胡曉華趙莉娜

1.河南省中醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450008；2.河南中醫(yī)學(xué)院2011級研究生，河南 鄭州 450008

補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯對PCOS大鼠血清激素水平影響的實(shí)驗(yàn)研究

胡曉華1趙莉娜2

1.河南省中醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450008；2.河南中醫(yī)學(xué)院2011級研究生，河南 鄭州 450008

觀察補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯對多囊卵巢綜合癥（PCOS）大鼠卵巢分泌激素LH、FSH、T值的影響。總結(jié)其臨床療效，探索其作用機(jī)理，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法：規(guī)律發(fā)情周期SD雌性大鼠50只，應(yīng)用人絨毛膜促性腺激素 （HCG）聯(lián)合胰島素 （INS）造模法制作為動物模型，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、二甲雙胍組、補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯低劑量組、補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯高劑量組。運(yùn)用放射免疫法測定血清性激素水平的變化。結(jié)果：補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯高劑量組通過調(diào)整內(nèi)分泌，降低血清T、LH水平，以及降低LH/FSH比值，此可能是臨床治療多囊卵巢綜合癥高雄激素血癥和高LH方法之一。

多囊卵巢綜合征；PCOS大鼠模型；高雄激素血癥；補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯

多囊卵巢綜合癥（polycystic ovary syndrome，PCOS）是育齡婦女常見的一種發(fā)病多因性，臨床表現(xiàn)呈多態(tài)的異質(zhì)性內(nèi)分泌紊亂疾病，以高雄激素血癥及長期無排卵為特征。發(fā)病率在育齡婦女中占6%～10%［1］，集合了一組多樣的、多系統(tǒng)的慢性內(nèi)分泌紊亂，如月經(jīng)不規(guī)律、多毛、肥胖、高雄激素化的各種表現(xiàn)，由于其生化特征、臨床表現(xiàn)及發(fā)病機(jī)理的異質(zhì)性成為內(nèi)分泌領(lǐng)域最復(fù)雜的研究特點(diǎn)。中醫(yī)學(xué)中無 “多囊卵巢綜合癥”病名，根據(jù)臨床表現(xiàn)當(dāng)屬于祖國醫(yī)學(xué)中 “閉經(jīng)”、 “不孕”、“月經(jīng)后期”等范疇?，F(xiàn)在中醫(yī)治療多囊卵巢綜合征多采用辨病與辨證相結(jié)合，本實(shí)驗(yàn)所采用方藥以補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)為主，采用Poresky法進(jìn)行造模［2］，分別以中藥、西藥 （二甲雙胍）、中藥補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯高低劑量組治療，研究其對血清性激素T、FSH、LH的影響，進(jìn)而評價(jià)補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯對PCOS模型大鼠內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響，為補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級雌性SD大鼠50只，體重約（180～200）g，由河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。飼養(yǎng)于河南省中醫(yī)研究院實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)前置于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，室溫18℃～22℃。

1.2 試劑與藥品

1.2.1 試劑T、FSH、LH放射免疫分析藥盒購自深圳拉爾文生物工程技術(shù)有限公司。

1.2.2 藥品 中藥復(fù)方湯劑：紫石英、仙靈脾、熟地、山萸肉、當(dāng)歸、肉蓯蓉、三棱、莪術(shù)、香附、地龍、穿山甲、丹參、甘草等組成，生藥由河南中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院門診部藥房提供，并由制劑室協(xié)助煎煮，過濾，濃縮而成（每1m l相當(dāng)于生藥1g），分裝、滅菌，4℃儲存?zhèn)溆?。人絨毛膜促性腺激素（HCG）：注射用絨促性素1000IU/瓶，麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠；二甲雙胍：0.25g/片，貴州天安藥業(yè)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 造模方法 SD大鼠，雌性，體重200～230g，進(jìn)行陰道圖片確定規(guī)律發(fā)情周期；兩周后，選擇規(guī)律發(fā)情周期大鼠50只，體重260～280g，隨機(jī)分為正常對照組（n＝10）和病理模型組（n＝40）。正常對照組第1～10天皮下注射生理鹽水0.2ml，每日一次；第11～22天皮下注射生理鹽水0.2m l，每日兩次。病理模型組第1～10天股骨內(nèi)側(cè)皮下注射中性胰島素注射液（溶于生理鹽水共0.2ml），每日一次，由0.5IU遞增至6.0IU；第11～22天持續(xù)6.0IU劑量；同時(shí)第11～22天皮下注射HCG3IU（溶于生理鹽水共0.2ml），每日兩次，實(shí)驗(yàn)周期為22天。所有動物給予自然光照及自由飲食飲水 （處理前為普通飲用水，處理期間為5%葡萄糖水），并繼續(xù)每日進(jìn)行陰道涂片以檢測發(fā)情周期。

1.3.2 給藥方法 造模完成后將上述病理模型組（n＝40）又隨機(jī)分為模型組、二甲雙胍組、補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯低劑量組、補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯高劑量組，每組10只，第23天開始分別灌胃給予相應(yīng)劑量，在給藥劑量上按人鼠體重比換算后乘以人與大鼠體重?fù)Q算系數(shù)6.25，換算后大鼠給藥量為：二甲雙胍組0.16g/（kg·d）；補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯低組藥液12.5g/（kg· d）；補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯高組藥液25g/（kg·d）；正常對照組和模型對照組給予生理鹽水10ml/（kg·d），連續(xù)灌胃14天后處死。

1.4 檢測項(xiàng)目及方法 大鼠處死后心臟取血，3000r/min離心10分鐘，收集血清樣品，－20℃保存，采用放射免疫法（RIA）測定血清中卵泡雌激素 （FSH）、黃體生成素（LH）、睪酮（T）的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)資料采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，計(jì)量資料采用±s表示，分析方差齊性后，采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各治療組對大鼠血清睪酮水平的影響

表1 各組大鼠血清睪酮水平的影響 （±s）

表1 各組大鼠血清睪酮水平的影響 （±s）

注：與模型組相比△P＜0.01，與模型組相比*P＜0.05。

組別 數(shù)量 （只） 睪酮 （ng/dl ）正常組 10 4.89±1.46△模型組 10 12.57±3.33二甲雙胍組 10 8.25±2.23*中藥低劑量組 10 7.07±2.09*中藥高劑量組 10 4.75±0.95△

經(jīng)過分析檢測大鼠血清T水平，顯示模型組大鼠血清T水平顯著增高，符合多囊卵巢綜合征的血清睪酮升高的情況，正常組大鼠血清T水平最低。通過藥物治療后，各個(gè)治療組血清T水平都有不同程度降低，以中藥高劑量組最為明顯。從表1中可以看出，正常組和模型組比較，P＜0.01，各治療組與模型組對比，均P＜0.05，但中藥低劑量組與二甲雙胍組對比，P＞0.05，差異無顯著性，中藥高劑量組與二甲雙胍組相比，P＜0.05，差異有顯著性，對比發(fā)現(xiàn)，治療組中，以高劑量組降低血清睪酮的效果最好，且優(yōu)于二甲雙胍組。

2.2 各組大鼠血清LH、FSH的影響 見表2。

表2 各組大鼠血清LH、FSH的影響（±s）

表2 各組大鼠血清LH、FSH的影響（±s）

注：與模型組相比△P＜0.01，與模型組相比*P＜0.05。

LH/FSH正常組 10 8.70±0.23△ 4.38±0.48△ 2.01±0.19組別 數(shù)量（只）LH（m Iu/m l） FSH（m Iu/m l）*模型組 10 61.44±15.03 16.33±3.71 3.75±0.20二甲雙胍組 10 26.08±8.88* 10.77±3.66* 2.42±0.20*中藥低劑量組10 28.34±3.14* 10.33±0.82* 2.74±0.20*中藥高劑量組10 15.39±0.89△ 9.23±0.71* 1.67±0.04△

從表2可以看出，就LH水平而言，模型組最高，其余各組明顯較低，模型組與正常組對比P＜0.01，存在顯著性差異，模型組大鼠血清LH水平明顯升高，符合多囊卵巢綜合征血清LH升高的情況，說明PCOS大鼠模型是成功的。治療組與模型組對比，均有顯著性差異，而二甲雙胍組和中藥低劑量組對比，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中藥高劑量組與正常組對比，也存在無顯著性差異，P＞0.05；說明治療組均有效，而中藥高劑量組效果最佳。

就FSH水平而言，以模型組最高，其中正常組與模型組相比，P＜0.01，而各治療組間對比，P＞0.05，說明二甲雙胍組、中藥低劑量組、中藥高劑量組之間無顯著性差異。

就LH/FSH比值而言，以模型組最高，正常組與模型組相比，P＜0.05，存在顯著性差異，各治療組與模型組對比，有顯著性差異，P＜0.05，治療組各組間對比，均P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。故而認(rèn)為中藥高劑量組在改善LH/FSH比值中最優(yōu)。

3 討論

多囊卵巢綜合征 （PCOS）是由于下丘腦－垂體－卵巢功能失調(diào)而產(chǎn)生的一種婦科內(nèi)分泌失調(diào)綜合征，高雄激素、高LH是PCOS的基本病理特點(diǎn)，也是患者生殖功能障礙的根本原因，PCOS時(shí)LH水平升高，直接激活卵巢細(xì)胞色素P450C170a的活性，促進(jìn)雄激素的生物合成。高性激素血癥，下丘腦促性腺激素釋放激素 （GnRH）脈沖分泌頻率加速，導(dǎo)致垂體的黃體生成素 （LH）、卵泡刺激素 （FSH）分泌不協(xié)調(diào)；LH水平升高，刺激卵巢泡膜細(xì)胞功能亢進(jìn)，引起高雄激素血癥及卵巢多囊性改變［3］。

本病在中醫(yī)學(xué)中歸屬 “閉經(jīng)”、“不孕”、“癥瘕”等范疇。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎主藏精，主生長發(fā)育與生殖，元?dú)馀c腎精參與經(jīng)血的組成，與月經(jīng)關(guān)系密切。故而腎氣虧虛，沖任不調(diào)是本病病因，因此治療中宜采用補(bǔ)腎填精，調(diào)沖任為主，而補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯以補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)，調(diào)整臟腑間功能來實(shí)現(xiàn)對本病的治療作用。通過現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對中醫(yī)藥的研究發(fā)現(xiàn)［4］，補(bǔ)腎填精類中藥如熟地、山茱萸等具有類激素樣作用，能使下丘腦－垂體－卵巢軸分泌功能趨于正常，恢復(fù)排卵。余瑾等［5］認(rèn)為補(bǔ)腎促排卵機(jī)制可能作用于下丘腦，促排卵作用于繼LH/FSH比值下降后的IgT/IgE2比值下降直接有關(guān)，提示補(bǔ)腎治療在下丘腦垂體卵巢各個(gè)環(huán)節(jié)有一定作用。實(shí)驗(yàn)表明［6］補(bǔ)腎中藥能增強(qiáng)下丘腦－垂體－卵巢軸功能，提高卵巢HCG/LH受體功能，從而改善神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)功能。

本實(shí)驗(yàn)中，PCOS大鼠模型血清中T和LH水平、FSH水平及LH/FSH比值明顯升高，符合多囊卵巢綜合征性激素變化的基本特征，通過實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證實(shí)，二甲雙胍組、中藥低劑量組、中藥高劑量組均能降低血清睪酮水平、LH水平、FSH水平及LH/FSH比值，而三者之中以中藥高劑量組效果最佳，從而證實(shí)了補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)湯高劑量組在治療多囊卵巢的良好的臨床治療價(jià)值。

［1］王穎，李美芝，趙一鳴.多囊卵巢綜合征促排卵失敗的相關(guān)因素探討［J］.生殖與避孕，2000，20（6）：342－347.

［2］Poretsky L，Piper B，Insulin resistance，hypersecretion of LH，and a dualdefect hypothesis for the pathogenesis of polycystic ovary syndrome，Obstet Gynecol，1994，84（4）：613－621.

［3］張以文，多囊卵巢綜合征的現(xiàn)代概念［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2004，39（9）：577－578.

［4］蔡麗慧，張秀蘭，劉云蓮.中西醫(yī)結(jié)合治療多囊卵巢綜合征的臨床研究［J］.中醫(yī)函授通訊，1997，16（3）：38.

［5］余瑾，孫月麗，邵公權(quán)，等.補(bǔ)腎化痰治療多囊卵巢綜合征中對下丘腦－垂體－卵巢功能的調(diào)節(jié)［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1986，6（4）：218.

［6］羅元愷.實(shí)用中醫(yī)婦科學(xué) ［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1996，290.

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1007－8517（2013）08－0015－02

2013.03.01）