孫延霞，石張鎮(zhèn)，盧振霞，張文龍

（吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院1.血液腫瘤科；2.病理科，吉林 長(zhǎng)春130033）

胃癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率居惡性腫瘤之首。其發(fā)生是一個(gè)漸進(jìn)過(guò)程，發(fā)病機(jī)制目前尚未完全清楚，多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)生與細(xì)胞凋亡受阻有關(guān)。Survivin是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的新的凋亡抑制分子，在凋亡和細(xì)胞周期的基因調(diào)控中發(fā)揮重要作用［1，2］。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化方法檢測(cè)了胃癌、癌旁及正常胃粘膜組織Survivin蛋白表達(dá)，探討其在病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵襲程度、預(yù)后等臨床特征方面的意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

實(shí)驗(yàn)標(biāo)本取自我院2003年1月－2008年5月胃癌手術(shù)切除標(biāo)本54例，男35例，女19例，年齡最大90歲，最小46歲，平均52歲。術(shù)前術(shù)后均未行化療和放療。按2010年TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分期，其中Ⅰ期12例，Ⅱ期17例，Ⅲ期15例，Ⅳ10例。其中腹主動(dòng)旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者18例，陰性者36例。病理分化程度：高分化癌29例，低分化癌25例。27例癌旁組織取自距癌組織0.5厘米－1.0厘米。10例正常胃粘膜，取自正常胃粘膜。以上組織均用10%福爾馬林固定，切片HE染色，由臨床病理專(zhuān)家閱片作出病理診斷。

1.2 試劑 Survivin兔抗人多克隆抗體為Santa Cruz公司產(chǎn)品。二抗及其相應(yīng)試劑購(gòu)于邁新公司。

1.3 方法 10%福爾馬林固定標(biāo)本，石蠟包埋，切成4μm厚切片。采用鏈酶親和素－生物素－過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SP）法（SP試劑盒 邁新公司產(chǎn)品），石蠟切片用二甲苯脫蠟，梯度酒精水化后用微波檸檬酸鈉修復(fù)20min，用過(guò)氧化物酶阻斷劑（A試劑）阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，正常動(dòng)物血清（B試劑）封閉非特異性抗體，滴加1∶25Survivin多克隆抗體（Santa Cruz公司產(chǎn)品sc－10811），4℃過(guò)夜。次日滴加生物素標(biāo)記的第二抗體（C試劑）、鏈霉菌抗生素蛋白－過(guò)氧化物酶溶液（D試劑）、新鮮配制的3，3－二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、中性樹(shù)膠封固。已知陽(yáng)性胃癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定

以胞核、胞漿棕黃染色為陽(yáng)性細(xì)胞，400倍鏡下計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，≥10%為陽(yáng)性，＜10%為陰性。由有經(jīng)驗(yàn)的兩名病理科專(zhuān)家判定結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 隨訪(fǎng) 隨訪(fǎng)至2008年12月31日，隨訪(fǎng)期6－104個(gè)月，中位隨訪(fǎng)期為36個(gè)月，死亡21例，生存27例，失訪(fǎng)6例，隨訪(fǎng)率88.8%，失訪(fǎng)率11.2%。

2.2 所有陽(yáng)性片主要是胞核，部分胞漿棕黃色染色，陰性片不著色。Survivin蛋白在正常胃粘膜中無(wú)表達(dá)，在癌旁組織陽(yáng)性率為14.8%，而在胃癌組織中陽(yáng)性率達(dá)38.7%，兩者比較差異有顯著性意義（P＜0.01）（見(jiàn)表1）。在胃癌中表達(dá)的高低與其臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。但與腫瘤的惡性程度有明顯相關(guān)性（P＜0.05）（見(jiàn)表2）。

2.3 Survivin表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 Survivin高表達(dá)組與低表達(dá)組3年生存率分別為48.23%和21.45%，兩者比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。

表1 胃癌組織、癌旁及正常胃粘膜中Survivin蛋白的表達(dá)

表2 Survivin胃癌中表達(dá)與臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分級(jí)的關(guān)系

3 討論

腫瘤發(fā)生的過(guò)程與細(xì)胞增殖，分化及凋亡等密不可分。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡受抑是正常細(xì)胞演變成惡性細(xì)胞關(guān)鍵的一步［1，2］。參與細(xì)胞凋亡的基因較多，其中凋亡蛋白抑制因子（IAP）家族是一類(lèi)抑制凋亡的因子，Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制因子，屬于IAP家族成員，其基因定位于17q25，編碼蛋白質(zhì)分子量為16.5kD，它主要通過(guò)與Caspase3和Caspase7結(jié)合抑制其活性而阻斷細(xì)胞凋亡。研究表明其與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Survivin在胚胎組織及大多數(shù)人類(lèi)腫瘤組織中表達(dá)，而在正常組織中不表達(dá)，但在惡變時(shí)再次高表達(dá)［3.4］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在正常胃粘膜中檢測(cè)不到Survivin蛋白，癌和癌周組織中Survivin蛋白明顯升高，癌組織較癌周組織更高。與Kania等［5］結(jié)果一致，提示Survivin的存在代表著細(xì)胞生物學(xué)轉(zhuǎn)化的中間環(huán)節(jié)，其水平變化在正常胃粘膜向胃癌轉(zhuǎn)化中起重要作用［6］。

國(guó)外研究資料顯示，Survivin表達(dá)水平與卵巢癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、乳腺癌的預(yù)后相關(guān)。惡性腫瘤及臨界腫瘤的表達(dá)率明顯高于良性病變，并且與腫瘤細(xì)胞的增殖活性之間具有正相關(guān)性，過(guò)度表達(dá)者生存期短［7，8］。本研究結(jié)果顯示，Survivin表達(dá)與性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期均無(wú)關(guān)，而與病理分級(jí)及生存預(yù)后有關(guān)。Survivin高表達(dá)組3年生存率明顯低于低表達(dá)組。提示Survivin高表達(dá)細(xì)胞凋亡指數(shù)低，預(yù)后差。

總之，Survivin蛋白的過(guò)度表達(dá)在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，有可能成為胃癌早期診斷及判斷預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。

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