李松賓 張令令

（1河南省商丘市食品藥品檢驗所，商丘476000；2河南省商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，商丘476000）

HPLC法測定三七續(xù)骨膠囊中延胡索乙素的含量

李松賓1張令令2

（1河南省商丘市食品藥品檢驗所，商丘476000；2河南省商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，商丘476000）

目的 建立三七續(xù)骨膠囊中延胡索乙素的HPLC含量測定方法。方法采用ODS-C18色譜柱5μm（4.6×250mm），流動相：甲醇：0.1%磷酸（三乙胺調(diào)pH至6.0）（55∶45）；流速：1.0ml·min-1；檢測波長280nm。結(jié)果延胡索乙素在0.0939～0.9390μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝1），平均加樣回收率為98.83%，RSD＝0.50%（n＝6）。結(jié)論本方法簡便快速、結(jié)果準確，可較好的控制該制劑的質(zhì)量。

三七續(xù)骨膠囊；延胡索乙素；高效液相色譜法

三七續(xù)骨膠囊經(jīng)過多年臨床經(jīng)驗證明是質(zhì)量穩(wěn)定、療效可靠的醫(yī)院制劑，由三七、延胡索、紅花、血竭、土鱉蟲、乳香、沒藥、骨碎補、自然銅、川斷等10味中藥材加工制成，具有活血止痛、消腫散瘀、接骨續(xù)損之功效，主治跌打損傷、筋傷骨斷。延胡索乙素為延胡索的主要有效成分，延胡索乙素具有活血、行氣、止痛的作用，對三七續(xù)骨膠囊療效的發(fā)揮起重要作用。國內(nèi)現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準中未收載含量測定項目，為了有效地控制制劑質(zhì)量，本文采用HPLC測定了延胡索中延胡索乙素的含量，可較好地控制該制劑的質(zhì)量?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器AUW-220D電子分析天平DSQ10260超聲儀Agilent 1200高效液相色譜儀。

1.2 試藥延胡索乙素對照品（批號：110726-201112，

來源：中國藥品生物制品檢定所）；水純化水，甲醇為色譜純，磷酸為分析純；三七續(xù)骨膠囊（樣品由寧陵縣中醫(yī)院提供，批號20120801；20120802；20120803）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：ODS-C18色譜柱5μm（4.6× 250mm），0.1%磷酸：甲醇（45∶55）為流動相；檢測波長280nm；流速1.0ml·min-1；進樣量10μl。理論板數(shù)按延胡索乙素峰計算不低于3000。

2.2 對照品制備取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含延胡索乙素46μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備取供試品約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液50ml，精密稱定重量，放置過夜，超聲處理1小時，放冷，再精密稱定重量，用濃氨試液-甲醇（1∶20）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察取延胡索乙素對照品溶液，按照“2.1”項色譜條件，分別進樣2、5、10、15、20μl，記錄延胡索乙素峰面積值，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，以對照品進樣量（C）為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程：Y＝0.84276X-15.96853 r＝1。結(jié)果顯示，在0.0939～0.9390μg范圍內(nèi)延胡索乙素進樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 干擾試驗取不含延胡索的陰性樣品（自制）約3.0g，照供試品溶液制備方法制備，注入液相色譜儀，進樣量10μl，陰性對照液對測定無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.6 精密度試驗取同一濃度的對照品溶液（46.95ug／ml），重復(fù)進樣6次，每次10μl，測定延胡索乙素峰面積，RSD＝1.50%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗取同一濃度供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、16h進樣測定，結(jié)果延胡索乙素峰面積RSD＝0.97%，顯示供試品溶液在16小時內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗稱取已知含量為0.3553mg／g的樣品6份，每份約3.0g，精密稱定，分別置1～6號錐形瓶中，分別精密加入對照品儲備液20ml，按照供試品溶液制備方法制備，按照“2.1”項色譜條件，分別測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（%）

2.9 含量測定取3批樣品，按制備供試品溶液制備方法制備樣品溶液，按照“2.1”項色譜條件測定，按外標(biāo)法計算延胡索乙素的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品中延胡索乙素的含量

3 討論

參考中國藥典并結(jié)合指標(biāo)成分的理化性質(zhì)，我們比較了熱回流提取和超聲提取兩種方法，發(fā)現(xiàn)超聲提取方法含量高、操作簡便［1］，利于控制該制劑的質(zhì)量。

［1］陸益，黎遠東，梁寧生，等．RP-HPLC法測定香術(shù)止痛酊中延胡索乙素的含量［J］．廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，25（3）：427-428．

Determination of Tetrahydropalmatine in Sanqi Xugu Capsule by HPLC

Li Songbin1Zhang Lingling2
(1 Shangqiu Institute for Food and D rug Control,Shangqiu,Henan Prouince,476000,China; 2 Shangqiu Medical College,Shangqiu,Henan Prouince,476000,China)

Objective Establishing the determination method of the HPLC in the Tetrahydropalmatine of Sanqi Xugu Capsule．MethodsWe used ODS C18chromatographic column 5μm（4.6×250mm），Methanol：0.1%Phosphate（55∶45）as mobile phase．The content was detected at a waveleng of 280nm，the flow rate was 1.0mlomin-1．ResultsThe Tetrahydropalmatine had a good linear relationship in the range of 0.0939～0.9390μg（r＝1），the average recovery was 98.83%，RSD＝0.50%（n＝6）．ConolusionThe established method is accurate，sensitive and simple．It can be used for quality control of Sanqi Xugu Capsule．

Sanqi Xugu Capsules；Tetrahydropalmatine；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.19.102

1672-2779（2013）-19-0146-02

蘇 玲

2013-08-16）