彭 華 馬 珊 董 玉 卜文超 馬素紅

長期、低強度、間歇性的陽光輻射以及眼科常用診療器械的強光源照射都可造成視網(wǎng)膜光化學損傷，這類損傷可能是年齡相關(guān)性黃斑變性等視網(wǎng)膜變性疾病的基本病理過程〔1〕。研究防治視網(wǎng)膜光損傷藥物具有重要的理論和應用價值，本文旨在通過建立視網(wǎng)膜光損傷動物模型，予復方光明膠囊干預，為防治視網(wǎng)膜光損傷及相關(guān)疾病提供實驗證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

實驗用SD大鼠30只，雌雄不限，由昆明醫(yī)學院實驗動物中心提供，平均鼠齡3個月，體重為180～220 g，實驗前檢查雙眼眼前節(jié)及眼底均未見異常。購回后，于解放軍昆明總醫(yī)院實驗動物中心馴養(yǎng)1周，隨機分為：正常對照組、模型對照組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組。每組6只動物，12只眼。實驗動物及實驗使用條件均參照國家《實驗動物管理條例》的規(guī)定執(zhí)行，對實驗動物的處置符合實驗動物倫理學要求。

1.2 主要儀器及用品

手術(shù)顯微鏡（日本高木，型號：OM-10）；視覺電生理學檢測儀（重慶艾爾曦醫(yī)療設備有限公司，ⅠVE-205A型）；戊巴比妥鈉注射液（由中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑有限公司生產(chǎn)，批號20080816）；復方托吡卡胺滴眼液（美多麗，規(guī)格10 ml，日本參天制藥生產(chǎn)，批號MP1159）；復方光明膠囊（云南省藥品監(jiān)督管理局批準云南省中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，批號：滇藥制劑〔2002〕第 468 號）。

1.3 造模及給藥

造模前先將所有SD大鼠以戊巴比妥鈉注射液行腹腔內(nèi)注射麻醉，用藥劑量為30 mg/kg體重，并予復方托吡卡胺滴眼液行雙眼散瞳處理，麻醉及散瞳生效后，將大鼠置于手術(shù)顯微鏡光源下，距角膜（150±3）mm照射，固定眼位，分別對左右眼持續(xù)照射 1 h，照度為（22 000±1 000） lx（ST-Ⅲ型光度計測定），造模實驗室室溫維持在21～24℃，造模24 h內(nèi)過量麻醉處死大鼠并摘取眼球，透射電鏡觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜外核層變薄，光感受器視桿細胞排列紊亂，膜盤疊狀結(jié)構(gòu)解離，內(nèi)節(jié)線粒體腫脹，可見空泡樣改變。外核層細胞分布不均勻等改變，成功獲得視網(wǎng)膜光損傷模型（圖1），與文獻報道中的結(jié)果相符〔2-3〕。 隨后，將所有大鼠暗適應 24 h〔4〕。

分組給藥：①正常對照組，生理鹽水2 ml/100 g灌胃，每日1次；②模型對照組，生理鹽水2 ml/100 g灌胃，每日1次；③各治療組予復方光明膠囊混濁液灌胃，低劑量治療組（2ml/100g，1mg/ml）、中劑量治療組（2 ml/100 g，2 mg/ml）、高劑量治療組（2 ml/100 g，3 mg/ml）均為每日1次。給藥量按照實驗動物與人用藥量的換算公式[人劑量（mg/kg）×0.018]計算得。造模后連續(xù)灌胃給藥2周，實驗結(jié)束。

1.4 閃光視網(wǎng)膜電圖（flash electroretinogram，F(xiàn)-ERG）檢測方法

以復方托品酰胺充分散大瞳孔，30 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射全麻。充分散瞳并施行全麻后，暗適應30 min，各組大鼠被固定在自制實驗板上，將記錄電極，參考電極和接地電極，接在電極線上，分別插入角膜實質(zhì)層與額前皮膚和身后皮膚中，以APS-2000型視覺電生理檢測儀檢測，分別記錄各時期ERG a、b波波幅。以上過程全部在暗室紅燈光下進行。刺激及記錄條件：采用全視野刺激球白色閃光刺激，閃光強度 1.6 cd·s·m-2，單次刺激，間隔 5 s，共刺激8次，單通道記錄，通頻帶為0.1～500 Hz，每次采樣時間250 ms，每個測定眼至少測量3次，每次間隔時間20 s。對F-ERG的a波和b波振幅進行統(tǒng)計分析。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，多組間兩兩比較用One-Way ANOAY方差分析（LSD法）。

2 結(jié)果

正常對照組的視網(wǎng)膜電圖a、b波振幅均較模型對照組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；復方光明膠囊高、中、低劑量組a、b波振幅值均較模型組有不同程度增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。高劑量組a、b波振幅值較低、中劑量組振幅值高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 各組大鼠 F-ERG a、b 波振幅值的比較（±s，μV）

表1 各組大鼠 F-ERG a、b 波振幅值的比較（±s，μV）

注：與正常對照組比較，①P＜0.05；與模型對照組比較，②P＜0.05；與低劑量組比較，③P＜0.05，④P＞0.05；⑤與中劑量組比較，P＞0.05。

組別 眼數(shù)/只 a波振幅 b波振幅正常對照組 12 146.38±31.17 435.86±77.34視網(wǎng)膜光損傷模型對照組 12 66.57±21.67① 259.93±65.99①復方光明膠囊低劑量治療組 12 88.27±21.87①② 320.15±56.98①②復方光明膠囊中劑量治療組12 108.51±20.33①②③ 361.22±62.35①②④復方光明膠囊高劑量治療組12 116.47±23.18①②③⑤ 377.98±66.68①②③⑤F 18.878 11.826 P 0.000 0.000

3 討論

光是人們感受外界物體、產(chǎn)生視覺信息的必要來源，但過強的光照射會導致視網(wǎng)膜等組織的損傷。不同波長的光對視網(wǎng)膜組織的損傷機制不同，主要有熱損傷、機械損傷和光化學損傷，其中光化學損傷是最常見的類型〔5〕。本實驗采用照度為（22 000±1 000）lx的致傷光源水平位照射，光照前給予開瞼及散瞳，旨在模擬較強可見光及眼科光學診療器械光源使用時的情況。采用手術(shù)顯微鏡光源作為致傷光源，是因其熱效應低，對動物全身影響小，可以較長時間持續(xù)照射，從而建立良好的動物模型。動物視網(wǎng)膜光損傷的易感性因種屬而異，鼠類為常用醫(yī)學實驗動物，其建立視網(wǎng)膜光損傷動物模型操作方便且方法成熟，最常用的實驗動物即為SD大鼠和BALB/C 小鼠〔6〕。

ERG是評價視網(wǎng)膜功能的客觀檢查方法，廣泛應用于各種視網(wǎng)膜損害疾病的臨床和科學研究中。ERG的a波反映視網(wǎng)膜光感受器細胞的電活動，b波集中反映視網(wǎng)膜雙極細胞和Müller細胞的電活動；另外，視網(wǎng)膜各層，特別是內(nèi)顆粒細胞層所有細胞（水平細胞、雙極細胞、無長突細胞等）都參與b波的形成〔7-8〕。因此ERG的b波基本上可以代表視網(wǎng)膜的功能狀態(tài)，b波振幅是視網(wǎng)膜功能的常用測量參數(shù)。

視網(wǎng)膜光損傷根據(jù)其臨床表現(xiàn)屬于祖國醫(yī)學“視瞻昏渺”等范疇，《審視瑤函》謂：“此癥謂目內(nèi)外無癥候，但自視昏渺蒙昧不清也。有神勞，有血少，有元氣弱，有元精虧。而昏渺者，若人年五十以外而昏者，雖治不復光明。其時猶月之過望，天真日衰，自然目光漸衰，不知一無還返之道，雖妙藥難回，故曰不復愈矣”。該病病因復雜，臨床觀察患者多伴有有目絡瘀滯的表現(xiàn)，因此本課題采用復方光明膠囊活血化瘀，通絡明目，探討其改善大鼠視網(wǎng)膜光損傷的作用機理。復方光明膠囊是我省眼科名老中醫(yī)蘇藩主任在中醫(yī)理論的指導下，根據(jù)多年臨床經(jīng)驗總結(jié)而成的院內(nèi)制劑，藥物組成以血竭為君藥，水蛭、土鱉蟲、川芎為臣，地龍為佐，冰片為使，具有活血化瘀，軟堅散結(jié)，通絡明目等作用，臨床應用近20年，深受廣大患者的歡迎。對于視網(wǎng)膜靜脈阻塞、老年性黃斑變性等視網(wǎng)膜疾病具有較為肯定的治療效果〔9〕。

本實驗中，模型組大鼠視網(wǎng)膜電鏡結(jié)構(gòu)異常，正常對照組與模型對照組ERG a、b波振幅比較差異明顯（P＜0.05），說明視網(wǎng)膜光損傷動物模型建立成功。給藥后，復方光明膠囊高、中、低劑量組ERG a、b波振幅值均較模型組有不同程度增加（P＜0.05），其中高劑量組a、b波的振幅提高最明顯，與低、中劑量組比較有統(tǒng)計學意義的差異（P＜0.05）。說明復方光明膠囊對實驗大鼠視網(wǎng)膜光損傷后閃光視網(wǎng)膜電圖中a、b波振幅的降低有保護作用，但其藥物劑量的相關(guān)性及其作用機理尚需進一步研究。

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