邢應(yīng)如 孟阿娜 阮建華

安徽省淮南市東方醫(yī)院集團(tuán)腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽淮南 232035

570例肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的分析研究

邢應(yīng)如 孟阿娜 阮建華

安徽省淮南市東方醫(yī)院集團(tuán)腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽淮南 232035

目的 探討不同年齡段肺癌患者T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞變化及臨床意義。方法 回顧分析570例肺癌患者淋巴細(xì)胞亞群的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 肺癌在51～80年齡段內(nèi)發(fā)病率占78.6%；肺癌患者CD4+T細(xì)胞相對(duì)減低、CD8+T細(xì)胞相對(duì)增高、CD4+/CD8+比值明顯降低，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨著肺癌患者年齡降低，NK細(xì)胞有明顯降低趨勢(shì)（P＜0.01），CD3+T細(xì)胞有明顯增加趨勢(shì)（P＜0.01）。結(jié)論 肺癌患者CD4+T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞活性受到抑制，CD4+/CD8+比值顯著降低，細(xì)胞免疫功能下降，年齡越年輕其細(xì)胞免疫功能越紊亂；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T淋巴亞群對(duì)評(píng)價(jià)療效、判斷預(yù)后具有重要價(jià)值。

肺癌；T淋巴細(xì)胞；NK細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)

肺癌是全世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤。肺癌的5年生存率只有10%～20%[1]，預(yù)后極差。近50年來(lái)，我國(guó)肺癌發(fā)病率明顯增高，在大中城市肺癌已居男性腫瘤之首。T淋巴細(xì)胞在抗腫瘤中具有極其重要的作用；T細(xì)胞應(yīng)答是控制腫瘤生長(zhǎng)發(fā)育的最重要的宿主應(yīng)答；參與抗腫瘤免疫的兩類T細(xì)胞亞群為CD4+輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞、CD8+抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞及亞群可作為臨床判斷患者狀態(tài)的一個(gè)敏感指標(biāo)，對(duì)臨床治療具有重要意義。NK細(xì)胞在抗腫瘤的天然免疫和特異性免疫中發(fā)揮效應(yīng)作用，能夠直接殺傷各種腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞，是機(jī)體抗腫瘤的第一道防線。本文旨在探討肺癌患者淋巴亞群變化和不同年齡組細(xì)胞免疫狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

570例肺癌患者均為2009年1月～2012年10月淮南東方醫(yī)院集團(tuán)腫瘤醫(yī)院初次住院的臨床確診患者，其中，男性 481例，女性 89例，男女比例為 5.4∶1；最大年齡92歲，最小27歲，中位年齡66歲。正常對(duì)照組20例，其中，男性13例，女性7例，年齡35～57歲，均為體檢未發(fā)現(xiàn)腫瘤及免疫性疾患的人員。

1.2 樣本采集

肝素真空采血管采集靜脈血2 mL，室溫放置，樣本24 h內(nèi)做染色處理。

1.3 試劑儀器

使用BD MultitestTM IMK kit四色熒光抗體試劑盒（Cat No:340503），CaliBRITETM 3 COLOR KIT（Cat No:340 486）和 CaliBRITETM APC（Cat No:340487）定標(biāo)熒光微球，F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司），調(diào)用四色免洗條件MultiSET軟件自動(dòng)分析淋巴細(xì)胞亞群；報(bào)告NK細(xì)胞（CD16+56+）、T 淋巴細(xì)胞（CD3+）、輔助/誘導(dǎo) T 細(xì)胞（CD3+CD4+CD8-）和抑制/細(xì)胞毒 T 細(xì)胞（CD3+CD4-CD8+）占淋巴細(xì)胞的百分比和CD4+/CD8+細(xì)胞比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

表1 肺癌患者和對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果（±s）

表1 肺癌患者和對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與71～80歲組比較，bP＜0.05

年齡（歲）例數(shù)（n）百分比（%）NK（%）CD3+（%）CD4+（%）CD8+（%）CD4+/CD8+≤40（1）41～50（2）51～60（3）61～70（4）71～80（5）≥81（6）總計(jì)對(duì)照組（7）20 59 146 136 164 45 570 20 3.5 10.4 25.6 23.9 28.8 7.9 100.0-16.15±6.08b 15.56±8.93b 16.97±8.93b 17.22±10.13b 20.48±9.75 18.98±11.64 18.02±9.74 18.25±6.11 71.55±8.68b 70.81±11.37b 69.01±10.9b 68.01±12.05 66.31±11.73 68.51±13.32 68.23±11.67 68.80±5.23 35.8±7.74a 38.86±9.45a 37.29±10.43a 36.36±11.01a 36.02±11.29a 35.53±9.24a 36.68±10.56a 44.60±3.72 33.25±9.29a 29.81±8.88a 29.64±10.81a 30.12±11.87a 29.20±10.80a 31.62±13.31a 29.93±11.05a 23.70±3.80 1.20±0.50a 1.45±0.66a 1.49±0.73a 1.48±0.93a 1.51±1.22 1.53±1.45 1.48±0.99a 1.94±0.39

2 結(jié)果

2.1 肺癌不同年齡組構(gòu)成比

本組結(jié)果在51～80歲年齡段內(nèi)發(fā)病人數(shù)占肺癌總?cè)藬?shù)的78.3%，是肺癌高發(fā)年齡段。肺癌在71～80歲組發(fā)病率最高（28.8%），可能是人的衰老，免疫系統(tǒng)功能衰弱，特別是細(xì)胞免疫功能下降，導(dǎo)致腫瘤發(fā)病率增加。由于80歲以上人群數(shù)量明顯減少，其發(fā)病率明顯減低并不能說(shuō)明其發(fā)生肺癌的概率會(huì)降低。各組比例如圖1。

2.2 肺癌患者不同年齡組與對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果

肺癌患者CD4+T細(xì)胞相對(duì)減低、CD8+T細(xì)胞相對(duì)增高、CD4+/CD8+比值明顯降低，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；NK和CD3+T細(xì)胞與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺癌患者不同年齡組與對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 肺癌患者淋巴亞群結(jié)果的年齡趨勢(shì)分析

以年齡組（1）～（5）組為自變量，以淋巴亞群結(jié)果為因變量作線性回歸分析，SPSS 17.0軟件統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 肺癌患者淋巴亞群結(jié)果的年齡趨勢(shì)分析

隨著肺癌患者年齡降低NK細(xì)胞有明顯降低趨勢(shì)（P＜0.01），CD3+T 細(xì)胞有明顯增加趨勢(shì)（P ＜0.01），如圖2。

3 討論

CD4+T細(xì)胞可直接殺傷腫瘤細(xì)胞，可識(shí)別腫瘤細(xì)胞分泌的可溶性抗原，參與B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和細(xì)胞毒T細(xì)胞的激活，進(jìn)而發(fā)揮抗瘤作用；CD4+T細(xì)胞的減少可以解釋腫瘤的免疫逃避機(jī)制。腫瘤細(xì)胞具有分泌多種免疫抑制因子功能，可抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞[2]，使T細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量減少，T細(xì)胞和NK細(xì)胞減少可削弱機(jī)體的免疫監(jiān)視作用。本組結(jié)果顯示T細(xì)胞和NK細(xì)胞明顯降低，說(shuō)明腫瘤患者存在免疫逃避；隨著年齡的增大CD4+T細(xì)胞降低明顯，免疫功能隨年齡增加而不斷下降[3]，腫瘤的免疫逃避增加。

NK細(xì)胞具有抗腫瘤，抗病毒感染，抗器官移植，參與T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)及其免疫調(diào)節(jié)的功能。NK細(xì)胞通過(guò)受體作用維持平衡、發(fā)揮殺傷效應(yīng)[6-7]。Cooper MA等[8]研究證明人外周血NK細(xì)胞可分為二群，80%～90%的NK細(xì)胞低表達(dá)CD56高水平表達(dá)CD16（CD56dimCD16brigh），此類細(xì)胞可有效地發(fā)揮細(xì)胞毒作用；10%～20%的NK細(xì)胞表型為CD56brighCD16dim或CD56brighCD16-，其功能主要是分泌細(xì)胞因子，參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)。陳文寬等[9]研究78例喉咽鱗癌患者發(fā)現(xiàn)癌癥組較非腫瘤對(duì)照組NK細(xì)胞活性低；局部晚期患者及有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的NK細(xì)胞活性同樣降低?？蹬嗔嫉萚10]報(bào)道胰腺癌根治手術(shù)治療后可明顯提高T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的免疫功能。本研究肺癌患者NK細(xì)胞降低與文獻(xiàn)一致[9-11]，患者越年輕NK細(xì)胞免疫活性越低。

在21～40歲組NK細(xì)胞明顯降低，CD3+細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞明顯增高，CD4+/CD8+比值顯著降低（P ＜0.01），在71～80 歲組NK細(xì)胞比前四組明顯增高（P＜0.01）、稍高于對(duì)照組，說(shuō)明年輕患者細(xì)胞免疫功能活躍，老年患者機(jī)體代謝慢、腫瘤生長(zhǎng)也相對(duì)緩慢，老年機(jī)體本身免疫低下，細(xì)胞免疫反應(yīng)降低。不同年齡的肺癌患者細(xì)胞免疫功能不同，其治療策略、方法也應(yīng)不同。肺癌患者越年輕細(xì)胞免疫功能紊亂越明顯，提示年輕患者的治療更要注重細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)和平衡。而老年患者機(jī)體本身免疫功能低下，細(xì)胞免疫對(duì)腫瘤的抑制能力有限，應(yīng)注意機(jī)體的整體性治療，防止并發(fā)癥。

總之，肺癌患者的CD4+T細(xì)胞降低、CD8+T細(xì)胞升高、CD4+/CD8+比值顯著降低，NK細(xì)胞降低，說(shuō)明患者免疫功能處于抑制狀態(tài)，T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞活性檢測(cè)可作為肺癌免疫功能及預(yù)后的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。肺癌年輕患者細(xì)胞免疫功能紊亂明顯，提示年輕患者的治療更要注重細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)和平衡。

[1]Coleman RE.Clinical features of metastatic bone disease and risk of skeletal morbidity[J].Clin Cancer Res，2006，12（20 Pt 2）：6243-6249.

[2]王貴強(qiáng).腫瘤免疫耐受機(jī)制的研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2008，24（18）：3263-3265.

[3]鄒春英，呂培中，王曉蓮，等.老年人外周血T細(xì)胞亞群CD28表達(dá)水平的改變[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué)，2006，20（5）：328-330.

[4]Tsukishiro T，Donnenbrerg AD，Whiteside TL.Rapid turnover of the CD8（+）CD28（-）T-cell subset of effector cells in the circulation of patients with head and neck cancer[J].Cancer Immunol Innunother，2003，52（10）：599-607.

[5]DU YC，LIN P，ZHANG J，et al.Fusion of CpG-ODN-stimulating dendritic cells with Lewis lung cancer cells can enhance anti-tumor immune responses[J].Tissue Antigens，2006，67（5）：368-376.

[6]Raulet DH，Vance RE.Self-tolerance of natural killer cells[J].Nat Rev Immunol，2006，6（7）：520-531.

[7]Diefenbach A，Raulet DH.Innate immune recognition by stimulatory immunoreceptors[J].Curr Opin Immunol，2003，15（1）：37-44.

[8]Cooper MA，F(xiàn)ehniger TA，Caligiuri MA.The biology of human natural killer cell subsets[J].Trends Immunol，2001，22（11）：633-640.

[9]陳文寬，宋明，陳福進(jìn)，等.喉咽鱗癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和 NK 細(xì)胞活性分析[J].癌癥，2006，25（10）：1300-1302.

[10]康培良，黃文，王繼德.胰腺癌患者圍手術(shù)期T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞活性的動(dòng)態(tài)觀察[J].中國(guó)腫瘤臨床與康復(fù)，2005，12（2）：103-105.

[11]鄒靜，劉斌，陳雪華，等.肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化特點(diǎn)及臨床意義[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2010，26（11）：1016-1020.

Analysis on T cell subset and NK cell of peripheral blood of 570 cases of lung cancer patients

XING Yingru MENG A'naRUAN Jianhua
Clinical Laboratory,Huainan Cancer Hospital of East Hospital Group,Anhui Province,Huainan 232035,China

ObjectiveTo explore the different age patients with T lymphocyte subsets and NK cell changes and its clinical significance.MethodsA retrospective analysis of 570 cases of patients with lung cancer detection results of lymphocyte subsets by flow cytometry.ResultsThe incidence rate of lung cancer was 78.6%in 51 to 80 age group;CD4+T cells were relatively lower,CD8+T cells were relatively increased,CD4+/CD8+ratio was significantly lower in lung cancer patients,compared with the normal control group,there were obvious meaningful differences(P<0.05);With lowering the age of patients with lung cancer,NK cells tended to decrease significantly(P<0.01),CD3+T cells tended to increase significantly(P<0.01).ConclusionCD4+T cells subsets and NK activity are inhibited,CD4+/CD8+ratio is significantly lower,and cell immune function is decreased in the patients with lung cancer,the younger the age,the more disordered cellular immune function;Detection of peripheral blood T-cell subsets by flow cytometry has important value to evaluate the therapeutic effect and prognosis.

Lung cancer;T lymphocyte;Natural killer cell;Flow cytometry

R734

A

1674-4721（2013）04（b）-0093-03

2013-01-29 本文編輯：郭靜娟）