高 潔

（國家副食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，北京 100070）

醬油工業(yè)為了提高產(chǎn)量降低成本，常常將水解蛋白應(yīng)用于醬油生產(chǎn)。但水解蛋白生產(chǎn)過程中往往會產(chǎn)生有害物質(zhì)3-氯-1，2丙二醇（3-chloro-1,2-propanediol,3-MCPD）[1-2]，其是一種嚴重危害健康的化合物[3-4]，研究發(fā)現(xiàn)，該物質(zhì)會引起大鼠肝、腎臟、甲狀腺等器官癌變[5]。據(jù)調(diào)查，市場上調(diào)味品中的3-MCPD殘留問題不容樂觀[6-7]。

目前調(diào)味品中的3-MCPD的檢測方法有GC配電子俘獲檢測器官（electron capture detector，ECD）法[8-10]，GC配火焰離子檢測器（flame ionization detector，F(xiàn)ID)法[11-12]，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC/MS）法[13-18]及其他一些方法[19]。但是由于調(diào)味品基質(zhì)復(fù)雜，有時候會嚴重影響檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。本實驗采用氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（GC/MS/MS）法檢測調(diào)味品中的3-MCPD含量，能夠有效消除基質(zhì)的干擾，實現(xiàn)了快速、準(zhǔn)確、靈敏的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

玻璃層析柱（長200mm，內(nèi)徑25mm；帶活塞）、正己烷（重蒸）、無水乙醚、乙酸乙酯（分析純），淋洗溶液（正己烷∶無水乙醚=9∶1，v/v）、七氟丁酰咪唑：（東京化成）公司；硅藻土RNT為填充料：德國（Merck）公司，無水硫酸鈉（650℃灼燒4h）、3-氯-1，2丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品：比利時（Acros）公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Varian450GC/320MS氣質(zhì)聯(lián)用儀配有三重四級桿：美國瓦里安有限公司；CS-H1型旋渦混合器：北京博勵陽科技公司；05P-21型離心機：日本日立公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理方法

稱取4g左右樣品，加入5g提取填料混合均勻，裝入已填入1cm高的無水硫酸鈉及5g填料的層析柱中，壓實后再加入1cm高的無水硫酸鈉。先用80mL正己烷乙醚（9∶1）溶液淋洗，再用150mL乙醚洗脫。收集洗脫液并濃縮至近干，置換為正己烷溶液。加七氟丁酰咪唑50μL于70℃衍生30min，取出冷卻、定容，加3mL水旋渦，取上層清液至樣品瓶中，加約0.3g無水硫酸鈉，待測。

1.3.2 GC/MS/MS條件

色譜柱：VF-5MS，30m×0.25mm，膜厚0.25μm；程序升溫60℃保持1min，以5℃/min升溫至90℃保持1min，以25℃/min升溫至280℃保持5min；自動進樣器：無分流進樣1μL；載氣：高純氦氣；恒流模式1.0mL/min；離子源230℃，離子電離（electron ionizaton，EI）模式；電子能量70eV；掃描方式為多離子監(jiān)測模式。

1.4 計算公式

樣品中3-MCPD的含量（X）以mg/kg表示，按下式計算：

式中：X為樣品中3-MCPD 含量，mg/kg；C為試樣中3-MCPD質(zhì)量濃度，μg/mL；V為試樣最終定容體積，mL；M為樣品質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

根據(jù)3-MCPD衍生物的全掃描質(zhì)譜圖，一級質(zhì)譜中目標(biāo)化合物的特征離子有253m/z，289m/z，453m/z。其中253m/z的強度最大，453m/z的質(zhì)荷比最大，初步選擇這2種離子作為二級質(zhì)譜的母離子。根據(jù)253m/z、453m/z的二級質(zhì)譜，253m/z的子離子選擇169m/z，225m/z，453m/z的子離子選擇239m/z，169m/z。研究不同碰撞誘導(dǎo)電離（collision induced dissociation，CID）碰撞電壓下的子離子強度，質(zhì)譜條件選擇為253＞225（-6V），253＞169（-15V），453＞239（-8V），453＞169（-18V）。

不同碰撞電壓條件下子離子的強度見圖1。

圖1 碰撞能量對離子強度的影響Fig.1 Effect of different collision energy on ions intensity

2.2 基質(zhì)背景的影響

醬油的基質(zhì)很復(fù)雜，衍生化之后產(chǎn)生了很多干擾雜質(zhì)。比較實際樣品中加標(biāo)的色譜圖可見，選擇453m/z作為母離子能夠比較好的消除基質(zhì)的干擾，圖2和圖3分別是以253m/z和453m/z作為母離子時的樣品加標(biāo)色譜圖，目標(biāo)物質(zhì)的出峰時間為9.4min。

圖2 253m/z作為母離子時的樣品加標(biāo)色譜圖Fig.2 chromatograms of a sample spiked with 3-chloro-1,2-propandiol with 253m/z as the parention

2.3 方法評價

以169m/z作為定量離子，在0.01μg/mL～1.00μg/mL范圍內(nèi)，測得線性方程為y=5.22×106x-5.43×104，相關(guān)系數(shù)為r=0.99926，檢出限為0.004mg/kg，3個加標(biāo)水平的回收率和變異系數(shù)見表1。

圖3 453m/z作為母離子時的樣品加標(biāo)色譜圖Fig.3 Chromatograms of a sample spiked with 3-chloro-1,2-propandiol with 453m/z as the parention

表1 回收率和變異系數(shù)Table 1 Recoveries and variation coefficient

從表1可知，平均回收率在91.5%～102.0%，變異系數(shù)在2.31%～9.62%，說明該檢測方法可行。

3 結(jié)論

采用氣相色譜二級質(zhì)譜，選擇453m/z為母離子，169m/z、239m/z為子離子檢測調(diào)味品中的3-MCPD，有效，減小了基質(zhì)干擾，提高了檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度。通過實際樣品加標(biāo)回收實驗表明該方法具有良好的線性、回收率和變異系數(shù)，穩(wěn)定可靠。

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