徐 昆， 楊宗偉， 宋有鑫， 劉建豐， 郝佳穎

(1.承 德 醫(yī) 學(xué) 院， 河北 承德 067000 2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 河北 承德 067000)

神經(jīng)鞘瘤所致長段周圍神經(jīng)缺損在臨床上較常見，常采取腫瘤切除、自體皮神經(jīng)移植縫合法治療。但術(shù)后早期:易與周圍組織粘連以阻礙神經(jīng)近端向遠端延伸;晚期:瘢痕形成又可影響神經(jīng)功能恢復(fù)，另外移植的皮神經(jīng)區(qū)域可出現(xiàn)疼痛、麻木等失神經(jīng)癥狀，從而導(dǎo)致臨床效果較差。隨著組織工程學(xué)的迅猛發(fā)展，一些生物可降解性神經(jīng)導(dǎo)管，成為了新一代修復(fù)神經(jīng)的替代品，研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管具有良好的相容性及降解性。為此，本文進行殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)長段周圍神經(jīng)缺損的實驗研究，取得了良好的修復(fù)效果。

1 材料與方法

1.1 材料:殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管由清華大學(xué)生物系生物材料與組織工程實驗室提供。

1.2 動物分組與方法:取健康成年SD大鼠24只(雌雄各半，由清華大學(xué)動物實驗中心提供)，體重約160－180g，隨機平均分成三組(每組8只)，以殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管橋接為A組、硅膠管橋接為B組、正常對照為C組。用氯胺酮麻醉劑(100mg/kg)腹腔注射后，無菌下暴露大鼠的右側(cè)坐骨神經(jīng);取A、B兩組大鼠右股后部正中切口，自梨狀肌下緣約5mm處用銳利刀片切斷坐骨神經(jīng)并用l0/0無損傷縫線將神經(jīng)斷端扭轉(zhuǎn)180度后兩斷端4針神經(jīng)外膜縫合，4周后形成長約8mm的“坐骨神經(jīng)鞘瘤”模型。上述麻醉后，在無菌條件下沿原切口切開并切除“腫瘤”及兩斷端周緣2mm，使斷端回縮形成10mm的神經(jīng)缺損，神經(jīng)斷端分別插入各組導(dǎo)管約1.0mm，用l0/0無損傷縫線分別將上述導(dǎo)管管壁與大鼠坐骨神經(jīng)兩斷端分別4針神經(jīng)外膜縫合，正常對照組C組不進行任何處理，術(shù)后按原三組統(tǒng)一飼養(yǎng)，動物飼養(yǎng)在溫度20－25℃，濕度40%－60%的動物飼養(yǎng)室。

1.3 實驗觀察項目

1.3.1 大體觀察:術(shù)后觀察大鼠右側(cè)足(趾)的展爪反射、神經(jīng)導(dǎo)管大體變化與周圍組織粘連情況，12周時，沿原切口暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)，觀察導(dǎo)管內(nèi)神經(jīng)再生恢復(fù)情況。

1.3.2 神經(jīng)電生理檢測:術(shù)后12周，游離大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)，應(yīng)用Reporter電生理儀檢測神經(jīng)干的動作電位振幅及傳導(dǎo)速度:將記錄電極刺入腓腸肌肌腹，刺激電極依次置于導(dǎo)管近、遠端5 mm處的坐骨神經(jīng)干表面，刺激神經(jīng)(強度;11mA;脈沖寬度;0.02ms)，測量復(fù)合肌動作電位，以計算運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度及最大振幅，從而評價神經(jīng)再生恢復(fù)情況。

1.3.3 組織學(xué)觀察:術(shù)后12周，每組隨機選取5只SD大鼠制備再生神經(jīng)組織中段標本(神經(jīng)導(dǎo)管中點近、遠段各4mm)，常規(guī)鈾一鉛染色電鏡標本處理，JEM1230透射電鏡觀察:先在40倍率下測量再生神經(jīng)橫截面積，再于每根神經(jīng)斷面隨機選取6個400倍視野，測量有髓纖維平均軸突直徑、髓鞘厚度。ImagePro高清晰彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)測算有髓纖維密度，以評價神經(jīng)再生恢復(fù)情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析處理:實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理，所有計量資料均行正態(tài)性和方差齊性檢驗;實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示;各組數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，若組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，則進一步用Scheffe法進行兩兩比較，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義;組間均數(shù)比較采用Student－Newman－Keuls(SNK)法，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察:術(shù)后大鼠出現(xiàn)右足下垂、右足趾并攏、展爪反射消失、拖曳行走等右后肢癱瘓表現(xiàn)。3周時可有較遲鈍的展爪反射形成，12周時反應(yīng)靈敏，右后肢已自主活動，提示右足(趾)感覺、運動功能已恢復(fù)。肉眼觀察導(dǎo)管與周圍組織關(guān)系:術(shù)后6周A、B兩組均與周圍組織粘連，A組重于B組;8周A組與周圍組織粘連輕于B組，剪開導(dǎo)管可見再生的神經(jīng)纖維和遠端已連接，A組導(dǎo)管開始降解吸收;12周A、B兩組導(dǎo)管內(nèi)再生神經(jīng)纖維全部長入遠端，神經(jīng)連續(xù)性良好，A組神經(jīng)纖維較B組粗大。兩組相比較:B組與周圍組織粘連及結(jié)締組織增生逐漸加重，從而使縫合口狹窄、神經(jīng)再生通過障礙;而A組與周圍組織粘連逐漸減輕，以致12周時僅輕度粘連且較易剝離，導(dǎo)管已基本降解吸收完成，神經(jīng)外膜光滑且縫合口通暢無明顯狹窄，再生神經(jīng)恢復(fù)效果明顯優(yōu)于B組。

2.2 神經(jīng)電生理檢測:術(shù)后12周，均能誘發(fā)復(fù)合肌動作電位，A 組傳導(dǎo)速度為17.198±6.584m/s，最大振幅為5.796±2.09 mv;B 組傳導(dǎo)速度為 15.835±5.767m/s，最大振幅為 4.084±1.89 mv;C 組傳導(dǎo)速度為 84.723±8.121m/s，最大振幅為8.891±2.089 mv。A、B 兩組所記錄的神經(jīng)傳導(dǎo)速度及最大振幅與C組相比有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，但組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。說明導(dǎo)管組在術(shù)后12周時，均具有明顯促進坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)功能恢復(fù)的作用，但A組的檢測值明顯高于B組。

2.3 組織學(xué)觀察:術(shù)后12周，電鏡下觀察:A、B兩組遠近段再生神經(jīng)纖維呈束狀均勻分布，有髓神經(jīng)纖維軸突數(shù)量多且密集有序排列，但A組的髓鞘厚、發(fā)育較為完整，軸突數(shù)量較多，與C組相比較，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，但A、B兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05，A組的有髓神經(jīng)纖維軸數(shù)量及髓鞘的發(fā)育程 度明顯優(yōu)于B組。

表1 術(shù)后12周電生理、再生神經(jīng)形態(tài)學(xué)比較

3 討論

神經(jīng)鞘瘤所致長段周圍神經(jīng)缺損的治療，是臨床上治療的難題之一，大量實驗表明:硅膠管可明顯促進神經(jīng)再生功能恢復(fù)，但易與周圍組織粘連形成瘢痕致神經(jīng)假瘤而出現(xiàn)神經(jīng)卡壓綜合征，且需二次手術(shù)取出，處理不當易再次發(fā)生神經(jīng)損傷。隨著組織工程學(xué)的迅猛發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖可支持許旺細胞生長，抑制成纖維細胞生長、減少膠原纖維的合成，減少創(chuàng)面出血，在組織表面可形成生物屏障作用，從而減少纖維組織再生，抑制腫瘤細胞生長、瘢痕形成，因而有利于神經(jīng)的自身修復(fù)。本文通過殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管橋接神經(jīng)鞘瘤所致的長段周圍神經(jīng)缺損的實驗研究:殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管彈性較好、強度適中，易于術(shù)中操作，與神經(jīng)斷端連接處無明顯粘連、水腫等神經(jīng)假瘤現(xiàn)象。術(shù)后12周①肉眼觀察:導(dǎo)管已基本降解吸收完畢，神經(jīng)斷端連接處可見神經(jīng)干連續(xù)性已恢復(fù)，②電鏡觀察:再生神經(jīng)纖維遠、近段呈束狀均勻分布，有髓神經(jīng)纖維軸突數(shù)量較多且密集有序排列，髓鞘較厚、發(fā)育較完整，③神經(jīng)電生理:均可記錄到復(fù)合肌動作電位，神經(jīng)干平均傳導(dǎo)速度達對照組的20.3%，平均最大振幅達對照組的65.2%，表明再生神經(jīng)電生理功能得到一定的恢復(fù)，但恢復(fù)水平仍有待提高，這可能與術(shù)后觀察時間較短、有髓神經(jīng)直徑較細及神經(jīng)發(fā)育不完全成熟等有關(guān)。

［1］張皚峰，蘇增艷，楊朝陽，等.移植殼聚糖導(dǎo)管修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損［J］.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2010，26(5):507－512.

［2］李爽，劉學(xué)政.復(fù)合導(dǎo)管修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的實驗研究［J］.遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，31(4):317－320.

［3］單臣.應(yīng)用神經(jīng)導(dǎo)管治療周圍神經(jīng)損傷的研究進展［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2009，30(23):2930－2932.

［4］鄭磊，崔慧斐.殼聚糖在周圍神經(jīng)損傷修復(fù)中的應(yīng)用［J］.中國生化藥物雜志，2009，30(3):212－214.

［5］曾慶敏，吳靖平，尹望平，等.改性殼聚糖防粘連膜修復(fù)坐骨神經(jīng)損傷［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(42):8221－8224.