馮廣青　吳瓊

【摘要】 目的 研究單側輸尿管梗阻后，實驗大鼠內皮素水平以及腎功能等指標的變化，從而探討與內皮素相關的腎間質纖維化的發(fā)生機制及和絡泄?jié)岱綄ρ泳從I間質纖維化的作用。方法 實驗研究采用單側輸尿管梗阻（UUO）誘導腎間質纖維化的物模型，將48只Waster大鼠隨機分為假手術組（Sham）、模型組（UUO）、和絡泄?jié)岱街委熃M（UUO+REL），在術后3d、10d、20d、30d每組各取4只處死，處死前收集空腹血清，尿液標本，檢測血漿內皮素水平及肌酐、尿素氮水平和凝血機制，以及尿蛋白水平。結果 術后3天，各組大鼠血尿素氮、肌酐水平比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；術后10天，UUO組大鼠血尿素氮、肌酐升高，與相應假手術組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.01），手術后3天各組大鼠的內皮素水平無顯著差異。結論 內皮素（ET）參與了單側輸尿管梗阻大鼠腎間質纖維化的發(fā)生發(fā)展全過程，和絡泄?jié)岱侥苡绊慐T的代謝，能夠降低ET水平，改善腎功能并延緩腎間質纖維化的進展。

【關鍵詞】 內皮素；慢性腎功能衰竭；和絡泄?jié)岱?/p>

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.005 文章編號：1004-7484（2013）-09-4790-02

1 資料與方法

1.1 實驗材料 實驗動物：健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，6-8周齡，體重180-220g，平均體重200g，由青島市動物研究所提供。于室溫23℃，用標準大鼠飼料分籠喂養(yǎng)，每籠4只。自由飲水。12小時交替照明。

1.2 實驗藥品和絡泄?jié)岱?方劑：當歸12g、川芎12g、赤芍12g、白術15g、制大黃10g、六月雪30g、土茯苓30g、海藻15g、葫蘆巴15g。由青島市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制成滅菌濃煎密封制劑，藥物比重為1.10g/L，生藥含量為1.8g/ml。

1.3 儀器和試劑 全自動生化分析儀、722s分光光度計、高速低溫臺式離心機3K30型、可調式微量移液器、恒溫水浴箱、無菌工作臺、天平、臺式離心機、超凈工作臺、代謝籠、照相裝置等均為國產。低溫冰箱、內皮素試劑盒。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗分組 48只大鼠適應性飼養(yǎng)一周后隨機分為Ⅰ組——假手術組（Sham）、Ⅱ組——模型組（UUO）、Ⅲ組——中藥灌胃組（UUO+REL），每組16只。

1.4.2 模型制作及動物處理 參考《現(xiàn)代醫(yī)學實驗動物學》，采用單側輸尿管結扎法（UUO）進行腎間質纖維化模型制備。正常對照組開腹后不結扎輸尿管，直接縫合。REL組在術后第一天開始給予和絡泄?jié)岱綕饪s液1.5ml灌胃，早晚各一次，對照組灌等量生理鹽水。全部大鼠術后均以原方式喂養(yǎng)。術后3、10、20、30天每組各殺4只大鼠。處死前留取24小時尿，腹主動脈穿刺取血檢測血生化指標。

1.4.3 大鼠的處死及標本的采集和處理

1.4.3.1 血液標本 每只大鼠用10%水合氯醛4ml/kg腹腔注射麻醉后，腹腔正中切口打開腹腔，腹主動脈穿刺抽血5ml，分別裝密封試管三只。

1.4.3.2 24小時尿蛋白采集 處死大鼠前一天金屬代謝籠收集24小時尿量，收集前大鼠禁食不禁水。記錄每只大鼠24小時尿總量，取適量（約5ml）用比濁法測定尿蛋白濃度，24小時尿蛋白定量=尿蛋白濃度×24小時尿量。

1.5 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)用（χ±s）表示。應用SPSS12.0軟件包進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用單因素方差分析和q檢驗（Newman-Keuls法）。相關分析采用兩變量間直線相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計意義，P<0.01為差異有顯著性統(tǒng)計意義。

2 結果

2.1 實驗大鼠腎功能變化 術后3天，各組大鼠血尿素氮、肌酐水平比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；術后10天，UUO組大鼠血尿素氮、肌酐升高，與Sham組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.01），隨時間進展血尿素氮、肌酐逐漸升高，REL組血肌酐、尿素氮較UUO組下降（P<0.01），但未降至Sham組水平，見表1。

2.4 實驗大鼠凝血機制變化 手術后3天各組大鼠的APTT水平無統(tǒng)計學差異（P>0.05），術后3天、10天、20天、30天UUO大鼠APTT水平呈遞減態(tài)勢，Sham組則呈現(xiàn)遞增態(tài)勢，但組間對比無統(tǒng)計學差異（P>0.05），REL組大鼠APTT在10天以后相對比Sham組和UUO組縮短（P<0.05），組間對照有統(tǒng)計學差異。FIB檢測數(shù)值顯示UUO組在各個試驗點顯著高于其他兩組（P<0.01）。REL組與UUO組有統(tǒng)計學差異（P<0.05），與Sham組之間無統(tǒng)計學差異（P>0.05），見表4。

3 討論

腎間質纖維化幾乎是各種腎臟疾病進展到終末期腎衰竭的共同途徑和主要病理基礎，內皮素（endothelin，ET）是Yanagisawa等于1988年從豬主動脈內皮細胞培養(yǎng)液中分離出的一種小分子生物活性肽，除了收縮血管作用外，ET還是一個強大的炎癥介質。近年來的研究表明，ET參與了腎間質纖維化的進展過程。生理條件下血漿中ET達到很高水平是不可能的。但試驗證實：發(fā)生腎功能衰竭的動物血漿內皮素、尿內皮素及腎組織中內皮素的含量均有顯著的增高。有人對CRF患者透析前后血漿內皮素水平作了對照，結果有顯著差異。并有人提出ET水平的高低可以作為反映腎功能衰竭病情嚴重性的一個指標。

在治療腎臟病方面：當歸具有防治腎缺血再灌注損傷的作用，以及抗氧化和清除自由基的作用，可提高機體的抗氧化能力，抑制由自由基參與的糖基化終末產物（AGE）的產生，保護超氧化物歧化酶（SOD）活性，使腎臟基質細胞的增值受到抑制，從而抑制了腎小球的損害，減少尿蛋白，保護腎功能。

慢性腎功能衰竭的中醫(yī)臨床分型中，各個類型都存在內皮素升高，也都有血瘀證兼夾存在，提示“久病致瘀，久病入絡”，和絡泄?jié)岱☉撟鳛槟I功能衰竭治療的基本治則和絡泄?jié)岱浇泴嶒炑芯亢团R床驗證，安全有效，能影響ET的代謝，降低ET水平，還能夠改善脂質代謝，改善凝血功能，從多個環(huán)節(jié)實現(xiàn)延緩腎間質纖維化的進展，從而達到改善腎功能的目的。

參考文獻

[1] 周欽.大劑量黃芪注射液對慢性腎功能不全患者血漿、尿液內皮素的影響[J].中國中藥雜志，2001，26（3）：200-202.

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