胡倩，李建華，閆國立（.武警河南總隊醫(yī)院，鄭州450052；2.河南中醫(yī)學(xué)院，鄭州450008）

升麻葛根顆粒是根據(jù)傳統(tǒng)古方升麻葛根湯研制而成。升麻葛根湯具有辛涼、解肌、透疹、解毒功能，主要用于治療麻疹初起未發(fā)或發(fā)而不透證[1]?，F(xiàn)代臨床研究表明，該方在治療帶狀皰疹后遺癥——神經(jīng)痛方面有滿意效果[2，3]。為方便臨床用藥和控制質(zhì)量，筆者將升麻葛根湯改劑型為顆粒劑。根據(jù)對組方成分的分析，筆者采用正交試驗優(yōu)選升麻葛根顆粒的最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP高效液相色譜（HPLC）儀，包括SPD-10AVP紫外-可見檢測器（日本島津公司）；N2000數(shù)據(jù)工作站（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）。

葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：753-200007）；升麻、葛根、芍藥、甘草藥材均購自河南省順康醫(yī)藥有限公司，經(jīng)河南省藥品檢驗所鑒定符合2010年版《中國藥典》（一部）有關(guān)規(guī)定[4]。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素水平的選擇

根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，并結(jié)合組成藥物的化學(xué)成分及其性質(zhì)，確定以水為溶媒，采用正交試驗法對升麻、葛根等藥材水煎液提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。以溶媒的用量（A）、提取次數(shù)（B）和提取時間（C）為考察因素，每個因素選取3個水平，以葛根素含量和出膏率為評價指標(biāo)。因素水平見表1。

表1 因素水平Tab 1 Factor and level

2.2 葛根素含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱：ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：20 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；流速：1.0 mL·min－1；填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：甲醇-水（25∶75）；檢測波長：250 nm。理論板數(shù)按葛根素色譜峰計算應(yīng)不低于4000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的葛根素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.08 mg的溶液，即得。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取葛根素對照品溶液1、2、5、7、10 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以葛根素檢測濃度（X，μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝69693X+170316（r＝0.9999，n＝5）。結(jié)果表明，葛根素檢測濃度在16～160 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.4 樣品的制備 取升麻8.33 g、葛根8.33 g、芍藥5.00 g、甘草2.50 g，共9份，根據(jù)L9（34）正交試驗設(shè)計表，將不同條件下的水提液分別濃縮至50 mL，水浴蒸干，置于70℃恒溫的干燥箱中干燥，即得。

2.2.5 供試品溶液的制備 稱取樣品0.25 g，置于50 mL容量瓶中，加甲醇-水（25∶75）溶解并稀釋至刻度，超聲（功率：200 W，頻率：25 kHz）處理15 min后依次用濾紙和微孔過濾器濾過，即得。

2.2.6 葛根素含量測定 精密吸取對照品溶液、供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定，以外標(biāo)二點法[5]計算葛根素的含量。

2.3 出膏率的測定

精密移取正交試驗下提取濃縮液50 mL，平行移取3份，分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置于70℃恒溫的干燥箱中干燥，迅速精密稱定浸膏重量，按下式計算出膏率：出膏率（%）＝浸膏重（g）×濃縮液總量（mL）/取樣量（mL）/生藥總量（g）×100%。

2.4 正交試驗方案與結(jié)果

根據(jù)各因素水平，選擇L9（34）正交試驗表進(jìn)行試驗，按“2.2”項下方法測定每次提取后葛根素含量，并計算出膏率。正交試驗結(jié)果見表2；方差分析結(jié)果見表3。

表2 正交試驗結(jié)果Tab 2 Results of orthogonal test

由表2、表3可知，各因素對提取工藝的影響順序為提取時間＞提取次數(shù)＞加水量。其中，提取時間和提取次數(shù)對葛根素含量和出膏率有顯著影響（P＜0.05或P＜0.01），最佳水提工藝為A2B1C3，即加入10倍量的水，提取2次，每次2 h。而在正交設(shè)計中，未出現(xiàn)此條件下的試驗，故按此工藝條件進(jìn)行補充試驗。結(jié)果，出膏率為33.46%，葛根素含量為257.9859 mg·g－1，均高于正交試驗中的最高值，表明所選工藝可行。

2.5 工藝驗證試驗

按優(yōu)選的最佳工藝提取3批樣品，測定葛根素含量和出膏率。結(jié)果，3批樣品中葛根素含量分別為255.8275、259.9758、263.6873 mg·g－1，出膏率分別為33.18%、33.89%、34.53%，均高于正交試驗結(jié)果，表明此工藝穩(wěn)定、可行。

3 討論

升麻葛根顆粒的處方組成及比例與升麻葛根湯相同。本方中葛根為主藥，葛根中主要含葛根素，故用HPLC法測定葛根素含量為評價指標(biāo)，結(jié)合出膏率，可評價工藝的合理性。研究發(fā)現(xiàn)，按照文獻(xiàn)報道方法[6，7]，采用不同比例（30∶70或24∶76）的甲醇-水為流動相，提取結(jié)果不甚理想。而采用傳統(tǒng)比例的甲醇-水（25∶75）為流動相時，提取物中各成分被有效地分離，且提取物中其他組分對葛根素含量測定無干擾。

[1]陳翠英.升麻葛根湯的臨床應(yīng)用體會[J].肇慶醫(yī)藥，1999，2：32.

[2]張團(tuán)昌.升麻葛根湯臨床應(yīng)用舉隅[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，4（4）：36.

[3]董德翠，王璐瑜.升麻葛根湯加味治療帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛26例療效觀察[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2009，18（5）：103.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：282.

[5]繆 紅，王一鳴.正交試驗優(yōu)選養(yǎng)心方煎劑煎煮工藝[J].中國藥房，2010，21（19）：1757.

[6]陳禮明，劉 圣，唐麗琴，等.正交試驗優(yōu)選黃連散中葛根等成分的提取工藝[J].中國藥房，2006，17（6）：415.

[7]傅應(yīng)華，姜寧華.眼絡(luò)通顆粒的提取工藝研究[J].中國藥房，2006，17（16）：1212.