朱 艷，孟 麗，周晨明，馬洪駿

（河北醫(yī)科大學(xué)電鏡實驗中心，河北石家莊050017）

·技術(shù)方法·

透射電鏡觀察氧化亞鐵硫桿菌的改進(jìn)

朱 艷，孟 麗，周晨明，馬洪駿

（河北醫(yī)科大學(xué)電鏡實驗中心，河北石家莊050017）

硫桿菌屬；顯微鏡檢查，電子，透射；負(fù)染色

電子顯微鏡廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，而負(fù)染色技術(shù)也得到越來越廣泛的應(yīng)用。負(fù)染色是利用高密度的在透射電鏡下不顯示結(jié)構(gòu)的重金屬鹽（如醋酸鈾、磷鎢酸等），將生物標(biāo)本包圍起來，增強(qiáng)背景散射電子的水平以提高反差，在黑暗的背景上顯示陰性反差樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu)。實際工作中負(fù)染色技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、病毒、分離的細(xì)胞器等的研究。氧化亞鐵硫桿菌在生物浸礦和環(huán)保研究中是常用的一個菌種［1］，在觀察鑒定其形態(tài)特征時，經(jīng)常采用磷鎢酸負(fù)染色，然后透射電鏡觀察，在觀察過程中發(fā)現(xiàn)，菌體本身顏色較深，經(jīng)過磷鎢酸染色后，菌體被染劑包圍，一些結(jié)構(gòu)顯示不清，且較深的菌體與周圍多余染劑顏色接近，影響觀察效果。本方法未經(jīng)磷鎢酸染色直接將制備好的氧化亞鐵硫桿菌樣本滴附于帶膜銅網(wǎng)上，干燥后透射電鏡觀察，氧化亞鐵硫桿菌形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，未出現(xiàn)團(tuán)塊凝集現(xiàn)象。既省時省力，又能更清楚地觀察到氧化亞鐵硫桿菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1 材料與方法

從污水中分離培養(yǎng)氧化亞鐵硫桿菌菌株，純培養(yǎng)制成懸液［2］。用毛細(xì)吸管吸取細(xì)菌懸浮液，滴于帶有Formal膜的銅網(wǎng)上，靜置1min，用濾紙從液珠邊緣吸去多余液體，滴1%磷鎢酸染液染色1～2min。用濾紙吸去多余染液，干燥后透射電鏡觀察。用毛細(xì)吸管吸取同樣的細(xì)菌懸浮液，滴于另一個帶有Formal膜的銅網(wǎng)上，靜置1min，用濾紙從液珠邊緣吸去多余液體，干燥后透射電鏡觀察。透射電鏡型號為日立H-7500。

2 結(jié) 果

氧化亞鐵硫桿菌樣品因菌體本身顏色較深，經(jīng)過滴染法負(fù)染色后，菌體本身顏色更深，菌體被染劑包圍，一些結(jié)構(gòu)顯示不清，菌體有聚集，且較深的菌體與周圍多余染劑顏色接近，不易分辨，影響觀察效果（圖1，2）。

直接滴附氧化亞鐵硫桿菌樣品于帶膜的銅網(wǎng)上，干燥后透射電鏡觀察視野無雜質(zhì)，菌體分散性比較好，無成團(tuán)現(xiàn)象?？捎^察到氧化亞鐵硫桿菌菌體形態(tài)（呈圓頭短桿狀，端生鞭毛，見圖3，4）及大小等。

圖1 磷鎢酸染色后的氧化亞鐵硫桿菌的TEM像（×5 000）

圖2 磷鎢酸染色后的氧化亞鐵硫桿菌的TEM像（×15 000）

圖3 未染色的氧化亞鐵硫桿菌的TEM像（×5 000）

圖4 未染色的氧化亞鐵硫桿菌的TEM像（×15 000）

3 討 論

氧化亞鐵硫桿菌廣泛應(yīng)用于有用金屬的浸出［3-5］，也用于污泥中難溶性重金屬的祛除［6］。在對其研究中，透射電鏡觀察是較為基礎(chǔ)的方法，用負(fù)染色的技術(shù)觀察鑒定氧化亞鐵硫桿菌，需要注意的影響因素較多，如染色的時機(jī)、染色時間的長短、磷鎢酸染液的pH值、染液與樣品的比例等。氧化亞鐵硫桿菌有其菌體的特殊性，菌體不經(jīng)負(fù)染色，本身顏色就較深，這一點(diǎn)可能與氧化金屬離子的生長特性以及生長環(huán)境有關(guān)，未經(jīng)過負(fù)染色直接透射電鏡觀察菌體結(jié)構(gòu)清晰，無雜質(zhì)和較多菌體的聚集現(xiàn)象，并且更加方便快捷，所以改進(jìn)后的直接觀察法更為實用。

［1］ 王聰，李強(qiáng)，李寶兵，等.生物淋濾法去除污泥中的重金屬［J］.微生物學(xué)通報，2010，37（4）：615-621.

［2］ 莊賀，沈俊劍，黎俊，等.氧化亞鐵硫桿菌的分離鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化［J］.微生物學(xué)通報，2013，40（7）：1131-1137.

［3］ 楊遠(yuǎn)坤，諶書，陳夢君，等.氧化亞鐵硫桿菌浸提廢舊線路板銅的浸出率與時間的關(guān)系［J］.環(huán)境工程學(xué)報，2013，7（6）：2322-2326.

［4］ 謝鑫源，孫培德，樓菊青，等.模擬電鍍污泥重金屬浸出液對氧化亞鐵硫桿菌活性的影響［J］.環(huán)境科學(xué)，2013，36（1）：209-216.

［5］ 鄧孝榮，曾桂生，李卓，等.氧化亞鐵硫桿菌浸出廢舊鋰離子電池的工藝條件［J］.環(huán)境化學(xué)，2012，31（9）：1381-1386.

［6］ 劉文全，任一兵，王宇，等.1株氧化亞鐵硫桿菌的分子鑒定及生物學(xué)特性研究［J］.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（1）：70-73.

（本文編輯：趙麗潔）

R319.3

B

1007-3205（2013）09-1093-02

2013-04-12；

2013-04-28

朱艷（1983-），女，河北定州人，河北醫(yī)科大學(xué)電鏡實驗中心助理實驗師，醫(yī)學(xué)碩士，從事電子顯微學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.09.040