趙劍等

摘要：目的：優(yōu)選桂黃降脂顆粒的最佳水提工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，以水提物的干浸膏重量、有機(jī)酸、丹參素鈉和橙皮苷的含量為綜合評(píng)分指標(biāo)，多指標(biāo)成分優(yōu)選桂黃降脂顆粒的最佳水提工藝。結(jié)果：桂黃降脂顆粒最佳水提取工藝為：浸泡30 min，加8倍量水，煎煮3次，每次1 h。結(jié)論：該提取工藝客觀可行，穩(wěn)定合理，可為工藝生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：多指標(biāo)成分；正交設(shè)計(jì)；有機(jī)酸；丹參素鈉；橙皮苷；桂黃降脂顆粒

中圖分類號(hào)：R284.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2013）08-0055-04

桂黃降脂顆粒是瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號(hào)（川藥制字Z20080291），主要由山楂、丹參、澤瀉、黨參、陳皮等7味中藥組成。具有益氣化痰，活血化瘀的功效，主治脂肪肝、高脂血癥。處方中山楂為君藥，具有消食化積、活血化瘀的功效，近年來(lái)常用于高血壓、冠心病及高脂血癥，其水溶性成分含有多種有機(jī)酸能提高蛋白酶的活性，促進(jìn)脂肪分解[1]，丹參為臣藥，具有擴(kuò)張冠脈、增加冠脈流量、降低膽固醇、甘油三酯等作用，丹參素為丹參所含專屬性成分，是一種水溶性酚酸，以丹參素鈉的形式存在于天然藥物中，具有抗血小板聚集和解聚的作用[2]。陳皮為佐藥，具有理氣和胃、消積導(dǎo)滯的功效，橙皮苷為其主要有效成分，是一種二氫黃酮苷類成分，易溶于熱水中，具有增強(qiáng)毛細(xì)血管韌性，降低膽固醇等作用[1]。鑒于中藥成方制劑中藥味數(shù)多、成分復(fù)雜，根據(jù)處方中中藥所含化學(xué)成分及其理化性質(zhì)，結(jié)合處方中的“君、臣、佐、使”的中醫(yī)藥理論，以干浸膏、有機(jī)酸、丹參素鈉和橙皮苷的含量為綜合評(píng)分指標(biāo)，多指標(biāo)優(yōu)選桂黃降脂顆粒水提的最佳工藝。

1儀器與材料

SPD-20A高效液相色譜儀（美國(guó)科學(xué)系統(tǒng)公司）；UltimateTM C18鍵合硅膠柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；QP-01真空泵；JPCT0328超聲儀，NRB17S3W電冰箱（日本松下）；ZK072型電熱真空干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠）；JA203H電子天平（常州幸運(yùn)電子）；橙皮苷（購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110721-200912，供含量測(cè)定用）；丹參素鈉（購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110855-200809，供含量測(cè)定用）；山楂、丹參、陳皮、等7味中藥購(gòu)于瀘州市寶光中藥飲片公司，經(jīng)瀘州市藥檢所中藥室袁常珍主任鑒定，均符合2010版《中國(guó)藥典》項(xiàng)下規(guī)定；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純；純凈水（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室）；桂黃降脂顆粒（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室）。

2方法與結(jié)果

2.1水提工藝優(yōu)選 山楂、丹參、陳皮等7味中藥采用加水煎煮法提取有效成分，以浸泡時(shí)間、加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為因素，采用L9（34）正交試驗(yàn)法安排實(shí)驗(yàn)，以干浸膏、提取物中主要有效成分有機(jī)酸、丹參素鈉和橙皮苷的含量為綜合評(píng)分指標(biāo)，多指標(biāo)成分優(yōu)選最佳工藝條件。按處方中山楂、丹參、陳皮等藥材的配比，準(zhǔn)確稱取9份樣品，每份共205 g，按表2中9種工藝條件組合加水煎煮提取，過(guò)濾，合并提取液，濃縮成稠浸膏，備用。

表1正交試驗(yàn)因素水平表L9（34）

水平A：浸泡時(shí)間/minB：加水量/倍C：煎煮時(shí)間/hD：煎煮次數(shù)/次13061126081.5239010232.2干浸膏收率的測(cè)定取樣品稠浸膏，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，60 ℃減壓干燥至恒重后，精密稱定，計(jì)算干浸膏收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3有機(jī)酸含量的測(cè)定取樣品干浸膏約1 g，精密稱定，加純化水100 mL，超聲20 min，待干浸膏全部溶解后，過(guò)濾，精密量取濾液10 mL，加純化水至100 mL，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定，即得，每1 mL氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于6.404 mg枸櫞酸，結(jié)果見(jiàn)表2[3]。

2.4丹參素鈉含量測(cè)定

2.4.1色譜條件 固定相：Inertsil ODS-SPC18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-0.1%冰醋酸（2：98），二元梯度洗脫，流速：1 mL·min-1，溫度：40 ℃，波長(zhǎng)：280 nm，理論板數(shù)按丹參素鈉計(jì)算應(yīng)不低于3000[4～5]。見(jiàn)圖1、2、3。

2.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取的丹參素鈉對(duì)照品0.0083 g，置25 mL棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容，即得對(duì)照品溶液。

2.4.3供試品溶液的制備取樣品干浸膏約2 g，精密稱定，置105 ℃干燥至恒重的磨口錐形瓶?jī)?nèi)，加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲40 min，取出，冷卻至室溫，用50%甲醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4.4線性范圍的考察精密吸取丹參素鈉對(duì)照品溶液（濃度為0.332 mg·mL-1）2.5，5，10，15，20 μL，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品量對(duì)色譜峰面積進(jìn)行線性回歸，結(jié)果丹參素鈉的回歸方程為Y=106X-649883，r=0.999 5（n=5），線性范圍為0.83 ～ 6.64 μg。

2.5橙皮苷含量測(cè)定

2.5.1色譜條件固定相：Inertsill ODS-SP C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-2%的乙酸水溶液（39：61）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；溫度：40 ℃；流速：1.0 mL·min-1。在上述色譜條件下，橙皮苷與其他成分得到了很好的分離，理論板數(shù)以橙皮苷計(jì)不低于2000[6～8]。見(jiàn)圖4、5、6。

2.5.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品8.0 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。

2.5.3供試品溶液的制備 取樣品干浸膏約0.5 g，精密稱定，置105 ℃干燥至恒重的磨口錐形瓶?jī)?nèi)，加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲40 min，取出，冷卻至室溫，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.5.4線性關(guān)系精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液（濃度為0.16 mg·mL-1）2.5、5、10、15、20 μL注入液相色譜儀，測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，橙皮苷的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=38571X+16309，r=0.9995（n=5）。表明橙皮苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0.4～3.2μg之間與峰面積線性關(guān)系良好。

2.6方法學(xué)考察

2.6.1精密度考查取丹參素納，橙皮苷對(duì)照品溶液，分別按照各自液相方法連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，測(cè)定峰面積，RSD分別為1.32%，0.87%，表明儀器精密度較高。

2.6.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別于0，1，2，4，8 h各進(jìn)樣1次，每次10 μL，測(cè)定峰面積，RSD分別為1.56%，0.94%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一供試品溶液6份，分別按照2.4.1和2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD為1.06%，1.42%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6.4加樣回收試驗(yàn)稱取6份已知含量的供試品溶液，分別精密加入丹參素納，橙皮苷對(duì)照品溶液按2.4.3和2.5.3項(xiàng)方法制備供試品溶液，按照2.4.1和2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算丹參素鈉的平均回收率為97.22%，RSD為1.17%，橙皮苷的平均回收率為98.55%，RSD為0.63%。

2.6結(jié)果正交實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果見(jiàn)表2，結(jié)果方差分析見(jiàn)表3。

3討論

3.1桂黃降脂顆粒主要由山楂、丹參、澤瀉、黨參、陳皮、蒲黃郁金等7味中藥組成。其中山楂、丹參、陳皮所含水溶性成分中的有機(jī)酸、丹參素鈉、橙皮苷等成分，在臨床應(yīng)用過(guò)程中發(fā)揮主要的治療作用，從藥效學(xué)方面來(lái)考慮，需充分提取其有效成分，故本文以多指標(biāo)研究方法對(duì)桂黃降脂顆粒的水提工藝進(jìn)行探討。

3.2丹參所含丹參素為其專屬性成分，是一種水溶性酚酸，以丹參素鈉的形式存在于天然藥物中，故本文以測(cè)定丹參素鈉的含量作為考察指標(biāo)。

3.3本試驗(yàn)根據(jù)各藥味的理化性質(zhì)結(jié)合臨床療效，篩選符合工藝的實(shí)際的多個(gè)指標(biāo)成分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并采用全概率公式評(píng)分法結(jié)合正交設(shè)計(jì)優(yōu)化水提工藝，因此較單指標(biāo)分析額的傳統(tǒng)方法更全面、科學(xué)、實(shí)用。

3.4本試驗(yàn)采用多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)選桂黃降脂顆粒的水提取工藝，確定其最佳工藝為，浸泡30 min，加8倍量水，煎煮3次，每次1 h。同時(shí)采用高效液相色譜法測(cè)定丹參素鈉和橙皮苷含量，分離效果好，操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，測(cè)定結(jié)果為優(yōu)選桂黃降脂顆粒水提工藝提供參考依據(jù)。為桂黃降脂顆粒進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（收稿日期：2013-05-02）