蘇國東，劉茂軍，周勇岐，2，劉冬霞，甘 源，朱曉瑋，2，毛火云，2，邵國青

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所·農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心，南京 210014;2.南京天邦生物科技有限公司，南京 211102)

豬支原體肺炎(Mycoplasma Pneuoniae of swine，MPS)又稱地方性肺炎，該病是由豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneuoniae)引起的一種豬慢性呼吸道傳染?。?］。凡是有養(yǎng)豬的國家和地區(qū)都有此病存在。感染后病豬發(fā)生干咳、低燒、生長(zhǎng)緩慢，飼料報(bào)酬低，發(fā)病率高，死亡率低，嚴(yán)重制約我國養(yǎng)豬業(yè)向前發(fā)展［2-3］。

防控豬支原體肺炎已成為豬場(chǎng)難纏的問題，疫苗防控是控制該病的重要手段［4］。為給豬場(chǎng)提供更加有效的豬支原體肺炎活疫苗，江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)研究所經(jīng)歷五十多年研制成功豬支原體肺炎活疫苗(168株)。本研究評(píng)價(jià)了該疫苗的免疫效力和免疫期，以及與同類制品的差異。

1 材料

1.1 疫苗、稀釋液和培養(yǎng)基 3批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)(X+15)代和豬肺炎支原體JS株組織強(qiáng)毒由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所保存。5批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)(X+15)代由南京天邦生物科技有限公司生產(chǎn)。豬支原體肺炎活疫苗由北京海淀中海動(dòng)物保健科技公司生產(chǎn)。疫苗專用稀釋液由南京邦生物科技有限公司制備。KM2培養(yǎng)基由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所制備。

1.2 試驗(yàn)豬 試驗(yàn)使用5～15日齡健康小豬220頭，來源于江蘇省農(nóng)科院豬場(chǎng)，仔豬和哺乳母豬均為豬肺炎支原體IHA抗體陰性，飼養(yǎng)于江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物房，各組隔離飼養(yǎng)，飼喂無抗生素飼料，飲用自來水。120頭商品豬來源于廣東某豬場(chǎng)，一直飼養(yǎng)于該豬場(chǎng)。

2 方法

2.1 免疫效力試驗(yàn) 25頭5～15日齡健康仔豬分成5組，每組5頭。用3批豬支原體肺炎活疫苗(168株)按10倍稀釋成每頭份1 mL，分別肺內(nèi)注射各1組，另設(shè)攻毒對(duì)照組和健康對(duì)照組各5頭不免疫。在免疫后60 d，用豬肺炎支原體JS株組織強(qiáng)毒1∶100稀釋后，氣管內(nèi)注射5 mL，對(duì)所有免疫組和攻毒對(duì)照組試驗(yàn)豬進(jìn)行攻毒。攻毒后25 d，觀察臨床癥狀，撲殺5組試驗(yàn)豬，按照28分評(píng)分法計(jì)算肺病變指數(shù)，以肺病變減少率達(dá)到60%以上判為保護(hù)［5］。

2.2 免疫期試驗(yàn) 100頭5～15日齡健康易感豬分成5組，每組20頭，每頭在5～15日齡仔豬通過肺內(nèi)接種豬支原體肺炎活疫苗(168株)1頭份。免疫后5個(gè)月、6個(gè)月、7個(gè)月、8個(gè)月，1～4組各取5頭豬逐次進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，第5組各取5頭不攻毒作為對(duì)照。在攻毒后25 d內(nèi)，觀察所有豬的臨床癥狀;在攻毒后25 d后，對(duì)所有豬進(jìn)行剖檢，計(jì)算肺病變指數(shù)，判定保護(hù)率。

2.3 免疫效力比較試驗(yàn) 35頭5～15 d齡健康易感仔豬分成4組，第1組、第2組各10頭分別按疫苗使用說明肺內(nèi)免疫豬支原體肺炎活疫苗(168株)和北京中海動(dòng)物保健科技公司生產(chǎn)的豬支原體肺炎活疫苗;第3組5頭不免疫，作攻毒對(duì)照組;第4組5頭不免疫，作健康對(duì)照組。在疫苗免疫后60 d，第1組、第2組和第3組用豬肺炎支原體JS株組織強(qiáng)毒1∶100稀釋氣管內(nèi)注射5 mL進(jìn)行攻毒，第4組5頭豬不攻毒作健康對(duì)照組。攻毒后25 d，觀察臨床癥狀，撲殺5組試驗(yàn)豬，計(jì)算肺病變指數(shù)，判定保護(hù)率。

2.4 免疫期比較試驗(yàn) 80頭健康易感豬分成4組，1、2組各20頭分別按使用說明免疫中海動(dòng)物保健科技公司生產(chǎn)的豬支原體肺炎活疫苗和南京天邦生物科技有限公司生產(chǎn)的豬支原體肺炎活疫苗(168株)，3組20頭不免疫作攻毒對(duì)照，4組20頭不免疫不攻毒作健康對(duì)照。免疫后5個(gè)月、6個(gè)月、7個(gè)月、8個(gè)月，1～3組各取5頭用豬肺炎支原體JS株組織強(qiáng)毒1∶100倍稀釋逐次氣管內(nèi)注射5 mL進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，4組5頭不攻毒作為對(duì)照;在攻毒后25 d內(nèi)，觀察所有豬的臨床癥狀，在攻毒后25 d后，對(duì)所有豬進(jìn)行剖檢，計(jì)算肺病變指數(shù)，判定保護(hù)率。

2.5 臨床免疫試驗(yàn) 用5批次南京天邦生物科技有限公司生產(chǎn)的豬支原體肺炎活疫苗(168株)在廣東某豬場(chǎng)進(jìn)行免疫，每批次免疫20頭，1頭份/頭，對(duì)照20頭不免疫。疫苗免疫后2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月進(jìn)行臨床觀察，觀察是否有食欲不振、弓背、長(zhǎng)期咳嗽、低燒、生長(zhǎng)緩慢和皮毛粗亂等臨床癥狀。免疫5個(gè)月后對(duì)所有試驗(yàn)豬進(jìn)行剖檢，計(jì)算肺病變指數(shù)，判定保護(hù)率。

3 結(jié)果與分析

3.1 免疫效力試驗(yàn)結(jié)果 豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫5～15日齡仔豬60 d后攻毒，在攻毒25 d后解剖觀察肺部病變情況見圖1。結(jié)果顯示，3個(gè)免疫組平均肺病變指數(shù)均與攻毒對(duì)照組差異顯著，與健康對(duì)照組無差異，攻毒保護(hù)率均在80%以上。

3.2 免疫期試驗(yàn)結(jié)果 3批次免疫組免疫5個(gè)月和6個(gè)月后攻毒，25 d內(nèi)80%以上免疫豬不表現(xiàn)豬支原體肺炎臨床癥狀;免疫7個(gè)月后攻毒25d內(nèi)仍有60%以上免疫豬不表現(xiàn)臨床癥狀。攻毒25 d后逐次解剖5頭，各組豬的平均肺病變指數(shù)見圖2。結(jié)果顯示，3批次豬支原體活疫苗(168株)免疫5～7個(gè)月攻毒，3個(gè)免疫組平均肺病變指數(shù)均與攻毒對(duì)照組差異顯著，與健康對(duì)照組無差異，攻毒保護(hù)率均在60%以上;免疫后8個(gè)月攻毒，3個(gè)免疫組平均肺病變指數(shù)均與攻毒對(duì)照組和健康對(duì)照組均差異顯著，攻毒保護(hù)率均在40%以上，表明豬支原體活疫苗(168株)的免疫期至少在6個(gè)月以上。

圖1 3批疫苗免疫攻毒肺病變結(jié)果

圖2 3批疫苗不同免疫期攻毒肺病變結(jié)果

3.3 同類制品免疫效力比較試驗(yàn)結(jié)果 在兩種豬支原體肺炎活疫苗免疫5～15日齡仔豬60 d后攻毒。攻毒25 d內(nèi)，免疫試驗(yàn)組和同類疫苗免疫試驗(yàn)組都有80%免疫豬沒有表現(xiàn)臨床癥狀，攻毒25 d后解剖觀察肺部病變，結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示，兩種豬支原體肺炎活疫苗免疫后60 d有80%免疫豬獲得保護(hù)，兩組免疫試驗(yàn)組平均肺病變指數(shù)無差異，均與攻毒對(duì)照組差異顯著，與健康對(duì)照組無差異。

3.4 同類制品免疫期比較試驗(yàn)結(jié)果 兩種豬支原體肺炎活疫苗免疫5～15日齡仔豬5個(gè)月、6個(gè)月和7個(gè)月后攻JS強(qiáng)毒株，攻毒25 d內(nèi)80%以上免疫豬不表現(xiàn)豬支原體肺炎臨床癥狀;免疫8個(gè)月后攻毒25 d內(nèi)仍有60%以上免疫豬不表現(xiàn)臨床癥狀。攻毒25 d后逐次解剖5頭，免疫豬免疫7個(gè)月后仍有60%以上免疫豬的肺部無病變。攻毒對(duì)照組攻毒后25 d內(nèi)和25 d后解剖表現(xiàn)豬支原體肺炎的臨床癥狀和典型的肺部病變，健康對(duì)照組沒有表現(xiàn)肺部病變。說明南京天邦生產(chǎn)的豬支原體活疫苗(168株)和北京中海的支原體肺炎活疫免疫5～7個(gè)月后均有80%以上的豬獲得保護(hù)，兩種豬支原體活疫苗的免疫期至少在6個(gè)月以上，免疫保護(hù)期沒有明顯差異。兩種豬支原體肺炎活疫苗不同免疫期的攻毒保護(hù)率見圖4。

圖3 兩種活疫苗攻毒保護(hù)比較試驗(yàn)結(jié)果

圖4 兩種豬肺炎支原體疫苗不同免疫期免疫攻毒肺病變結(jié)果

3.5 臨床免疫試驗(yàn)結(jié)果 5批次疫苗免疫臨床試驗(yàn)豬2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月后，80%以上的試驗(yàn)豬表現(xiàn)正常，未見食欲不振、弓背、長(zhǎng)期咳嗽、低燒、生長(zhǎng)緩慢和皮毛粗亂等臨床癥狀，而對(duì)照組未免5個(gè)月后，臨床表現(xiàn)長(zhǎng)期咳嗽、低燒、生長(zhǎng)緩慢和皮毛粗亂的豬占到40%。豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫5個(gè)月后對(duì)所有試驗(yàn)豬進(jìn)行剖檢，結(jié)果顯示5批次免疫組的肺病變與對(duì)照組差異顯著，免疫組的肺病變減少率均在60%以上。豬支原體肺炎活疫苗(168株)臨床試驗(yàn)肺病變結(jié)果見圖5。

4 討論與結(jié)論

豬氣喘病的防治是控制豬場(chǎng)呼吸道綜合癥難題的關(guān)鍵，在今后我國養(yǎng)豬場(chǎng)仍然要把控制豬氣喘病成為重點(diǎn)防控疾病之一。目前我國很多豬場(chǎng)常用全群脈沖用藥方式控制豬氣喘病，疾病控制容易反復(fù)發(fā)生，藥物依賴性很強(qiáng)，花費(fèi)巨大，防治效果不滿意。疫苗免疫成為豬場(chǎng)防控豬支原體肺炎疾病最有效的方法，在我國疫苗免疫有豬支原體肺炎滅活疫苗和活疫苗，滅活疫苗存在價(jià)格貴、應(yīng)激大、免疫次數(shù)多和不能阻止野毒感染等諸多因素制約了滅活疫苗的推廣［6］，活疫苗由于價(jià)格低、應(yīng)激小、免疫次數(shù)少、阻止野毒感染和置換豬場(chǎng)野毒等諸多優(yōu)勢(shì)，在規(guī)?；i場(chǎng)迅速得到推廣［7-9］。

圖5 5批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)臨床免疫5月后肺病變結(jié)果

在豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫效力試驗(yàn)和免疫期試驗(yàn)中，疫苗免疫5～15日齡健康仔豬后60 d攻強(qiáng)毒，疫苗免疫保護(hù)率達(dá)到80%以上;疫苗免疫后5個(gè)月、6個(gè)月、7個(gè)月和8個(gè)月逐次攻強(qiáng)毒，免疫7個(gè)月后免疫保護(hù)率仍在60%以上，豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫期超過6個(gè)月以上。與同類制品比較免疫效力和免疫期，兩種豬支原體肺炎活疫苗的免疫保護(hù)率和免疫期相當(dāng)。5批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫臨床5～15日齡小豬5個(gè)月后，85%以上的豬都得到免疫保護(hù)。綜合以上結(jié)果分析，說明豬支原體肺炎活疫苗(168株)具有很好的免疫效力，完全可以應(yīng)用于我國豬場(chǎng)氣喘病的控制和凈化。

［1］Elieen L T.Mycoplasmal Diseases［M］//趙德明，張仲秋，沈建忠譯.豬病學(xué).第9版.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008:795-802.

［2］Maes D，Segales J，Meyns T，et al.Control of Mycoplasma hyopneumoniae infections in pigs.［J］.Veterinary Microbiology，2008，126(4):297-309.

［3］沈青春，寧宜寶，覃青松.豬肺炎支原體的研究進(jìn)展［J］.中國獸藥雜志，2003，37(6):26-30.

［4］邵國青.豬喘氣病的控制與凈化方法的建議［J］.養(yǎng)豬，2010(6):65-69.

［5］邵國青，劉茂軍，孫佩元，等.豬氣喘病實(shí)驗(yàn)豬模型的建立［J］.微生物與感染，2007，2(4):215-218.

［6］Chae C.Vaccinating pigs against Mycoplasma hyopneumoniae infection:Failure to prevent transmission［J］.Vet J，2011，188(1):7-8.

［7］ 周勇岐，趙永前.豬支原體肺炎(168株)活疫苗的作用機(jī)理與應(yīng)用［J］.中國牧業(yè)通訊，2008，(10):49-50.

［8］ 劉茂軍，苗連葉，趙永前，等.豬支原體肺炎活疫苗(168株)臨床試驗(yàn)［J］.畜牧與獸醫(yī)，2009，41(8):93-95.

［9］陳 兵.江蘇研制出豬支原體肺炎打破國外壟斷［N］.農(nóng)業(yè)日?qǐng)?bào)，2011-11-16.