黃仕文，戴啟剛

（南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210029）

《金匱要略》中主治陽氣不足、陰寒痼結(jié)心下之胸痹之方烏頭赤石脂丸由蜀椒、制川烏、制附子、干姜、赤石脂組成。前期實(shí)驗(yàn)研究使用異丙腎上腺素復(fù)制類似于冠心病、心絞痛等心肌損傷模型，結(jié)果表明烏頭赤石脂丸能減輕大鼠心肌損傷，保護(hù)缺血心?。?］。本實(shí)驗(yàn)擬以冰水游泳加注射垂體后葉素復(fù)制大鼠陽虛寒凝胸痹模型，檢測胸痹大鼠血液黏度、血栓素 B2（TXB2）、6-酮-前列腺素 F1α（6-keto-PGF1α）、內(nèi)皮素（ET）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）活性，探討烏頭赤石脂丸保護(hù)寒凝胸痹大鼠損傷心肌的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠72只，（200±20）g，雌雄各半，由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（滬）2007-0005。

1.1.2 藥品和試劑 烏頭赤石脂丸中蜀椒、制川烏、附子、干姜、赤石脂按 2∶1∶1∶1∶2 取一定量，煎煮時(shí)先將制川烏、附子放入10倍總藥量水中浸泡30 min后先煎1 h，再放入其他藥煎煮30 min，過濾，藥渣加8倍量水煎煮30 min，過濾，合并濾液，水浴濃縮至每毫升含生藥1.0 g，4℃冰箱保存，備用；垂體后葉素，上海禾豐制藥有限公司；NO、SOD、MDA試劑盒，南京建成生物技術(shù)有限公司；TXB2、ET、6-keto-PGF1α放免試劑盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司，由南京市第一人民醫(yī)院白下區(qū)鑫園分院放免實(shí)驗(yàn)室檢測。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 酶標(biāo)儀，賽默飛世爾科技；自動(dòng)放免儀，中國科大中佳公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與給藥 72只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組，ADH模型組，烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組（給藥量分別相當(dāng)于人體等效劑量的1/3量即0.63 g/kg、等效量即1.89 g/kg、3倍量即5.67 g/kg），復(fù)方丹參滴丸組（給藥量相當(dāng)于人體等效劑量72.9 mg/kg）6組，每組12只?？瞻讓?duì)照組、模型組大鼠灌胃生理鹽水，其余各組灌胃相應(yīng)藥物，每日1次，連續(xù)2 w。

1.2.2 模型制備 參考文獻(xiàn)［2］并結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果建立如下模型：除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠每日灌胃30 min后，于0℃～4℃冰水中游泳3 min～5 min。于末次游泳結(jié)束后，除空白對(duì)照組外，其余各組腹腔注射垂體后葉素20 U/kg。

1.2.3 標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測 于注射垂體后葉素24 h后，所有大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，頸總動(dòng)脈采血（所采血分三份，二份抗凝、一份不抗凝），不抗凝血常規(guī)分離血清，抗凝血一份分離血漿，一份留測全血黏滯度；按試劑盒說明書方法檢測血清NO（硝酸還原酶法）、SOD（黃嘌呤氧化酶法）、MDA（TBA 法），放免法檢測 TXB2、6-keto-PGF1α、ET活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 樣本脫落

本實(shí)驗(yàn)在造模過程中除空白對(duì)照組外，其他每組均有死亡，其死亡數(shù)（即樣本脫落數(shù)）及死亡率（即脫落率）見表1。

表1 各組大鼠樣本脫落數(shù)及脫落率

由表1可以看出，各組樣本脫落數(shù)與脫落率存在差異，從而說明相應(yīng)的藥物干預(yù)能夠提高大鼠對(duì)寒冷刺激和ADH所致缺血損傷的耐受力。

2.2 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠全血及血漿黏度的影響結(jié)果見表2。

表2 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠全血及血漿黏度的影響 （mPa·s，s）

表2 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠全血及血漿黏度的影響 （mPa·s，s）

注：與空白對(duì)照組相比，1）P＜0.01，2）P＜0.05；與模型組相比，3）P＜0.01，4）P＜0.05

組別 n 全血黏度 血漿黏度1 s 5 s 30 s 200 s空白對(duì)照組 12 20.13±1.77 9.67±0.86 6.01±0.63 4.94±0.32 1.17±0.06模型組 7 28.63±4.271） 13.01±1.541） 7.73±0.711） 5.90±0.461） 1.22±0.032）低劑量組 10 23.37±1.263） 11.21±1.013） 6.78±0.493） 5.24±0.333） 1.17±0.044）中劑量組 9 20.02±2.673） 11.03±0.543） 6.74±0.303） 5.24±0.223） 1.13±0.053）高劑量組 8 16.78±3.963） 8.41±1.513） 5.42±0.743） 4.36±0.503） 1.12±0.023）復(fù)方丹參滴丸組 9 25.01±2.324） 11.62±1.004） 7.01±0.574） 5.40±0.434） 1.17±0.034）

由表2可見，與空白對(duì)照組相比，模型組不同切變率的全血及血漿黏度升高（P＜0.01，P＜0.05）；與模型組相比，各治療組不同切變率的全血及血漿黏度均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05）。

2.3 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α 水平的影響

結(jié)果如表3。由表3可見，與空白對(duì)照組相比，模型組TXB2含量升高（P＜0.05），6-keto-PGF1α含量下降（P＜0.01）。與模型組相比，高、中劑量組TXB2含量顯著降低（P＜0.01），高、低劑量組 6-keto-PGF1α含量升高（P＜0.01）。

表3 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α水平的影響 （s）

表3 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α水平的影響 （s）

注：與空白對(duì)照組相比，1）P＜0.01；與模型組相比，2）P＜0.01

?

2.4 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影響

結(jié)果見表4。

表4 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影響 （s）

表4 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影響 （s）

注：與空白對(duì)照組相比，1）P＜0.01；與模型組相比，2）P＜0.01，3）P＜0.05

?

由表4可以看出，與空白對(duì)照組相比，模型組ET值升高、NO值下降（P＜0.01）；與模型組相比，烏頭赤石脂丸各劑量組、復(fù)方丹參滴丸組 ET含量顯著降低（P＜0.01，P＜0.05），中、高劑量組 NO 含量升高（P＜0.01，P＜0.05）。

2.5 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影響

結(jié)果見表5。

表5 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影響 （s）

表5 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影響 （s）

注：與空白對(duì)照組相比，1）P＜0.01；與模型組相比，2）P＜0.05

?

由表5可見，模型組較空白對(duì)照組SOD含量降低（P＜0.01），與模型組相比，高劑量組 SOD 含量升高（P＜0.05）；MDA值各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尤其是正常組與模型組差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因值得進(jìn)一步深究。

3 討論

心肌缺血性損傷的發(fā)病機(jī)制主要有：氧自由基的作用、鈣超載、微血管病變和細(xì)胞損傷等［3］。機(jī)體通過神經(jīng)、體液、免疫等一系列因素進(jìn)行調(diào)節(jié)，促進(jìn)或改善心肌損傷狀況。TXA2與PGI2是生物活性完全相反的血管活性物質(zhì)，TXA2具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)血小板聚集和血管收縮作用，而PGI2是內(nèi)皮細(xì)胞合成并分泌的血管舒張因子，其主要作用抑制血小板的黏附與聚集，拮抗TXA2，使血管擴(kuò)張。TXA2和PGI2的性質(zhì)極不穩(wěn)定，不易檢測，而其相應(yīng)的代謝產(chǎn)物血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）則較穩(wěn)定，因此測定TXB2和6-keto-PGF1α的濃度，可反映TXA2和PGI2的含量。當(dāng)血流動(dòng)力學(xué)改變，可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌內(nèi)皮素（ET）或一氧化氮（NO），ET是作用較強(qiáng)的血管收縮劑之一，而NO則具有較強(qiáng)的舒血管作用，兩者改變可調(diào)節(jié)損傷心肌血供。心肌缺血后活化的中性粒細(xì)胞大量聚集在缺血區(qū)，加速了自由基的生成，導(dǎo)致氧自由基堆積，而活性氧自由基和細(xì)胞膜脂質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，生成大量 MDA，并使抗氧化酶SOD含量降低，導(dǎo)致氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，清除自由基的能力降低，從而引起心血管組織嚴(yán)重?fù)p傷，因而SOD、MDA活性可反映機(jī)體抗氧自由基的能力。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，烏頭赤石脂丸各劑量組均能降低寒凝胸痹大鼠的全血或血漿黏度，改善寒凝胸痹大鼠的血液流變學(xué)，而對(duì)血清中活性因子的水平改變則存在差異。烏頭赤石脂丸能增加TXB2的合成分泌、降低6-keto-PGF1α的合成分泌。烏頭赤石脂丸能降低ET的合成分泌，提高NO、SOD的水平，對(duì)MDA水平無顯著影響。

烏頭赤石脂丸對(duì)冰水游泳加注射垂體后葉素所致的寒凝胸痹大鼠損傷心肌的保護(hù)作用可能主要是通過抑制血小板的黏附、聚集，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞合成擴(kuò)血管NO、抑制縮血管ET產(chǎn)生，從而降低血液黏滯度，改善血流動(dòng)力學(xué)來實(shí)現(xiàn)的。

［1］戴啟剛，汪受傳，王忠山，等.烏頭赤石脂丸對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護(hù)作用［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34（11）：755-758.

［2］閆娟娟，高文遠(yuǎn).黃芪桂枝五物湯對(duì)胸痹陽虛寒凝證大鼠的心電圖和血清酶的影響［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2009，43（1）：75-77.

［3］金惠銘，王建枝.病理生理學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：141-155.