馬　蘭

(天津市北辰區(qū)藥品檢驗(yàn)所，天津　300400)

麻杏石甘合劑是天津市北辰區(qū)中醫(yī)院研制的制劑品種，由麻黃、炙甘草、苦杏仁等5味藥組成，具有鎮(zhèn)咳、祛痰的作用。甘草酸是炙甘草中主要成分，甘草酸對(duì)該制劑的功效具有很大的支持作用。本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測(cè)定麻杏石甘合劑中甘草酸含量，可作為控制麻杏石甘合劑質(zhì)量的有效手段。

1　儀器與試驗(yàn)

1.1儀器美國(guó)LabAlliance高效液相色譜儀，分析之星工作站；色譜柱：Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；Sartorius BP190S、BP211D型電子天平。

1.2試藥甘草酸銨對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110731-200306，供含量測(cè)定用，以甘草酸計(jì)含量為91.23%)，甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司)，水為純化水(自制)，醋酸銨、冰醋酸均為分析純(天津金匯太亞化學(xué)試劑有限公司)；麻杏石甘合劑(由天津市北辰區(qū)中醫(yī)醫(yī)院提供，批號(hào)20121224、20121226、20121228，規(guī)格：100 ml/瓶)。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件的確定

2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定《中國(guó)藥典》2010年版一部有關(guān)甘草酸含量測(cè)定方法，大多數(shù)采用250 nm[1]波長(zhǎng)檢測(cè)。采用甘草酸銨對(duì)照品的甲醇稀溶液在波長(zhǎng)為200～400 nm進(jìn)行紫外光譜掃描，在252 nm處有最大吸收峰。故采用《中國(guó)藥典》檢測(cè)甘草酸常用波長(zhǎng)250 nm為本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2流動(dòng)相的考查本品采用了甲醇-0.2 mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸[1，2](62∶37∶1)，參照《中國(guó)藥典》2010年版一部啟脾丸項(xiàng)下的規(guī)定及相關(guān)文獻(xiàn)，選擇和《中國(guó)藥典》相同的流動(dòng)相甲醇-0.2 mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸(62∶37∶1)作為本實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相。

2.1.3色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 參照《中國(guó)藥典》2010年版一部有關(guān)含量測(cè)定方法并根據(jù)以上考查制定了本含量測(cè)定方法的色譜條件，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.2 mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸(62∶37∶1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm，柱溫：40 ℃，流速：0.9 ml/min，理論塔板數(shù)按甘草酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取甘草酸銨對(duì)照品18.66 mg，置100 ml量瓶中，加60%甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液，精密量取對(duì)照品貯備液3 ml，置10 ml量瓶中，加60%甲醇制成每1 ml含甘草酸0.051 07 mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備精密量取供試品(20121224)3 ml，置25 ml量瓶中，加60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按照處方比例，取除去炙甘草的其他藥味，按制備工藝制得陰性樣品。按上述“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，進(jìn)樣20 μl進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密吸取甘草酸銨對(duì)照品貯備液(0.1866 mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml，分別置10 ml的量瓶中，加60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，分別精密吸取20 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，以甘草酸對(duì)照品進(jìn)樣量(μg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，結(jié)果甘草酸在17.02～85.12 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好,其回歸方程為Y=12 473.6X-21 219.6(r=0.999 9，n=6)。

2.4精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液(0.051 07 mg/ml)20 μl，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定甘草酸峰面積，測(cè)得甘草酸峰面積的RSD為0.66%，符合要求。

1.甘草酸

2.5重現(xiàn)性試驗(yàn)取樣品(批號(hào)20121224)按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液5份，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，精密量取供試品溶液20 μl進(jìn)樣，分別計(jì)算甘草酸含量，樣品中甘草酸平均含量為0.5054 mg/ml，RSD為0.61%，符合要求。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取供試品溶液(批號(hào)20121224)20 μl，于0、2、4、6和8 h進(jìn)樣，測(cè)定甘草酸含量，其RSD為0.43%，結(jié)果表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7回收率試驗(yàn) 精密量取甘草酸銨對(duì)照品貯備液(0.1866 mg/ml)9份，每份5.0 ml，分別置25 ml量瓶中，各精密加入已測(cè)知含量的樣品(批號(hào)20121224)0.5、1和1.5 ml，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為102.1%，RSD為0.39%。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.8樣品的測(cè)定 取3個(gè)批號(hào)的供試品(20121224、20121226、20121228)，按照“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，進(jìn)樣量20 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定甘草酸含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1　回收率測(cè)定結(jié)果

表2　樣品測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1提取溶劑的考查 本品采用60%甲醇作溶劑，參照《中國(guó)藥典》2010年版一部胃舒寧顆粒項(xiàng)下的規(guī)定，選擇和《中國(guó)藥典》相同的溶劑60%甲醇作為本品的溶劑。

3.2取樣量考查 取樣品(20121224)，分別精密量取1、3和5 ml至25 ml量瓶中，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過(guò)，取續(xù)濾液，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定樣品中甘草酸含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　不同取樣量測(cè)定結(jié)果

上述結(jié)果顯示，取樣量為3 ml時(shí)甘草酸溶出更完全，故選擇3 ml為本實(shí)驗(yàn)取樣量。

3.3溶劑用量考查 取上述同一批號(hào)樣品，分別精密量取3 ml至25 ml和50 ml量瓶中，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定樣品中甘草酸含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　不同溶劑用量測(cè)定結(jié)果

上述結(jié)果顯示，溶劑用量25 ml甘草酸溶出更完全，故溶劑用量選擇25 ml。

3.4不同色譜柱及不同儀器對(duì)含量測(cè)定的影響

3．4.1不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定的影響 取樣品溶液，使用美國(guó)LabAllianceTM高效液相色譜儀，分別使用 Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)與Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，按照“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定樣品中甘草酸含量。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5　不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定的影響(n=2)

測(cè)定結(jié)果顯示，不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定的影響很小。

3．4.2不同儀器對(duì)含量測(cè)定的影響取樣品溶液，使用Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，分別使用美國(guó)LabAlliance高效液相色譜儀和日本島津LC-2010A高效液相色譜儀，按照“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定樣品中甘草酸含量。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6　不同儀器對(duì)含量測(cè)定的影響(n=2)

結(jié)果顯示，采用相同色譜柱不同儀器對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很小。

3.5本方法簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性好、重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于麻杏石甘合劑的質(zhì)量控制和分析。

1中國(guó)藥典[S].一部.2010：376

2馬玉彪，彭鐮心，鄒亮，等. 根痛平膠囊中甘草酸的含量測(cè)定[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)，2011,37(4)：625