楊 德周 明郭 鵬李 露薛淑靜葉麗秀

（1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所，武漢 430064；2.湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心，武漢 430064）

不同濃度乙醇對靈芝功能成分浸出率的影響*

楊 德1周 明1，2**郭 鵬1李 露1薛淑靜1葉麗秀1

（1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所，武漢 430064；2.湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心，武漢 430064）

借助硅膠薄層平板色譜測定方法探索了不同濃度乙醇溶液對靈芝多糖和三萜溶出效果的影響。結(jié)果表明，三萜類成分溶出率與乙醇濃度呈正相關(guān)，75°乙醇浸提液中三萜成分含量是30°乙醇浸提液的2倍；浸提液中多糖含量隨乙醇濃度提高而降低，30°乙醇浸提液中多糖含量是75°乙醇浸提液的2.9倍。

乙醇濃度；赤靈芝；溶出效果；薄層色譜

靈芝（Ganoderma lucidum）古稱瑞草，靈芝屬目前已知約有100多種，分布最廣的為赤芝，其次為紫芝。靈芝在我國有著悠久的藥用歷史，藥理成分非常多，其有效成分可分為十大類，包括靈芝多糖，靈芝多肽，三萜類，16種氨基酸（其中含7種人體必需氨基酸），蛋白質(zhì)，甾類，甘露醇，香豆精苷，生物堿，有機(jī)酸（主含延胡索酸），以及微量元素Ge、Fe、Mn、Zn等[1，2]。靈芝對人體具有雙向調(diào)節(jié)作用，所治病種包括心腦血管、消化、神經(jīng)、內(nèi)分泌、呼吸、運(yùn)動等各個系統(tǒng)疾病，尤其對腫瘤、肝臟病變、失眠、衰老的防治作用十分明顯。最新研究表明，靈芝還具有抗疲勞、美容養(yǎng)顏、防治艾滋病等功效。

“泡酒”是民間常用的靈芝食用方法，但對靈芝功能成分在乙醇溶液中溶出情況的研究較少，本文以靈芝和不同濃度乙醇溶液為原料，研究靈芝功能成分溶出規(guī)律，為靈芝產(chǎn)品研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 靈芝為段木赤靈芝，產(chǎn)自本單位靈芝基地；其他試劑均為分析純。

1.2 試驗方法 不同濃度乙醇溶液配制：利用無水乙醇和蒸餾水配置10°、20°、30°、40°、45°、 50°、60°、70°、75°等9種乙醇溶液。酒精度用酒精計標(biāo)定，密封備用。功能成分浸提方法：靈芝粉碎后過80目篩，稱取10.0 g靈芝粉按料液比1∶20加入配好的不同濃度乙醇溶液，密封以防止乙醇揮發(fā)。在室溫下浸提，在浸提的24 h、48 h、120 h、168 h分別取樣，測定不同溶液中多糖和三萜含量；同時用蒸餾水和無水乙醇以相同料液比浸提靈芝，測定溶液中多糖和三萜成分含量。

1.3 測定方法

（1）靈芝多糖測定采用苯酚-硫酸法。吸取0.5 mL樣液，用3倍體積的95％的乙醇混合，靜置一夜沉淀粗多糖，然后于10 000 r/min離心10 min，棄去上清液。不溶物用1.5 mL的蒸餾水洗滌溶解，待測。吸取0.1 mL待測樣品，用苯酚-硫酸法測定樣品中的多糖含量，計算靈芝多糖提取率。

（2）靈芝三萜測定采用香草醛比色法。吸取樣液0.3 mL，置于沸水中揮發(fā)溶劑，加入5％香草醛–冰乙酸0.4 mL，高氯酸1.6 mL，迅速混勻，再將試管置于70 ℃水浴鍋中加熱15 min，取出用冰水冷卻至室溫，加8 mL乙酸乙酯，迅速混勻，在548 nm處測定吸光值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出浸提液中三萜成分的含量，并計算出靈芝三萜提取率。

（3）總色差測定。采用色差計法，以雙蒸水為空白對照，不同浸提液色差采用ΔL、Δa、Δb指標(biāo)表示，總色差為

試樣與標(biāo)樣的L、a、b之差，用ΔL、Δa、Δb表示；ΔE表示總色差。ΔL為正，說明試樣比標(biāo)樣淺；為負(fù)，說明試樣比標(biāo)樣深。Δa為正，說明試樣比標(biāo)樣紅（或少綠）；為負(fù)，說明試樣比標(biāo)樣綠（或少紅）。Δb為正，說明試樣比標(biāo)樣黃（或少藍(lán)）；為負(fù)，說明試樣比標(biāo)樣藍(lán)（或少黃）。ΔE為樣品的總色差，ΔE數(shù)值越大，說明色差越大。

（4）靈芝酒活性成分硅膠色譜。吸取供試樣品3 μL，分別點于同一硅膠薄層板上，以石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸=15∶15∶1為展開劑，展開、取出、晾干，置紫外燈（240 nm、365 nm）下檢視。

2 結(jié)果分析

2.1 浸提時間和乙醇濃度對靈芝酒中多糖和三萜含量的影響 如表1所示，浸提時間不同靈芝酒中三萜含量變化不大，浸提24 h與168 h比較無顯著差異；乙醇濃度對三萜含量影響較大，隨乙醇濃度提高，乙醇溶液中三萜含量不斷提高，75°乙醇溶液浸提液中三萜含量是30°乙醇溶液浸提液的2倍。

如表2所示，浸提時間不同靈芝酒中多糖含量變化也不大，浸提24 h和168 h無顯著差異；乙醇濃度對多糖含量影響較大，隨乙醇濃度提高，乙醇溶液中靈芝多糖含量降低，30°乙醇溶液浸提液中三萜含量是75°乙醇溶液浸提液的2.3倍。

2.2 不同濃度乙醇浸提靈芝色度的變化 由表3可知，不同乙醇濃度，對靈芝酒色度的影響較為明顯，在Lab色度系統(tǒng)中，ΔL值變小，表明乙醇濃度越大，顏色變暗；同時Δa由負(fù)值變?yōu)檎?，Δb值不斷增大，表明顏色向紅色和黃色轉(zhuǎn)變。隨乙醇濃度增大總色差增大，顏色加深。

2.3 靈芝酒中活性成分色譜測定 薄層板色譜結(jié)果表明（圖1、圖2），在紫外燈檢視下，乙醇濃度越高顯示的條帶數(shù)量越多，30°浸提液中只有2個條帶，60°浸提液中有5個條帶，表明乙醇濃度提高可提取的成分也增多。

表1 不同浸提時間和乙醇濃度下的三萜提取率

表2 不同浸提時間和乙醇濃度下的多糖提取率

表3 不同濃度乙醇靈芝浸提液色度測定

3 討 論

靈芝多糖和靈芝三萜是靈芝中具有代表性的功能成分，其中，靈芝多糖具有安神、提高免疫力等作用，靈芝三萜具有保肝作用。靈芝多糖屬于糖類物質(zhì)，具有水溶性，而三萜具有醇溶性。因此，將靈芝泡水飲用，僅能溶出靈芝中多糖等水溶性類成分，而將靈芝泡酒特別是高度酒能夠?qū)㈧`芝中醇溶性成分溶出。本研究發(fā)現(xiàn)，無論是泡酒或者泡水，靈芝中有效成分都不能被充分利用。

圖1 紫外365 nm檢視圖

圖2 254 nm檢視圖

研究表明，三萜類成分溶出率與乙醇濃度正相關(guān)，75°乙醇浸提液中三萜成分含量比30°乙醇浸提液高2倍；浸提液中多糖含量隨乙醇濃度提高而降低，30°乙醇浸提液中多糖含量是75°乙醇浸提液的2.9倍。隨浸提液乙醇度提高，浸提液（靈芝酒）顏色加深，在Lab色度系統(tǒng)中，隨乙醇濃度提高靈芝酒透明度（ΔL）降低，紅色（Δa）和黃色（Δb）部分加強(qiáng)，總色度提高；薄層板色譜結(jié)果表明，紫外燈檢視下，乙醇濃度越高顯示的條帶清晰度增強(qiáng)，條帶數(shù)量增多，30°浸提液中只有2個條帶，70°浸提液中有5個條帶。因此，在日常生活中食用靈芝，建議先泡水，再泡高度酒，同時多泡幾遍方能充分發(fā)揮靈芝作用。

[1] 鮑克忠，張文俊.靈芝研究進(jìn)展[J].中國保健，2007, 15(19): 8-9.

[2] 趙繼頂. 中國靈芝新編[M]. 北京: 科學(xué)出版社，1989.

“十二五”國家科技支撐計劃（2012BAD36B05）；湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心農(nóng)產(chǎn)品加工分中心（2013-620-007-001）；湖北省公益性科技研究項目（2012DBA18001）。

楊德（1981— ），男，助理研究員，研究方向為食藥用菌加工。

**通訊作者：周明（1954— ），男，湖北武漢人，研究員，研究方向為農(nóng)產(chǎn)品加工與食用菌及其功能食品。