高巖

【摘 要】目的 研究絞股藍(lán)總皂苷的提取工藝。方法 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以絞股藍(lán)總皂苷提取量為考察指標(biāo)，對(duì)影響絞股藍(lán)總皂苷提取工藝的因素進(jìn)行了優(yōu)選。結(jié)果 提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)提取效果有顯著影響，乙醇用量的影響不顯著。結(jié)論 絞股藍(lán)總皂苷的最佳提取工藝為：藥材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2 h。

【關(guān)鍵詞】絞股藍(lán) 提取工藝

【中圖分類號(hào)】0652【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5158（2013）02-0341-01

絞股藍(lán)（Gynostemma）為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生蔓生草本植物，主要含有皂苷、黃酮、多糖，還含有人體必須的多種氨基酸、維生素和微量元素等成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，絞股藍(lán)具有抑制腫瘤、抗衰老、降低血脂、增強(qiáng)免疫力和保護(hù)心臟的作用[1]。絞股藍(lán)總皂苷片作為藥品已經(jīng)上市多年，用于高脂血癥，見(jiàn)有心悸氣短、胸悶肢麻、眩暈頭痛、健忘耳鳴、自汗乏力或脘腹脹滿等心脾氣虛、痰阻血瘀者。為了最大限度提取并保持絞股藍(lán)的有效成分，保證絞股藍(lán)藥材資源的充分利用，提高經(jīng)濟(jì)效益，本研究用正交試驗(yàn)優(yōu)選絞股藍(lán)提取工藝。

一、儀器與試藥

UV-2601型紫外分光光度計(jì)（島津）；人參皂苷Rb1對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。冰醋酸、高氯酸、甲醇、香草醛、正丁醇、石油醚等均為分析純。樣品：七葉絞股藍(lán)莖葉混合物，產(chǎn)于四川臥龍地區(qū)。

二、方法

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品10 mg置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為2.0 mg/mL的儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液50、100、150、200、250μL分別置15mL具塞試管中，揮干甲醇，分別加入新配置的5%香草醛冰醋酸溶液0.4mL、高氯酸1.6mL，搖勻，密塞，置60 ℃水浴中加熱15 min后取出，立即用冷水冷卻至室溫，分別精密加入冰醋酸10 mL，搖勻，作為供試品溶液。另精密量取甲醇溶液250μL置15mL具塞試管中，按照上述操作，到加入冰醋酸10mL搖勻?yàn)橹?，作為空白溶液。取供試品溶液和空白溶液，照分光光度法[《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）附錄ⅦA]試驗(yàn)，在560 nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度。以人參皂苷Rb1的量X（mg）對(duì)吸收度A進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=1.275 7X+0.001 9，r=0. 998 9。結(jié)果表明，當(dāng)取樣量在0.102～0.510 mg范圍內(nèi)時(shí)，人參皂苷Rb1的含量與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

2、絞股藍(lán)總皂苷含量測(cè)定方法

精密稱取絞股藍(lán)總皂苷粉末20 mg置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取200μL置15mL具塞試管中，揮干甲醇后按“2. 1”項(xiàng)下操作，測(cè)定吸收度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出絞股藍(lán)總皂苷的含量。

3、絞股藍(lán)總皂苷的提取工藝

將干燥的絞股藍(lán)藥材粉碎成粗粉，準(zhǔn)確稱量100 g置圓底燒瓶中，用70%乙醇多次回流提取，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥，干燥物用1 000 mL的熱水充分溶解，加入同體積的石油醚萃取3次，將水層溶液用同體積的水飽和的正丁醇反復(fù)萃取，至正丁醇層無(wú)色為止，合并正丁醇提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥，即得。

4、絞股藍(lán)總皂苷提取工藝的正交設(shè)計(jì)

根據(jù)初步試驗(yàn)結(jié)果，選用L9（34）正交試驗(yàn)表，以乙醇用量（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）為試驗(yàn)因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平（見(jiàn)表1）。取樣品，按照正交設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以絞股藍(lán)總皂苷的提取量為考察指標(biāo)，進(jìn)行提取工藝的優(yōu)選。

5、絞股藍(lán)總皂苷提取工藝的穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照正交試驗(yàn)選擇的工藝條件，重復(fù)進(jìn)行絞股藍(lán)總皂苷的提取，并依法測(cè)定絞股藍(lán)總皂苷的含量，評(píng)價(jià)正交試驗(yàn)選擇的工藝條件是否穩(wěn)定。

三、結(jié)果

1、正交試驗(yàn)結(jié)果

按表1的因素水平設(shè)計(jì)，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。由表2中極差的直觀分析法R值可以看出，因素B的極差0.56為最大，說(shuō)明它是A、B、C三因素中對(duì)絞股藍(lán)總皂苷提取影響最大的因素，其次是因素C，它的極差為0.47，這3個(gè)因素對(duì)絞股藍(lán)總皂苷提取的影響由大到小的順序依次為B>C>A。由表3的方差分析結(jié)果可以看出，在α=0.1的水平上，B因素和C因素對(duì)絞股藍(lán)總皂苷提取有顯著性影響，A因素的影響不顯著。結(jié)合表2和表3的分析可以得出最佳工藝條件為A1B3C3，即藥材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2h。

2、絞股藍(lán)總皂苷提取工藝的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

為了驗(yàn)證正交試驗(yàn)優(yōu)選的工藝條件的穩(wěn)定性，稱取3份100 g絞股藍(lán)藥材，分別按照最佳工藝條件A1B3C3操作。合并回流提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥，干燥物用1000mL的熱水充分溶解，加入同體積的石油醚萃取3次，將水層溶液用同體積水飽和的正丁醇反復(fù)萃取，至正丁醇層無(wú)色為止，合并正丁醇提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓干燥濃縮。平行操作，依法測(cè)定絞股藍(lán)總皂苷的含量。

四、討論

本實(shí)驗(yàn)以絞股藍(lán)總皂苷提取量為參考指標(biāo)，對(duì)絞股藍(lán)總皂苷的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選的最佳工藝條件為A1B3C3。按照最佳工藝條件進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果為：絞股藍(lán)總皂苷的平均提取率為（61.3±0.10） g/kg，RSD=1.64%。結(jié)果表明，用該工藝提取有較高的絞股藍(lán)總皂苷提取率，且穩(wěn)定性良好。因甲醇毒性較大，本實(shí)驗(yàn)使用乙醇作為提取介質(zhì)，有利于減少提取液中的雜質(zhì)，增加溶出度；采用水浴恒溫減壓提取，可有效克服高溫使絞股藍(lán)總皂苷變性的問(wèn)題。

參考文獻(xiàn)

[1] 董玉睿 ，絞股藍(lán)總皂苷提取工藝研究，2011，05

[2] 蔣偉哲，周燕文，李錦桀.廣西6種絞股藍(lán)中總皂苷的含量比較[J].藥物鑒定，2006，15（3）：26-27

[3] 潘 峰，劉 迪，黃翠霞.絞股藍(lán)總皂苷的藥理與臨床研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15（5）：674-675