到XE-5000篩查功能敏感性為100．0%，特異性為85．4%，儀器法檢測NRBC具有較高的敏感性，但假陽性率太高，其原因可能是儀器設(shè)置的提示閾值較低以增加提示的敏感性，減少漏掉幼紅細(xì)胞的機(jī)會(huì)，說明此法有過篩價(jià)值但無確診意義［9］。有些標(biāo)本XE-5000計(jì)數(shù)陽性而顯微鏡計(jì)數(shù)為0，此種現(xiàn)象均見于儀器計(jì)數(shù)NRBC比例較低(0．0% ～2．0%)的情況，其原因除儀器辨別細(xì)胞誤差外，還可能是儀器計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于人工鏡檢，發(fā)現(xiàn)NRBC的概率相對(duì)高［10］。而對(duì)低含量的標(biāo)本顯微鏡鏡檢僅分類200個(gè)WBC，加之血涂片上細(xì)胞分布的誤差，有可能出現(xiàn)漏檢。

總之，外周血中NRBC是多種疾病過程中可出現(xiàn)的一種病理狀態(tài)，計(jì)數(shù)NRBC有較為廣泛的臨床意義。XE-5000能較快地計(jì)數(shù)NRBC，且有較高的敏感性和特異性，為臨床診療工作提供了更多的方便，但不能完全替代血涂片鏡檢，對(duì)于提示檢測結(jié)果異常的標(biāo)本應(yīng)進(jìn)一步查找病因，以免漏診。

［1］ 張之南，楊天楹，郝玉書．血液病學(xué)［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:1670-1675．

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Evaluation on nucleated red blood cell detection by XE-5000 automated hematology analyzer

MU Yueyi，LI

Xiaomei，LI Yong，XIA Yonghui，TIAN Peng，YANG Jiayu，ZHANG Huamei，CAO Zeng． (Blood Disease Hospital，Institute of Hematology，Chinese Academy ofMedical Science and Peking Union Medical College，Tianjin 300020，China)

Objective To evaluate the clinical application significance and methodology characteristic of Sysmex XE-5000 automated hematology analyzer(XE-5000)to count nucleated red blood cell(NRBC)．M ethods The repeatability，linear range and carryover rate of XE-5000 were evaluated．A total of 391 blood samples weremeasured，and the alarm and quantitative determination of XE-5000 for NRBC were evaluated．The results were compared with manualmicroscopy．Results The XE-5000 results showed good repeatability，linear range and low carryover rate．When NRBC% ＞5．0%，it caused false increasing of leucocyte and lymphocyte．The results ofmanualmicroscopy were as a gold standard．The correlation was good between the XE-5000 andmanualmicroscopy(r=0．997)．The sensitivity for NRBC was 100．0%，and the specificity was 85．4%．Conclusions NRBC counting by XE-5000 is sensitive，accurate and reliable，which is suitable for the clinical detection of NRBC in peripheral blood．

Nucleated red blood cell;Hematology analyzer;Evaluation

2011-07-05)

(本文編輯:范基農(nóng))

1673-8640(2012)08-0667-04

R446．11

A

天津市自然科學(xué)基金基礎(chǔ)項(xiàng)目(08JCYBJC06500)

慕悅意，男，1983年生，學(xué)士，技師，主要從事臨床檢驗(yàn)工作。

曹 增，聯(lián)系電話:022-27405803。