溫穎婉

【摘 要】目的：采用高效液相色譜法測(cè)定地錦草分散片中槲皮素的含量。方法：色譜柱PhenomenexLunaC18（4.6mm×250mm，5μm），柱溫35℃，流動(dòng)相為甲醇-1g/L磷酸溶液（50：50），流速1.0mL/min，檢測(cè)波長360nm。結(jié)果：地錦草分散片中槲皮素的的線性范圍為44.8～448.0ng，加樣回收率為99.2%（n=6）。結(jié)論：高效液相色譜法測(cè)定地錦草分散片中槲皮素的含量，具有分離效能高、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可用于地錦草分散片中槲皮素的含量測(cè)定和產(chǎn)品質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】地錦草分散片；槲皮素；測(cè)定方法；高效液相色譜法

地錦草分散片收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第十冊(cè)中，是由地錦草提取制成的單方制劑。地錦草主要含黃酮類成分，可用于治療細(xì)菌性痢疾、腸炎和秋季腹瀉。地錦草為大戟科植物地錦或斑地錦的干燥全草，具有抗氧化、抗菌、止血、抑制腎功能損傷等作用[1]，現(xiàn)代藥理研究表明地錦草中槲皮素成分具有抗菌、消炎、抗病毒、抗氧化作用，是本方發(fā)揮療效的主要有效成分之一。

1.藥品、試劑與儀器

地錦草分散片，由河北安國藥業(yè)集團(tuán)有限公司（批號(hào)066303）提供[1]。槲皮素對(duì)照品，購自中國食色譜純，德國Merck公司產(chǎn)品；水為超純水，臨用新制；其他試劑為分析純。Waters2695高效液相色譜儀、2487紫外檢測(cè)器，均為美國Waters公司產(chǎn)品；PhenomenexLunaC18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；Milli-QAdvantageA10型超純水機(jī)，默克密理博公司產(chǎn)品。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱PhenomenexLunaC18（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-1g/L磷酸溶液（50：50）為流動(dòng)相；柱溫35℃；檢測(cè)波長為360nm；進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按槲皮素計(jì)算應(yīng)不低于2000，色譜圖見圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取槲皮素對(duì)照品約10mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5mL，置50mL量瓶中，加800g/L甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得[2]。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，過3號(hào)篩；取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入800g/L甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量；加熱回流1h，放冷，再稱定重量；用800g/L甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液10mL，加入鹽酸1mL，置水浴中回流1h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶；加800g/L甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

分別吸取精密取槲皮素對(duì)照品溶液（22.4mg/L）2，5，8，10，15，20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積[3]。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為Y=4477X-67655（r=0.9996）。結(jié)果表明，槲皮素在44.8～448.0ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果：槲皮素峰面積的RSD為1.0%（n=6）。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10μL，每2h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果：槲皮素峰面積的RSD為1.6%（n=6）。結(jié)果表明，10h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果：槲皮素含量的RSD為1.9%（n=6）。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好[4]。

2.8 回收率試驗(yàn)

取同一批號(hào)已知含量供試品（批號(hào)為060302，槲皮素含量為0.5294mg/g），除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，分別精密加入槲皮素對(duì)照品溶液（10.75mg/L）25mL，按照2.3項(xiàng)下方法制備加樣回收供試品溶液，測(cè)定槲皮素含量，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果：平均回收率為99.2%，RSD為0.9%（n=6）。結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確性較好。見表1。

2.9 樣品測(cè)定

按2.3項(xiàng)下方法制備樣品溶液，測(cè)定3批地錦草片中槲皮素的含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

3.討論

通過試驗(yàn)測(cè)定，地錦草中主要含黃酮類成分，考察了700g/L乙醇、800g/L甲醇、甲醇等溶劑，結(jié)果800g/L甲醇提取效率較高，且后續(xù)處理方便，因此采用800g/L甲醇作為提取溶劑；對(duì)比了超聲法與回流法兩種提取方法，結(jié)果二者無顯著差異；比較了不同加酸量、水解時(shí)間，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，選用加酸1mL，加熱水解1h來制備供試品溶液。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì). 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)： 中藥成方制劑： 第十冊(cè)[S].1995： 51.

[2] 孟淑君，熊凌. 地錦草有效成分提取工藝研究. 中華實(shí)用醫(yī)學(xué)，2002，20（4）：75-76.

[3] 鄧楠，鄧銀華.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定地錦草中4種黃酮類成分[J].中國藥房，2009，20（ 18） ： 1403 - 1404.

[4] 柏雪蓮，宓偉，王志強(qiáng)，等.地錦草體外抑菌作用研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18（ 11） ： 2747.