科技進(jìn)展

飼料中喹乙醇ELISA檢測(cè)試劑盒的研制及性能分析

喹乙醇是一類(lèi)廣譜抗菌藥，但由于能使動(dòng)物發(fā)生中毒或死亡，還會(huì)在畜產(chǎn)品中殘留，國(guó)家規(guī)定禁止用于家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖，只能限量用于體重低于35 kg豬的飼料。為了研制快速檢測(cè)飼料中喹乙醇的ELISA試劑盒（OLA-Kit），該研究用喹乙醇單克隆抗體（OLA-mAb）建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，組裝OLA-Kit，并對(duì)試劑盒的性能進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明：OLA-Kit的標(biāo)準(zhǔn)曲線呈典型的反S型，相關(guān)系數(shù)R2=0.976 7，線性范圍為1～243 μg/L，半數(shù)抑制濃度（IC50）為（14.29± 3.75）μg/L，檢測(cè)限為0.79 μg/L，定量限為4.0 μg/L，臨界值（豬飼料）為83.37 μg/g，基質(zhì)對(duì)該試劑盒的檢測(cè)結(jié)果影響不大；豬、雞、魚(yú)飼料的不同濃度添加回收率均大于74.40%，平均批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于15%；試劑盒與喹胺醇的交叉反應(yīng)率（CR%）為17.93%，與MQCA、QCA及其他喹喔啉類(lèi)藥物幾乎無(wú)反應(yīng)性，可在2～8℃保存6個(gè)月以上；OLA-Kit與HPLC法測(cè)定豬飼料中喹乙醇添加回收率沒(méi)有顯著差異（≥0.05）。本研究成功研制出敏感、特異、準(zhǔn)確的喹乙醇ELISA檢測(cè)試劑盒，可用于飼料中該藥物的快速檢測(cè)和批量篩查。

本刊摘自：張景艷，王磊，李建喜，等.飼料中喹乙醇ELISA檢測(cè)試劑盒的研制及性能分析.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，44(8):1297-1304.

潛流人工濕地對(duì)畜禽養(yǎng)殖廢水的凈化效果

為了提高潛流人工濕地對(duì)畜禽養(yǎng)殖廢水中污染物的去除效果，該試驗(yàn)通過(guò)改變濕地內(nèi)部結(jié)構(gòu)構(gòu)建了4個(gè)潛流人工濕地單元，選用灰磚塊和碎石做濕地填料，冬夏季輪作栽培齒果酸模和大狼把草，考察濕地運(yùn)行期間對(duì)厭氧消化后豬場(chǎng)廢水的凈化效果。結(jié)果表明：濕地單元經(jīng)過(guò)80天的啟動(dòng)，運(yùn)行穩(wěn)定，有植物濕地比無(wú)植物對(duì)照濕地提前10天左右進(jìn)入穩(wěn)定期。運(yùn)行期間，各濕地單元對(duì)廢水中氨氮（ammonia nitrogen，NH4+-N）、總氮（total nitrogen，TN）、總磷（total phosphorus，TP）和化學(xué)需氧量（chemical oxygen demand，CODCr）的去除率與氣溫變化均呈現(xiàn)顯著線性正相關(guān)。在水力停留時(shí)間（hydraulic retention time，HRT）為4天，進(jìn)水中CODCr、NH4+-N、TN、TP濃度分別為520、 110、120、10 mg/L左右時(shí)，4個(gè)濕地單元對(duì)CODCr、TP的去除率分別在60%和70%以上，對(duì)NH4+-N和TN的去除率分別為28%～67%和32%～58%，植物對(duì)CODCr及TP去除的貢獻(xiàn)分別穩(wěn)定在10%和4%左右，植物對(duì)氮的去除效果受氣溫影響較大，夏季對(duì)NH4+-N和TN去除的貢獻(xiàn)分別可達(dá)13%和12%。與一般潛流人工濕地比較，改進(jìn)的波形潛流人工濕地對(duì)NH4+-N、TN和CODCr的平均去除率提高均在3%以上，對(duì)TP去除效果差異不顯著（ ＞0.05）。該研究可為構(gòu)建大規(guī)模的潛流人工濕地處理畜禽養(yǎng)殖廢水提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

本刊摘自：張彩瑩，王巖，王妍艷.潛流人工濕地對(duì)畜禽養(yǎng)殖廢水的凈化效果.農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2013，29(17): 160-168.

營(yíng)養(yǎng)對(duì)母豬肢蹄健康的影響

母豬跛行由多種因素引起，主要與骨質(zhì)再建、軟骨代謝以及角質(zhì)物再生過(guò)程中的機(jī)能障礙有關(guān)，造成跛行的母豬蹄病變有多種（圖1）。本文討論了日糧組成尤其是維生素和礦物質(zhì)，是如何影響骨、關(guān)節(jié)軟骨以及角質(zhì)物的生長(zhǎng)過(guò)程。

對(duì)于骨重建過(guò)程中，糖類(lèi)、蛋白質(zhì)和氨基酸的作用還不清楚。常量元素Ca、P和維生素D非常重要。Mg可能與Ca、P一樣重要。飲食缺陷或者攝入過(guò)多有毒礦物質(zhì)Zn、Cu、Mn和F可能不利于骨質(zhì)重建。

圖1 不同類(lèi)型的母豬蹄病

關(guān)節(jié)軟骨的形成依賴于彌散性的營(yíng)養(yǎng)供給。蛋白多糖和膠原合成缺陷是關(guān)節(jié)軟骨相關(guān)紊亂癥的前兆。添加氨基酸，尤其是結(jié)合使用微量元素Cu和Si可減少軟骨病的發(fā)生率，減輕病情嚴(yán)重程度，然而尚未有有力證據(jù)證明常量元素在關(guān)節(jié)軟骨形成過(guò)程中的特殊作用。攝入微量元素Zn、Mn和Fe可在一定程度上減輕這些紊亂癥的嚴(yán)重性。

彌散性的營(yíng)養(yǎng)供給對(duì)于角質(zhì)物的形成也是至關(guān)重要的。尤其是含硫氨基酸如半胱氨酸對(duì)于角質(zhì)化作用很重要。適宜的日糧、常量以及微量元素的彌散性供給可直接或間接激活角蛋白和細(xì)胞間粘合物質(zhì)合成過(guò)程中所需的相關(guān)酶。補(bǔ)充生物素同時(shí)結(jié)合礦物質(zhì)有助于角質(zhì)物的生成。

總之，營(yíng)養(yǎng)水平是母豬跛行的重要誘因，可影響骨、軟骨和角質(zhì)物的質(zhì)量，其調(diào)控機(jī)制是復(fù)雜的，尚不清楚。各營(yíng)養(yǎng)組份往往是相互作用的，必須平衡供給。因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)攝入不足或過(guò)量均會(huì)干擾骨、軟骨和角質(zhì)物的生成過(guò)程。（王亞輝編譯，譯自《畜牧業(yè)科學(xué)》）

譯自：Van Riet MMJ,Millet S,Aluwé M,et al.Impact of nutrition on lameness and claw health in sows.Livestock Science,2013,156(1-3):24-35.

PCV2疫苗和PRRSV疫苗聯(lián)合免疫對(duì)自然感染豬的特異性免疫保護(hù)效果研究

本研究旨在評(píng)估PCV2疫苗和PRRSV疫苗聯(lián)合免疫對(duì)野毒感染豬的免疫保護(hù)效果。試驗(yàn)選取4周齡的仔豬800頭，隨機(jī)分為4組，每組200頭。A組通過(guò)肌肉注射的方式同時(shí)接種PRRSV-1型毒株弱毒活疫苗和PCV2a型毒株重組Cap蛋白亞單位疫苗，B組和C組分別單獨(dú)接種PRRSV疫苗和PCV2疫苗，D組為佐劑對(duì)照組。臨床評(píng)分（發(fā)病率）、死亡率和平均日增重作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。分析了病毒血癥、病毒特異性ELISA抗體水平以及通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（ELISpot）測(cè)定了IFN-γ分泌細(xì)胞介導(dǎo)的免疫力。PRRSV感染引起的臨床癥狀持續(xù)8周時(shí)間，而PCV2感染則持續(xù)了5個(gè)月之久。結(jié)果表明，聯(lián)合免疫減輕了臨床癥狀，增加了預(yù)防分?jǐn)?shù)（40.4%）和平均日增重。在聯(lián)合免疫組，由于感染尤其是圓環(huán)病毒2型引起病毒血癥的豬只死亡率降低了3倍。接種PRRSV疫苗并不能減輕PRRSV引起的病毒血癥，但聯(lián)合或單獨(dú)接種PCV2疫苗可以降低PCV2病毒載量的水平。盡管有母源抗體存在，動(dòng)物在接種疫苗和感染野毒后，仍然進(jìn)行了快速的血清抗體轉(zhuǎn)化。另外，在單獨(dú)或聯(lián)合免疫組，母源抗體并不干擾動(dòng)物特異性IFN-γ分泌細(xì)胞的反應(yīng)。研究表明，在動(dòng)物感染病毒后，同時(shí)接種PRRSV疫苗和PCV2疫苗，不會(huì)干擾特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，不會(huì)影響臨床保護(hù)力。（王亞輝編譯，譯自《獸醫(yī)微生物學(xué)》）

譯自：Martelli P,Ardigo P,Ferrari L,et al.Concurrent vaccinations against PCV2 and PRRSV:study on the specific immunity and clinical protection in naturally infected pigs.Veterinary Microbiology,2013,162(2-4):558-571.

基于熒光原位雜交法檢測(cè)豬結(jié)腸組織中的漢普森細(xì)螺旋體

豬痢疾一般是由呈強(qiáng)β-溶血的豬痢疾短螺旋體感染引起。然而，最近美國(guó)和加拿大報(bào)道，在豬痢疾臨床病例中分離出一種新的病原漢普森細(xì)螺旋體（B.hampsonii）。用微生物法來(lái)檢測(cè)臨床樣本中的短螺旋體是高度靈敏的，但培養(yǎng)過(guò)程需要數(shù)天，隨后還需進(jìn)行分子水平上的分析。利用分子探針在經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片上進(jìn)行原位雜交，該方法可觀察、鑒定目標(biāo)分子在細(xì)胞組織中的分布，簡(jiǎn)單快速，無(wú)需微生物培養(yǎng)。基于上述原理，建立了檢測(cè)豬痢疾臨床樣品中B.hampsonii的熒光原位雜交方法。在對(duì)若干種短螺旋體進(jìn)行基因序列比對(duì)分析后，設(shè)計(jì)了針對(duì)B.hampsonii 23s rRNA特異性序列的寡核苷酸探針Hamp 1210。對(duì)于臨床分離株，在GenBank中有相應(yīng)的參考序列。應(yīng)用探針Hamp 1210以及先前報(bào)道的針對(duì)病變結(jié)腸組織中B.hyodysenteriae的探針Hyo 1210成功檢測(cè)了人工感染豬和田間自然感染豬的體內(nèi)目標(biāo)微生物，而且B.hampsonii的進(jìn)化支I和II均可通過(guò)探針Hamp 1210檢出。然而在利用Hamp 1210探針檢測(cè)受中間短螺旋體感染的組織時(shí)，在一例樣本中出現(xiàn)了強(qiáng)陽(yáng)性信號(hào)。利用探針Hamp 1210對(duì)豬痢疾B. hampsonii感染的豬結(jié)腸組織福爾馬林固定切片標(biāo)本進(jìn)行原位雜交測(cè)定，可以縮短從樣本送檢到病原鑒定的時(shí)間間隔。（王亞輝編譯，譯自《獸醫(yī)診斷調(diào)查雜志》）

譯自：Burrough ER,Wilberts BL,Bower LP,et al.Fluorescent in situ hybridization for detection of"Brachyspira hampsonii"in porcine colonic tissues.Journal of Veterinary Diagnostic Investigation,2013,25(3):407-412.