復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032

18F-SFB-Annexin B1探測(cè)化療后腫瘤細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究

鄭宇佳 王明偉 張建平 徐俊彥 楊忠毅 程競(jìng)儀 張勇平 章英劍

復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海200032

背景與目的：誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是腫瘤化療的機(jī)制之一，分子影像能在活體內(nèi)無創(chuàng)、動(dòng)態(tài)地檢測(cè)細(xì)胞凋亡，有助于藥物篩選和療效分析。本研究旨在探討N-琥珀酰亞胺-4-氟苯甲酸酯偶聯(lián)的氟-18-膜聯(lián)蛋白B1(18F-SFB-AnnexinB1)顯像劑早期評(píng)價(jià)化療誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可行性。方法：以SFB作為中間體將18F標(biāo)記到AnnexinB1上。了解18F-SFB-Annexin B1在健康小鼠體內(nèi)的生物分布特性。建立Walker-256荷瘤小鼠模型，隨機(jī)分為兩組，化療組腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX 200 mg/kg，n=3)，對(duì)照組注射等體積無菌0.9%的氯化鈉溶液(n=3)。24 h后靜脈注射18F-SFB-Annexin B1，分別于注射后1、2、3、4 h進(jìn)行PET/CT顯像。比較腫瘤/肌肉放射性攝取率比值(T/M)與原位缺口末端標(biāo)記(TUNEL)染色法測(cè)定凋亡指數(shù)(AI)的關(guān)系。結(jié)果：18F-SFBAnnexin B1放化純度＞95%，生物分布顯示腎臟放射性最高，其次為肝、脾和心肌，顯像劑在體內(nèi)清除速率快?；熃M與對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)T/M比值分別為4.38±0.56、6.75±1.16、6.44±1.12、4.81±0.17和2.35±0.14、2.99±0.55、3.04±0.41、2.33±0.47，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F分別為23.790、16.913、14.046、77.517，P均＜0.05)。TUNEL染色AI分別為(21.00±0.04)%和(8.58±0.01)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21.539，P＜0.05)，且T/M值與AI間有很好的相關(guān)性(r=0.91，P＜0.05)。結(jié)論：18F-SFB-AnnexinB1能早期反映化療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，有望用于活體細(xì)胞凋亡分子顯像和早期療效判斷。

膜聯(lián)蛋白B1；凋亡；放射性核素顯像；化學(xué)療法；療效評(píng)價(jià)

位于細(xì)胞膜內(nèi)層的磷脂酰絲氨酸(PS)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面是凋亡發(fā)生的特征之一，膜聯(lián)蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)是膜聯(lián)蛋白家族中的一員，具有Ca2+依賴性PS結(jié)合活性，可以反映凋亡，在監(jiān)測(cè)神經(jīng)元退行性變、心腦血管缺血-再灌注損傷、移植器官排斥反應(yīng)和評(píng)價(jià)腫瘤治療療效等方面具有良好應(yīng)用前景［1-7］，其中99mTc-AnnexinⅤ已進(jìn)入臨床研究，用于頭頸部腫瘤、淋巴瘤、乳腺癌和肺癌等惡性腫瘤療效評(píng)價(jià)［8-10］，是目前應(yīng)用最多的SPECT細(xì)胞凋亡顯像探針。

Annexin B1是膜聯(lián)蛋白家族新成員，由我國(guó)科學(xué)家孫樹漢教授等首次克隆成功［11］。99mTc-Annexin B1在小鼠胸腺、肝臟凋亡模型中均能良好地顯示凋亡，結(jié)果與原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)一致［12-13］。

本研究在18F標(biāo)記Annexin B1、體外探測(cè)anti-Fas抗體誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡和體內(nèi)探測(cè)家兔腎臟缺血-再灌注損傷凋亡基礎(chǔ)上［14］，進(jìn)一步探討其評(píng)價(jià)腫瘤化療后凋亡的可行性。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性昆明小鼠(n=12，20～25 g)用于生物分布實(shí)驗(yàn)，雄性SD大鼠(n=6，180～200 g)用于荷瘤模型制備。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購(gòu)于復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部。

1.2 儀器和試劑

Annexin B1由上海第二軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室提供。醫(yī)用回旋加速器、正電子藥物合成儀和顯像設(shè)備均為德國(guó)Siemens制造，型號(hào)分別為RDS Eclipse ST、Explora GN和Biograph 16HR，γ計(jì)數(shù)器為上海核所日環(huán)光電儀器有限公司SN-695B型，TUNEL試劑盒、環(huán)磷酰胺(CTX)分別購(gòu)自德國(guó)Merck和Baxter Oncology GmbH公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.118F-Annexin B1標(biāo)記

根據(jù)文獻(xiàn)［15-16］的方法制備。通過耦合劑N-琥珀酰亞胺-4-氟苯甲酸酯(N-succinimidyl-4-fluorobenzoate, SFB)將18F標(biāo)記到Annexin B1上，檢測(cè)其標(biāo)記率、放射化學(xué)純度和穩(wěn)定性。

1.3.2 正常小鼠體內(nèi)生物分布

昆明小鼠隨機(jī)分為4組，每組3只。尾靜脈注射0.74 MBq(0.4 mL)/只18F-SFB-Annexin B1，分別于注射后0.5、1、2、4 h取各主要臟器稱重、放射性計(jì)數(shù)，計(jì)算每克組織百分注射率(%ID/g)。

1.3.3 化療誘導(dǎo)腫瘤凋亡

抽取Walker-256癌肉瘤腹水種鼠淡黃色渾濁腹水，經(jīng)0.9%的氯化鈉溶液1∶1稀釋后，以1 mL/只接種于小鼠右側(cè)腋窩處皮下。待腫瘤長(zhǎng)至直徑1 cm時(shí)，隨機(jī)分為化療組和對(duì)照組，每組各3只?；熃M小鼠腹腔注射CTX (200 mg/kg)，對(duì)照組小鼠注射等體積無菌0.9%的氯化鈉溶液，24 h后進(jìn)行18F-SFB- Annexin B1 PET/CT顯像。

1.3.4 荷瘤大鼠凋亡顯像

荷瘤大鼠尾靜脈注射3.7 MBq(0.5 mL)/只18F-SFB-Annexin B1，10 min后腹腔注射1%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉。分別于注射顯像劑后1、2、3、4 h進(jìn)行PET/CT靜態(tài)顯像。1個(gè)床位/只大鼠，每個(gè)床位采集10 min，圖像分析采用感興趣區(qū)(region of interest，ROI)技術(shù)，取右側(cè)腋窩腫瘤部位和同層面對(duì)側(cè)上肢肌肉組織作為ROI，分別測(cè)量?jī)烧咦畲髽?biāo)準(zhǔn)攝取值(maximum standard uptake value，SUVmax)，計(jì)算腫瘤與肌肉SUVmax之比(即T/M)。

1.3.5 TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡

顯像結(jié)束后立即處死小鼠，取腫瘤組織4%甲醛溶液中固定，24 h后石蠟包埋、切片，每片厚4 μm。每個(gè)樣品取2張相鄰切片按試劑盒說明書進(jìn)行TUNEL法檢測(cè)，以細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒者為凋亡陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野(×200)，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)百分比作為凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)，以AI反映各組腫瘤細(xì)胞凋亡情況。

1.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)均用x±s 表示，組間比較采用one-way ANOVA， T/M值與AI值作直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.118F-SFB-Annexin B1的質(zhì)量

產(chǎn)物標(biāo)記率(27.8 ± 6.9)%(n=5)，放射化學(xué)純度(96.4 ± 1.3)%(n=5)，分別在小牛血清和PBS體系內(nèi)室溫放置3個(gè)半衰期(6 h)，放射化學(xué)純度仍＞90%。

2.2 正常小鼠體內(nèi)生物分布

小鼠18F-SFB-Annexin B1體內(nèi)生物分布情況(表1)。腎臟放射性最高，其次為肝臟、脾臟及心肌，2 h時(shí)上述臟器放射性攝取率均降至較低水平，顯像劑主要經(jīng)泌尿系統(tǒng)排泄。血液中放射性清除速率快，30 min時(shí)即可降至(0.198 4±0.110 0)%ID/g，其余臟器各時(shí)間點(diǎn)放射性攝取率變化不明顯。

2.3 荷瘤大鼠活體顯像

Walker-256癌肉瘤腹水接種成瘤率100%。兩組荷瘤大鼠尾靜脈注射18F-SFB-Annexin B1 1、2、3、4 h后的PET/CT圖像均見腫瘤顯影，內(nèi)部壞死灶因無血液供應(yīng)呈放射性分布缺損(圖1)。化療組1、2、3、4 h的T/M值分別為4.38±0.56、6.75±1.16、6.44±1.12和4.81±0.17，對(duì)照組為2.35±0.14、2.99±0.55、3.04±0.41和2.33±0.47，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F分別為23.790、16.913、14.046、77.517，P均＜0.05)。1 h時(shí)腫瘤顯影最明顯，但軟組織本底亦較高，肝臟、脾臟、腎臟和膀胱清晰顯影，2～3 h時(shí)軟組織本底放射性逐漸清除，T/M值升高，且肝臟、脾臟放射性攝取程度明顯減低，腎臟和膀胱全程均見顯影。

圖 1 荷Walker-256癌肉瘤大鼠PET/CT凋亡顯像Fig. 1 PET/CT apoptosis imaging of Walker-256 bearing rat

表 118F-SFB-Annexin B1在正常小鼠體內(nèi)分布Tab. 1 Biodis ion of18F-SFB-Annexin B1 in normal mice

2.4 TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡

TUNEL染色觀察到化療組小鼠有大片黃染顆粒，表明存在大量凋亡細(xì)胞，對(duì)照組腫瘤亦有較多黃染顆粒，提示存在一定程度的自身凋亡(圖2)。但化療組AI為(21.00±0.04)%，對(duì)照組為(8.58±0.01)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21.539，P＜0.05)。表明經(jīng)CTX處理24 h后，腫瘤細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯增加。T/M比值與AI間有很好的正相關(guān)性(r=0.91，P＜0.05)。

圖 2 腫瘤凋亡TUNEL檢測(cè)Fig. 2 TUNEL detecting

3 討 論

PS外翻發(fā)生在凋亡形態(tài)學(xué)改變之前，為早期檢測(cè)細(xì)胞凋亡提供了有效靶點(diǎn)。傳統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法大都屬于有創(chuàng)檢查，且不能連續(xù)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)凋亡在活體內(nèi)發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過程，難以直觀評(píng)估療效，臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值有限。因此，應(yīng)用現(xiàn)代影像示蹤等技術(shù)進(jìn)行活體監(jiān)測(cè)凋亡已經(jīng)成為生命科學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題［17-21］，其中使用放射性核素標(biāo)記膜聯(lián)蛋白的應(yīng)用報(bào)道最多。

國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)在99mTc-AnnexinⅤ監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡方面做了大量研究,取得很好的結(jié)果，并應(yīng)用于多個(gè)臨床試驗(yàn)中。但SPECT空間分辨率較低、產(chǎn)物體內(nèi)生物分布不理想是其未在臨床廣泛應(yīng)用的重要原因。PET/CT是目前醫(yī)學(xué)影像領(lǐng)域先進(jìn)的分子功能顯像技術(shù)，應(yīng)用正電子核素(如18F)標(biāo)記AnnexinⅤ所獲得的產(chǎn)物進(jìn)行PET顯像可以明顯提高影像質(zhì)量。Murakami等［21］比較18F-SFB-AnnexinⅤ和99mTc-HYNICAnnexinⅤ在正常大鼠和心肌缺血模型大鼠體內(nèi)生物分布發(fā)現(xiàn)，凋亡心肌攝取兩種顯像劑均是正常心肌的3倍，但前者在肝、脾和腎的分布明顯低于后者。本研究中使用［18F］SFB作為標(biāo)記中間體，成功制備18F-SFB-Annexin B1，產(chǎn)物具有良好的體外穩(wěn)定性和放化純度，生物分布結(jié)果顯示，18F-SFB-AnnexinB1在小鼠腎臟分布最高，其次為肝、脾和心肌，但均低于99mTc-Annexin B1［12］。因此，本研究的18F-SFBAnnexin B1可能較99mTc- AnnexinⅤ和99mTc- AnnexinB1更適合應(yīng)用于臨床凋亡顯像，尤其是對(duì)腹部凋亡病灶檢測(cè)更具優(yōu)勢(shì)。此外，本研究靶/本底比值是99mTc-HYNIC-annexinⅤ檢測(cè)荷瘤鼠單次化療24h后靶/本底比值的2～3倍［22］(4.4～6.4 vs 2.1～2.5)，提示18F-SFB-Annexin B1的圖像質(zhì)量較好，凋亡誘導(dǎo)模型也較為理想。

放療、化療早期即可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，早期、無創(chuàng)、動(dòng)態(tài)地觀察治療后凋亡發(fā)生情況，對(duì)腫瘤治療療效監(jiān)測(cè)、臨床個(gè)體化治療方案制定和調(diào)整、預(yù)后判斷和新藥研發(fā)等都有十分重要的意義。考慮到化療可操作性強(qiáng)，本研究采用單次大劑量腹腔給予CTX作為誘導(dǎo)凋亡的方法，結(jié)果提示凋亡誘導(dǎo)較為理想，與對(duì)照組自身的凋亡現(xiàn)象存在差異。

細(xì)胞凋亡發(fā)生后會(huì)出現(xiàn)2個(gè)PS高峰，分別在1～5 h和9～24 h，僅后者與凋亡有關(guān)［7］。因此，選擇在CTX處理24 h后進(jìn)行PET/CT顯像，結(jié)果化療組腫瘤攝取顯像劑程度和TUNEL檢測(cè)陽(yáng)性率均高于對(duì)照組的2倍，且兩者具有良好的正相關(guān)。注射顯像劑1 h后腫瘤顯影最明顯，輪廓清晰(圖1)，但該時(shí)間點(diǎn)肝、脾、腎和膀胱放射性均較高，不利于對(duì)腹盆腔病灶的評(píng)估。對(duì)于腹盆腔以外病灶，該時(shí)間點(diǎn)T/M值較高，可作為局部療效評(píng)價(jià)較為適宜的顯像時(shí)間。隨著藥物在體內(nèi)代謝，放射性在各主要臟器逐漸清除，2 h時(shí)可見肝、脾放射性分布明顯減低，因此該時(shí)間點(diǎn)可以作為腹腔病灶或全身療效評(píng)價(jià)的適宜顯像時(shí)間。本研究進(jìn)行了1～4 h顯像，可見膀胱在顯像全程均顯影，這可能會(huì)影響對(duì)盆腔病灶療效判斷的準(zhǔn)確性。對(duì)此，臨床可以嘗試使用利尿藥物、導(dǎo)尿或者大量飲水等方法加速膀胱內(nèi)放射性尿液的排泄來配合凋亡顯像，從而提高檢出率。

有效的放化療在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)，還可誘發(fā)一定量的腫瘤細(xì)胞壞死，后者細(xì)胞膜的通透性明顯增高，繼而發(fā)生裂解，暴露于細(xì)胞基質(zhì)中的PS亦可以與膜聯(lián)蛋白結(jié)合，從而干擾凋亡顯像效果。Van De Wiele等［7］對(duì)20例頭頸部鱗癌患者進(jìn)行99mTc-HYNIC-rh-annexinⅤ凋亡顯像結(jié)果證實(shí)，只有在缺乏壞死的情況下，腫瘤組織對(duì)顯像劑的攝取才與TUNEL檢測(cè)陽(yáng)性率正相關(guān)。自噬是一種Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡，是一個(gè)細(xì)胞通過溶酶體降解作用清除衰老、受損或多余的線粒體或其他細(xì)胞器的過程［23］，以出現(xiàn)雙層膜結(jié)構(gòu)包裹部分胞質(zhì)和細(xì)胞器的自噬體為特征。某些情況下，誘導(dǎo)自噬可以抑制腫瘤生長(zhǎng)，并致自噬相關(guān)性細(xì)胞死亡，但大多數(shù)情況下，腫瘤細(xì)胞可利用自噬應(yīng)對(duì)缺氧、營(yíng)養(yǎng)匱乏，能清除氧自由基、損傷的線粒體，從而保護(hù)腫瘤細(xì)胞。因此，在凋亡顯像研究中還要注意識(shí)別細(xì)胞壞死和自噬現(xiàn)象。

本研究是在小動(dòng)物PET/CT引進(jìn)之前的結(jié)果，隨著本科室小動(dòng)物顯像設(shè)備的應(yīng)用，18FSFB- Annexin B1在凋亡檢測(cè)中的價(jià)值會(huì)得到更好的體現(xiàn)。另外，大分子蛋白在體內(nèi)的生物分布劣于小分子化合物，我們今后的研究將致力于標(biāo)記Annexin B1蛋白功能片段。

綜上所述，18F-SFB- Annexin B1能夠反映化療誘導(dǎo)下的腫瘤細(xì)胞凋亡，有望成為臨床PET/ CT監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡的分子影像探針。

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《中國(guó)癌癥雜志》舉辦繼續(xù)教育函授班通知

經(jīng)本刊編委會(huì)討論決定，本刊從2013年下半年起舉辦2014年度繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育函授班：

一、2013年第8期起開設(shè)2014年度函授繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育專欄，本年度的主要內(nèi)容包括：胰腺癌、食管癌、胃癌的病理診斷、放射治療及內(nèi)外科治療等。每期刊登1講，共12講，2014年第8期刊登考試試題，第9期刊登正確答案，要求學(xué)員認(rèn)真閱讀講座后答題，并將答案寄至編輯部（復(fù)印無效），考卷經(jīng)專人統(tǒng)一審閱，合格者授予Ⅱ類繼續(xù)教育學(xué)分10分，學(xué)分證書由復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院頒發(fā)。

二、參加對(duì)象：所有正在從事醫(yī)學(xué)專業(yè)技術(shù)工作的衛(wèi)生技術(shù)人員。預(yù)參加者請(qǐng)寫好本人姓名、年齡、性別、職稱、職務(wù)、學(xué)歷、選派單位名稱（地址及郵政編碼）、所在科室、聯(lián)系電話等寄往本編輯部（E-mail：zgaz@chinajournal.net.cn；zgazzz@163.com），同時(shí)通過郵局匯款（單位名稱：《中國(guó)癌癥雜志》編輯部；地址：上海市徐匯區(qū)東安路270號(hào)）的方式支付函授教育費(fèi)，并請(qǐng)?jiān)趨R款備注中注明“2014年度函授繼續(xù)教育”。編輯部收到學(xué)員報(bào)名和函授教育費(fèi)后編號(hào)登記注冊(cè)，隨即寄出注冊(cè)費(fèi)發(fā)票，并按時(shí)寄上每期刊物。即日起開始報(bào)名。

三、學(xué)員每人收費(fèi)200元，贈(zèng)送12期雜志。編輯部依據(jù)學(xué)員報(bào)名登記注冊(cè)編號(hào)、交費(fèi)記錄和考試成績(jī)于2014年10月30日以前寄發(fā)學(xué)分證書。

四、編委會(huì)邀請(qǐng)有關(guān)專家進(jìn)行出題、閱卷工作，并設(shè)專人負(fù)責(zé)。電話：021-64188274；傳真：021-64043766；郵編：200032；聯(lián)系人：王露。歡迎廣大醫(yī)務(wù)人員踴躍參加。

Experimental study on tumor response to chemotherapy with 18F-SFB-Annexin B1

ZHENG Yu-jia, WANG Ming-wei, ZHANG Jian-ping, XU Jun-yan, YANG Zhong-yi, CHENG Jing-yi, ZHANG Yongping, ZHANG Ying-jian (Department of Nuclear Medicine, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China)

ZHANG Ying-jian E-mail: yjzhang111@Yahoo.com.cn

Background and purpose: One of the main mechanism of chemotherapy is inducing tuomr apoptosis. Molecular imaging can allow noninvasively and dynamically monitor tumor apoptosis in vivo, and help to drug screening and therapeutic evaluation. The purpose of this study was to evaluate the feasibility of18F-SFB-Annexin B1 in detecting apoptosis at an early phase after chemotheraphy. Methods: Annexin B1 was labeled with18F using SFB as a chelating agent. Tissue distribution of18F-SFB-Annexin B1 was studied in healthy mice by the dissection method. W256 tumor-bearing rats were injected with18F-SFB-Annexin B1 intravenously at 24 h after the treatment of cyclophosphamide (CTX 200 mg/kg) or saline. Then imaging was acquired at 1, 2, 3, and 4 h postinjection on a PET/ CT, and the tumor-to-muscle ratio of SUVmax(T/M) and the AI from TUNEL testing were compared. Results:18F-SFBAnnexin B1 had a radiochemical pruity (RCP)＞95%. Biodistribution of this probe showed a predominant uptake in the kidney, then was liver, spleen, and myocardium, rapid clearance from blood and urinary was observed. The radios of T/M were 4.38±0.56, 6.75±1.16, 6.44±1.12, 4.81±0.17, respectively at 1, 2, 3, 4 h post injection of the chemotherapy group, much higher than that of the saline group (2.35±0.14, 2.99±0.55, 3.04±0.41, 2.33±0.47, respectively). The differences between the two groups were significant (F=23.790, 16.913, 14.046, 77.517, respectively, all P＜0.05). TUNEL staining revealed that chemotherapy treatment significantly increased the percentage of apoptosis cells with anAI of (21.00±0.04)% in the chemotherapy group, higher than that in the saline group (8.58±0.01)%, the difference was significant (F=21.539, P＜0.05). The radios of T/M were significantly correlated with the values of AI (r=0.91, P＜0.05). Conclusion:18F-SFB-Annexin B1 can be used to apoptosis imaging and early therapeutic evaluation in vivo because it can reflect apoptosis at an early stage after chemotheraphy.

Annexin B1; Apoptosis; Radionuclide imaging; Chemotherapy; Response evaluation

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.10.004

R73-36

：A

：1007-3639(2013)10-0798-06

2012-12-31

2013-07-17）

章英劍 E-mail:yjzhang111@Yahoo.com.cn