蔡正鳳

(青海省交通醫(yī)院病理科，青海西寧810008)

幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)胃黏膜活檢的幾種染色方法比較

蔡正鳳

(青海省交通醫(yī)院病理科，青海西寧810008)

幽門(mén)螺桿菌；染色；甲苯胺藍(lán)；胃黏膜；脫蠟

幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori)是一種革蘭陰性桿菌，人群中Hp的感染率較高，幽門(mén)螺桿菌的感染與多種疾病有關(guān)，尤其是消化系統(tǒng)疾病，如與慢性活動(dòng)性胃炎，消化性潰瘍的發(fā)生，發(fā)展及復(fù)發(fā)相關(guān)，近幾年來(lái)甚至認(rèn)為Hp與胃癌相關(guān)[1]。清除Hp有利于胃黏膜炎癥程度的減輕，因此，檢測(cè)Hp的感染對(duì)診斷、治療及藥物療效分析顯得尤為重要。但檢測(cè)方法較多，每種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，由于條件和技術(shù)的要求，限制了某些方法的應(yīng)用[2]。在長(zhǎng)期的工作經(jīng)驗(yàn)中摸索出甲苯胺藍(lán)染色效果較好，并與HE染色，W-S銀染等染色方法進(jìn)行了比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集我科2012年6月至12月半年中胃鏡活檢確診為慢性活動(dòng)性胃炎和胃潰瘍的蠟塊50例，每例切片4張分別進(jìn)行HE染色、Warthin starry(W-S)銀染、堿性品紅、甲苯胺藍(lán)染色。

1.2 試劑W-S銀染液，堿性品紅，哈瑞(Harris)蘇木精-伊紅染液，甲苯胺藍(lán)染液。

1.3 染色方法W-S銀染色，堿性品紅染色按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，HE常規(guī)染色；甲苯胺藍(lán)染色方法：(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；(2)滴加1%甲苯胺藍(lán)染液染色5～8min(染液配制：1g甲苯胺藍(lán)溶于100ml蒸餾水中，滴加媒染劑2ml，置于60℃溫箱2h，然后移置室溫備用)；(3)自來(lái)水洗1～2min；(4)95%乙醇急速分化；(5)無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固，顯微鏡下觀察Hp的顯示情況。

2 結(jié)果

W-S銀染色Hp呈黑色，背景為棕黃色，在50例慢性活動(dòng)性胃炎和胃潰瘍的胃黏膜活檢蠟塊中的陽(yáng)性檢出率為84%(42/50);堿性品紅染色Hp與背景均呈鮮紅色，陽(yáng)性檢出率為78%(39/50);HE染色Hp呈淺灰色，陽(yáng)性檢出率72%(36/50);甲苯胺藍(lán)染色Hp呈淺藍(lán)色或藍(lán)色，陽(yáng)性檢出率92%(46/50);甲苯胺藍(lán)染色胃黏膜活檢組織的Hp的顯微鏡下組織圖像見(jiàn)圖1A～D,鏡下顯示Hp呈淺藍(lán)色菌體形態(tài)清晰(圖1A)，Hp形狀桿狀或短弧狀(圖1B)，位于胃小凹或胃小凹的分泌物中(圖1C)，亦可位于腺腔內(nèi)單個(gè)散在，片狀或團(tuán)塊狀分布(圖1D)。

圖1 胃黏膜活檢組織及HP染色結(jié)果

3 討論

經(jīng)典的W-S銀染色法，Hp呈黑色，但染液配制復(fù)雜，需要一定的溫度，染色時(shí)間長(zhǎng)，常出現(xiàn)銀顆粒沉淀物，影響觀察。堿性品紅染色菌體和背景均呈鮮紅色，鏡檢時(shí)容易導(dǎo)致視力疲勞。HE染色時(shí)，Hp著色較淺較淡，不僅觀察困難而且經(jīng)常容易漏診。HE染色是組織切片最經(jīng)常和廣泛應(yīng)用的染色方法[3]，但其手續(xù)眾多，過(guò)程復(fù)雜，而甲苯胺藍(lán)染色具有如下優(yōu)點(diǎn)，染色步驟少，操作簡(jiǎn)便，時(shí)間短，染液配制簡(jiǎn)單，所需藥品少，染液可反復(fù)使用，長(zhǎng)期保存，成本低廉，Hp著色穩(wěn)定鮮明，菌體形態(tài)清晰，在顯微鏡下易于觀察。是一種經(jīng)濟(jì)實(shí)用的染色方法，符合Hp感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。

甲苯胺藍(lán)是屬醌亞胺噻嗪類(lèi)的一種堿性染料，對(duì)Hp有一定的親和力，經(jīng)媒染作用后，對(duì)Hp染色強(qiáng)度增加，穩(wěn)定且鮮明，甲苯胺藍(lán)在醇中溶解度比水中低，用醇進(jìn)行分化易于控制適度[5]，由于甲苯胺藍(lán)對(duì)Hp有較強(qiáng)的親和力，故可采用稍過(guò)染，深分化的退行性染色法，這樣胃黏膜活檢組織褪色較多，Hp褪色較少，從而加大了Hp與背景的色差，使Hp更易于組織碎片、污染菌及其他雜菌鑒別。Hp的組織染色方法有多種，但均不夠理想或操作繁瑣，或染液使用率低成本較高，或染色效果不佳，本人在多年的工作當(dāng)中不斷摸索，發(fā)現(xiàn)甲苯胺藍(lán)是一種染色效果好，操作簡(jiǎn)便，成本低廉的染色方法，值得推廣，對(duì)Hp的臨床診斷及研究有一定的應(yīng)用價(jià)值[6]。

[1]梁后杰,劉為紋.幽門(mén)螺桿菌與胃癌關(guān)系的研究發(fā)展[J].中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志,1994,14(7):436-437.

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[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì).幽門(mén)螺桿菌若干問(wèn)題的共識(shí)意見(jiàn)[J].中華消化雜志,2000,20(2)：117-118.

[5]凌啟波.實(shí)用病理特殊染色和組化技術(shù)[M].廣州:廣州高等教育出版社,1989:43-45.

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R361+.2，R466

B

1674-1129(2013)03-0290-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.03.040