張 進 李文君

（吉林省通化市食品藥品檢驗所中藥室，通化134001）

HPLC法測定頸腰康片中士的寧的含量

張 進 李文君

（吉林省通化市食品藥品檢驗所中藥室，通化134001）

目的 建立以HPLC法檢測頸腰康片中士的寧的含量測定。方法 色譜柱：依利特C18（4.6×250mm，5μm）；流動相：乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸鈉與0.02mol／L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8）（23∶77）；流速：1.0ml／min；柱溫：室溫；檢測波長：254nm；以士的寧為對照品，采用外標法定量。結(jié)果 士的寧線性范圍為0.0247-0.2223μg（r=1.0000），平均回收率為99.80%，RSD為1.29%。結(jié)論 本法簡便，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，可用于該藥品的質(zhì)量控制。

頸腰康片；士的寧；HPLC；含量測定

頸腰康片是由制馬錢子、伸筋草、香加皮、乳香（醋炒）、沒藥（醋炒）、紅花等十味中藥組成，其中制馬錢子為本處方中的君藥之一。制馬錢子為馬錢科植物馬錢Strychnos nux-vomica L的干燥成熟種子的炮制加工品，主要成份為番木鱉堿（士的寧）、馬錢子堿、偽番木鱉堿、番木鱉次堿等，均屬生物堿類成分。具有通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫等作用，用于風(fēng)濕頑痹，麻木癱瘓、跌撲損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛等癥。為了有效地控制頸腰康片的內(nèi)在質(zhì)量，我們以制馬錢子中士的寧作為指標性成分，采用反相高效液相色譜法測定制馬錢子中士的寧的含量，方法易于操作，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好專屬性強，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀，士的寧對照品（由中國藥品生物制品檢驗所提供）批號：110715-200212；規(guī)格：供含量測定用。乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：依利特C18（4.6×200mm，5μm）；流動相：乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸鈉與0.02mol／L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)p H值2.8）（23∶77）；流速：1.0ml／min；柱溫：室溫；檢測波長：254nm；理論板數(shù)按士的寧峰計算應(yīng)不低于6000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取士的寧對照品12.5mg置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，再精密吸取1ml置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取約1.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入氫氧化鈉試液3ml，放置30分鐘，再精密加入三氯甲烷20ml，稱定重量，加熱回流2小時，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，分取三氯甲烷提取液，用鋪有少量無水硫酸鈉的濾紙濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液3ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例配成不含制馬錢苷的陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。分別精密吸取陰性對照溶液、供試品溶液及對照品溶液各5μl，注入液相色譜儀中，按液相色譜條件測定，結(jié)果表明，陰性對照溶液色譜圖中與對照品相同保留時間處無干擾。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取士的寧對照品適量加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9μl測定，記錄色譜圖并測定峰面積，以峰面積（A）對進樣量（μg）回歸，回歸方程為：Y=2510579x-794（r =1.0000），結(jié)果表明士的寧在0.0247-0.2223μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗 精密吸取對照品溶液5μl，注入液相色譜儀，重復(fù)進樣5次，RSD為1.09%。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取同一批樣品的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h，測定含量，RSD為0.13%。結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗 取同一批樣品，按2.2.2項下操作方法獨立測定五次，用外標法計算士的寧含量（mg／片），分別為0.532、0.534、0.534、0.530、0.533；RSD為0.31%。

2.7 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品適量，精密加入一定量的對照品，按2.2.2項下操作，作為試驗溶液；分別精密量取對照品溶液和試驗溶液各5μl進樣，計算回收率（結(jié)果見表1）。平均回收率99.80%，RSD= 1.29%，結(jié)果表明本法回收率較好，準確度較高。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.8 樣品測定 取不同批號的頸腰康片，按2.2.2項下操作，分別精密量取對照品溶液和樣品溶液各5？l，注入高效液相色譜儀，測定士的寧的含量（結(jié)果見表2）。

表2 三批樣品中士的寧的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 取士的寧對照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-260紫外分光光度計200nm～400nm范圍內(nèi)測定，結(jié)果士的寧在254nm波長處，有最大吸收故選擇254nm為本實驗的測定波長。

3.2 流動相的選擇 參照有關(guān)資料［1］我們對乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸鈉與0.02mol／L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8）（21∶79）、乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸鈉與0.02mol／L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)PH值2.8）（22：78）、乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸鈉與0.02mol／L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)p H值2.8）（23∶77）進行優(yōu)化試驗，結(jié)果，以乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸鈉與0.02mol／L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)p H值2.8）（23∶77）為流動相分離效果較好，保留時間適度，因此，確定其為本法的流動相。

3.3 樣品提取方法的考察 我們采用了三氯甲烷50ml與濃氨試液1ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時及精密加入氫氧化鈉試液3ml，放置30分鐘，再精密加入三氯甲烷20ml，稱定重量，加熱回流2小時。結(jié)果后者提取方法即節(jié)省時間又提取充分，因此我們采用正文所述的供試品溶液的制備方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.06.113

1672-2779（2013）-06-0157-02

??韓世輝

2013-03-12）