李云云賀文鳳黃婷婷申陽劉秀霞曹青

1.南昌大學附屬第二醫(yī)院江西省醫(yī)學分子重點實驗室，江西 南昌，330006；

2.江西省婦幼保健院產(chǎn)前診斷科，江西 南昌，330006

PTEN對子宮內(nèi)膜癌細胞株遷移和侵襲能力的影響

李云云1賀文鳳1黃婷婷2申陽1劉秀霞1曹青1

1.南昌大學附屬第二醫(yī)院江西省醫(yī)學分子重點實驗室，江西 南昌，330006；

2.江西省婦幼保健院產(chǎn)前診斷科，江西 南昌，330006

背景與目的：10號染色體上磷酸酶和張力蛋白同源缺失的基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10，PTEN)是較為常見的抑癌基因之一。多項研究表明，其在子宮內(nèi)膜組織中表達量降低，但是對子宮內(nèi)膜細胞具體的功能及機制卻不十分清楚。本研究旨在探討PTEN對子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞遷移及侵襲能力的影響及相關(guān)機制，為子宮內(nèi)膜癌治療提供新靶點。方法：運用基因重組技術(shù)構(gòu)建pIRES2-ZsGreen1-PTEN重組質(zhì)粒；將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞中，以轉(zhuǎn)染pIRES2-ZsGreen1空載質(zhì)粒為對照；運用體外劃痕、Transwell遷移及侵襲實驗分別檢測過表達PTEN后細胞遷移和侵襲能力的變化；運用Western blot法檢測過表達PTEN后細胞中PTEN、AKT、p-AKT及MMP-2蛋白表達量的變化。結(jié)果：PCR產(chǎn)物凝膠電泳顯示一條1.2 kb大小的條帶，與PTEN cDNA大小符合；基因測序結(jié)果與Genbank中PTEN cDNA的序列一致，表明質(zhì)粒構(gòu)建成功；轉(zhuǎn)染后48 h熒光顯微鏡下見熒光且Western blot顯示PTEN蛋白表達量增加，表明重組質(zhì)粒在HEC-1B細胞中表達成功；體外劃痕及transwell遷移實驗表明，過表達PTEN后HEC-1B細胞的遷移能力減弱；體外侵襲實驗顯示，過表達PTEN后HEC-1B細胞的侵襲能力明顯低于對照組及未處理組；Western blot結(jié)果表明，過表達PTEN會降低HEC-1B細胞中p-AKT蛋白表達下降，但是AKT蛋白量卻不受影響，同時p-AKT下游的MMP-2蛋白表達量下降。結(jié)論：PTEN能明顯抑制子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞的遷移和侵襲，這一作用可能是通過抑制AKT磷酸化，從而降低MMP-2蛋白的表達而實現(xiàn)的。

子宮內(nèi)膜癌；腫瘤浸潤；10號染色體上磷酸酶和張力蛋白同源缺失的基因；AKT；MMP-2

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma)是最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，占婦女腫瘤疾病發(fā)病的6%［1］。隨著科學普查的推廣，越來越多的疾病能夠得到早期的診斷和治療，但是對于一些診斷較晚、伴發(fā)遠處轉(zhuǎn)移以及分化類型較差的患者而言，生存率和復(fù)發(fā)率還是不容樂觀。Ⅰa、Ⅰb期子宮內(nèi)膜癌的復(fù)發(fā)率分別為8%和13%，而Ⅰc期則上升至46%，同時Ⅰa期患者5年生存率可達82%，而Ⅰc期約為67%［2］。所以尋找到新的診治方法對具有高侵襲和遷移能力的子宮內(nèi)膜癌是十分必要的。

10號染色體上磷酸酶和張力蛋白同源缺失的基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10，PTEN)是子宮內(nèi)膜癌中最常見的突變基因之一。37%～61%的內(nèi)膜樣腺癌患者存在PTEN基因突變，40%的內(nèi)膜癌患者存在PTEN基因雜合性缺失［3］，并且PTEN的表達缺失程度與腫瘤的分化類型及預(yù)后密切相關(guān)［4］。雖然PTEN在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生中發(fā)揮重要作用，但對子宮內(nèi)膜癌細胞具體的功能及機制卻不十分清楚。

本研究構(gòu)建pIRES2-ZsGreen1-PTEN重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1B細胞中，觀察PTEN對子宮內(nèi)膜癌細胞株HEC-1B遷移及侵襲能力的影響，以探討其可能產(chǎn)生作用的機制。

1 材料和方法

1.1 材料

選用PTEN表達陽性的人子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞株進行實驗，HEC-1B細胞較其同亞型HEC-1A細胞而言，細胞生長穩(wěn)定并且其細胞形態(tài)平整規(guī)律更加適用于體外劃痕實驗［5］，細胞株購于中國醫(yī)學科學院細胞中心；PCR引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成；新生牛血清為PAA公司產(chǎn)品；MEM培養(yǎng)基、0.25%胰酶、LipofectamineTM2000購自Invitrogen公司；pIRES2-ZsGreen1購自長沙贏潤生物技術(shù)有限公司；限制性內(nèi)切酶BamHI、EcoRⅠ、TRIzol、PrimeScript?One Step RT-PCR Kit Ver.2試劑盒、凝膠回收試劑盒、質(zhì)粒中量及大量提取試劑盒購自大連寶生物公司(Takara)；T4DNA連接酶購于NEB公司；Transwell小室(8.0 μm孔徑)以及Matrigel膠均購買于美國BD公司；PTEN、AKT、p-AKT及MMP-2的一抗購于Cell Signaling公司；辣根過氧化物酶標記的山羊抗鼠、山羊抗兔的二抗購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；X線片購于柯達公司；測序由本實驗室完成。

1.2 方法

1.2.1 重組真核表達質(zhì)粒pIRES2-ZsGreen1-PTEN的構(gòu)建

1.2.1.1 引物設(shè)計及PTEN cDNA片段擴增

從GenBank中下載PTENmRNA(NM-000314.4)序列，采用Oligo 6.71軟件設(shè)計其上下游引物，在引物的兩端分別加入了EcoRⅠ和BamHⅠ的酶切位點。引物設(shè)計分別為：PTEN-F：5’-GGAATTCGCCACCA TGACAGCC ATCATCAAAGAG-3’；PTEN-R：5’-CGGGATCCTCAGACTTTTGTAATTTGTGTATGC-3’。運用TRIzol提取試劑盒提取人293T細胞中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后-20 ℃保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)PrimeScript? One Step RT-PCR Kit Ver.2試劑盒使用說明運用PCR法從人總cDNA片段中擴增出PTEN片段，所得到的PTEN cDNA片段經(jīng)凝膠電泳驗證，與目的片段相吻合后進行測序檢驗；測序結(jié)果正確后將片段純化、回收、-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.2 將PCR產(chǎn)物連接至pIRES2-ZsGreen1載體

將所得PTEN cDNA片段及pIRES2-ZsGreen1空載質(zhì)粒分別用EcoRⅠ和BamHⅠ進行酶切處理，酶切后的片段純化、回收，運用T4 DNA連接酶將兩者進行連接，所得到的產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳驗證，將我們所需目的片段根據(jù)膠回收試劑盒進行回收，回收產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞，涂板，挑取陽性克隆進行擴增。將所得到的質(zhì)粒酶切后凝膠電泳驗證、測序分析，檢測正確后將質(zhì)粒大量提取，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 細胞培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

人子宮內(nèi)膜癌細胞株HEC-1B細胞用含有10%胎牛血清的MEM完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為CO2體積分數(shù)為5%、37℃、相對濕度90%，細胞呈貼壁生長。取對數(shù)生長期的HEC-1B細胞接種于相應(yīng)培養(yǎng)板，待細胞生長到80%～90%融合時，按照脂質(zhì)體(LipofectamineTM2000)說明書進行轉(zhuǎn)染，根據(jù)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的不同分為3組：PTEN組(轉(zhuǎn)染pIRES2-ZsGreen1-PTEN質(zhì)粒)、control組(轉(zhuǎn)染pIRES2-ZsGreen1質(zhì)粒)和untreated組(未轉(zhuǎn)染組)，轉(zhuǎn)染后48 h，熒光顯微鏡下觀察綠色熒光在細胞內(nèi)的表達情況。

1.2.3 體外細胞劃痕實驗

轉(zhuǎn)染后將各組細胞接種于12孔板中，待細胞達到80%～90%融合時，用200 μL移液器滴頭沿培養(yǎng)板底部劃“一”字型橫線傷口，更換為無血清培養(yǎng)基，分別在0、12、24、36 h于倒置顯微鏡下觀察細胞運用情況，記錄從遷移起點到遷移最遠端細胞核之間的距離，以反映遷移速度。實驗均重復(fù)3次，取平均值。

1.2.4 Transwell腫瘤遷移及侵襲實驗

細胞轉(zhuǎn)染24 h后，將培養(yǎng)小室插入到24孔板中，取2×106個轉(zhuǎn)染后細胞重懸于200 μL無血清的MEM培養(yǎng)基中，將細胞混合液緩慢加入到小室的上層；小室的下層中加入含20% FBS的MEM培養(yǎng)基作為趨化因子，CO2體積分數(shù)為5%、37 ℃條件下培養(yǎng)24 h后，取出小室，吸出小室中MEM培養(yǎng)基，小心擦去上層細胞，PBS洗3次，倒置晾干，甲醇室溫固定10 min，倒置晾干，0.1% 結(jié)晶紫染色5 min，清水輕輕浸洗數(shù)次，倒置晾干，刀片揭膜，中性樹膠封片。鏡下觀察，隨機計數(shù)6個視野，計算結(jié)晶紫染色細胞數(shù)，即為穿膜細胞。細胞侵襲實驗：將凍存于-20 ℃的Matrigel膠4 ℃過夜融化，用4 ℃預(yù)冷的無血清MEM培養(yǎng)基稀釋Matrigel至1 mg/mL，冰上操作。將稀釋后的Matrigel膠40 μL包被小室多聚碳酸酯膜的上室面，37 ℃溫育4～5 h，膠凝固后備用；取2×105個轉(zhuǎn)染后24 h細胞重懸于200 μL無血清的MEM培養(yǎng)基中，將細胞混合液加入到Matrigel膠的上層；其余步驟與遷移實驗相同，以上實驗均重復(fù)3次。

1.2.5 Western blot檢測PTEN及相關(guān)蛋白的表達

提取各組細胞中的總蛋白并用BCA法測蛋白濃度，取30 μg蛋白行聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，濕轉(zhuǎn)聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜)后5%脫脂牛奶封閉2 h，TBST緩沖液漂洗3次，每次10 min；分別與PTEN、AKT、p-AKT、MMP-2、GAPDH蛋白特異性一抗稀釋液4℃溫育過夜，TBST緩沖液漂洗3次，每次10 min，加入相應(yīng)的辣根過氧化物酶標記的二抗稀釋液，室溫1 h，用ECL化學發(fā)光劑顯色，暗室下顯影。

1.2.6 統(tǒng)計學處理

應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進行分析，實驗數(shù)據(jù)以x±s 表示，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，兩組以上數(shù)據(jù)比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 重組真核表達質(zhì)粒pIRES2-ZsGreen1-PTEN構(gòu)建成功

運用設(shè)計好的引物對人PTEN片段進行PCR擴增反應(yīng)，其測序結(jié)果與GenBank(NM-000314.4)中PTEN cDNA序列CDS區(qū)吻合(圖1A)；凝膠電泳結(jié)果顯示1條大小為1.2 kb條帶，與PTEN cDNA片段大小符合(圖1B)，表明目的基因PTEN擴增成功；重組后的pIRES2-ZsGreen1-PTEN質(zhì)粒經(jīng)EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切反應(yīng)后，凝膠電泳下成像顯示2條大小分別約為1.2和5.2 kb 的條帶，而BamHⅠ單酶切后顯示為1條6.4 kb大小的條帶(圖1C)，表明PTEN cDNA與pIRES2-ZsGreen1載體連接成功。

2.2 細胞內(nèi)重組pIRES2-ZsGreen1-PTEN質(zhì)粒在HEC-1B細胞中表達

將上述的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞，由于pIRES2-ZsGreen1載體中攜帶綠色熒光蛋白基因ZsGreen，故可以通過觀察熒光強度檢測其在HEC-1B細胞中的轉(zhuǎn)染效率，倒置熒光顯微鏡下可見轉(zhuǎn)染后80%細胞帶有綠色的熒光標記(圖2)，表明重組pIRES2-ZsGreen1-PTEN質(zhì)粒在HEC-1B細胞中成功表達。

圖 1 重組真核表達質(zhì)粒pIRES2-ZsGreen1-PTEN的鑒定Fig. 1 Identification of the recombinant plasmid

圖 2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染Fig. 2 Transfection of the recombinant plasmid

圖 3 過表達PTEN對HEC-1B細胞遷移速度影響(×100)Fig. 3 The effects of PTEN on the migration capacity of HEC-1B cells (×100)

2.3 過表達PTEN后細胞遷移速度減慢

細胞劃痕實驗結(jié)果顯示，劃痕后12 h，各組細胞均向劃痕區(qū)回縮，而PTEN組細胞的回縮速度明顯慢于control組(P＜0.05)和untreated組(P＜0.05)，而control組和untreated組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05，圖3)。表明HEC-1B細胞過表達PTEN后，導(dǎo)致其遷移能力明顯下降。

2.4 過表達PTEN后細胞遷移能力下降

外遷移實驗結(jié)果表明，過表達PTEN后細胞遷移能力下降，PTEN組穿膜細胞數(shù)為(67.0±10.5) 個，較untreated組(180.0±7.2)個和control組(174.0±10.1)個明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01，圖4)。表明在體外實驗中，PTEN能夠抑制HEC-1B的遷移。

圖 4 過表達PTEN對HEC-1B細胞遷移能力影響(×100結(jié)晶紫染色)Fig. 4 The effects of PTEN on the migration ability of HEC-1B cells (×100 stained with crystal violet)

2.5 過表達PTEN后細胞侵襲能力下降

圖 5 過表達PTEN對HEC-1B細胞侵襲能力影響(×100結(jié)晶紫染色)Fig. 5 The effects of PTEN on the invasion ability of HEC-1B cells (×100 stained with crystal violet)

在小室中添加的Matrigel膠是模擬細胞在人體的中細胞外基質(zhì)(extracellular matrixc，ECM)的環(huán)境，ECM的降解是細胞發(fā)生侵襲的重要環(huán)節(jié)，通過檢測細胞穿過基質(zhì)膠的數(shù)量檢測細胞侵襲能力的改變。侵襲實驗結(jié)果顯示，PTEN組細胞穿過Matrigel膠的細胞數(shù)量為(67.3±11.7)個，較untreated組(171.7±10.4)個和control組(164.3±9.0)個明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01，圖5)。表明PTEN能夠明顯抑制HEC-1B細胞的侵襲。

2.6 轉(zhuǎn)染后PTEN及相關(guān)蛋白表達量的變化

Western blot結(jié)果顯示，PTEN組p-AKT的蛋白表達量較control組和untreated組降低，為了檢測p-AKT蛋白表達量的變化是否來自AKT蛋白本身，我們同時檢測了AKT蛋白的變化，發(fā)現(xiàn)AKT蛋白卻無明顯變化；另外，PTEN組p-AKT下游的MMP-2蛋白表達量也明顯較control組和untreated組表達降低(圖6)。

圖 6 Western blot檢測過表達PTEN后AKT、p-AKT、MMP-2蛋白表達量的變化Fig. 6 The expression of AKT, p-AKT and MMP-2 proteins was detected by Western blotting

3 討 論

pIRES2-ZsGreen1載體是攜帶有內(nèi)部核糖體進入位點序列(internal ribozyme entry site，IRES)的新型表達載體。較傳統(tǒng)的翻譯步驟而言，IRES序列可以不依賴于5’端帽狀結(jié)構(gòu)而直接將真核生物核糖體募集到mRNA分子5’UTR上進行翻譯［6］。由于具有獨立的起始翻譯功能，IRES序列目前被廣泛應(yīng)用于雙元素表達載體的構(gòu)建。傳統(tǒng)的質(zhì)粒構(gòu)建過程中由于只有一個翻譯起始位點，所以構(gòu)建目的基因的尾端多攜帶有綠色熒光蛋白或者其他標簽蛋白，對于分子量較大或者空間折疊結(jié)構(gòu)較復(fù)雜的蛋白，重組后分子可能會影響蛋白翻譯后的空間位置的折疊，甚至形成不可溶的蛋白體，從而影響到蛋白的功能［7］。本研究運用具有獨立啟動子功能的pIRES2-ZsGreen1載體，構(gòu)建了PTEN的重組質(zhì)粒，為檢測PTEN對子宮內(nèi)膜癌細胞功能的研究提供基礎(chǔ)。熒光顯微成像及Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后細胞中PTEN蛋白表達量增加，表明重組后的pIRES2-ZsGreen1-hPTEN在HEC-1B細胞中表達成功。

PTEN是一種編碼雙重特異磷酸酶的抑癌基因，在多種腫瘤組織中表達缺失或突變，如肝癌［8］、膠質(zhì)瘤［9］及子宮內(nèi)膜癌［10］。大量的實驗數(shù)據(jù)表明，PTEN在多種腫瘤相關(guān)的生物學進程中，包括腫瘤的生長、凋亡以及侵襲發(fā)揮重要作用［11］。而這一重要的生物學功能主要是通過其脂質(zhì)磷酸酶的活性產(chǎn)生的。通過特異性的去除磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷脂(phosphat -idylinositol-3,4,5-trisphosphate，PIP3)上的磷酸集團，抑制了蛋白激酶B(ATP-dependent tyrosine kinase，AKT)激活，導(dǎo)致其下游的相關(guān)信號分子如NF-κB、caspase-9、mTOR、MMP-2和GSK-2等表達減少，而這些信號分子在維持細胞的增殖、分化、凋亡以及侵襲等過程中發(fā)揮著重要作用［12］。實驗證實，37%～61%的內(nèi)膜樣腺癌患者存在PTEN基因突變，40%的內(nèi)膜癌患者存在PTEN基因雜合性缺失［3］，并且PTEN表達缺失程度與腫瘤的分化類型及預(yù)后密切相關(guān)［4］。除此之外，80%的子宮內(nèi)膜癌患者還存在這條信號通路中其他下游因子表達異常［13］。因此，了解其在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)揮的生物學功能及機制，將為子宮內(nèi)膜癌的生物治療提供新的思路。本研究結(jié)果顯示，過表達PTEN能夠明顯抑制HEC-1B細胞的侵襲和遷移。

MMP-2是基質(zhì)金屬蛋白酶中的重要亞型，與MMP-9一同通過作用于基質(zhì)中的Ⅳ型膠原，降解細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)。ECM是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的天然屏障，所以MMP-2在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用［14］。在卵巢癌組織中，伴隨惡性程度的增加MMP-2的表達量增加。健康人或是良性腫瘤的患者中，無MMP-2表達量上升，無遠處轉(zhuǎn)移的癌癥患者中63%表達量上升，而在伴有轉(zhuǎn)移的患者中93%表達量上升［15］。同時在子宮內(nèi)膜癌的病理組織中發(fā)現(xiàn)，漿液組織中若存在MMP-2表達陽性，對患者術(shù)后復(fù)發(fā)有診斷意義［16］。多項報道顯示，AKT是MMP-2的上游，在肝癌細胞中運用藥物抑制PI3K/AKT信號通路后，肝癌細胞的MMP-2的降低伴隨侵襲能力減弱［8］。而在非小細胞肺癌中，ICAM-3亦通過AKT提高細胞中MMP-2表達，增強了細胞的遷移和侵襲能力［17］。本研究中，過表達PTEN后，p-AKT表達量降低，伴隨MMP-2的表達降低，而細胞中總的AKT蛋白表達量沒有明顯變化。表明PTEN抑制子宮內(nèi)膜癌的侵襲和遷移的功能部分是依賴PTEN介導(dǎo)的AKT/MMP-2這條通路完成的。

綜上所述，本研究成功構(gòu)建了含有PTEN基因的重組質(zhì)粒，運用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組后的PTEN成功轉(zhuǎn)染至HEC-1B細胞后，發(fā)現(xiàn)細胞的侵襲和遷移能力明顯受到抑制，同時發(fā)現(xiàn)細胞中MMP-2表達量降低，表明PTEN抑制子宮內(nèi)膜癌的侵襲和遷移的功能部分是依賴PTEN介導(dǎo)的AKT/MMP-2這條通路完成的，為今后進一步了解PTEN在子宮內(nèi)膜癌中的生物學功能及機制提供了重要途徑，并為腫瘤的生物治療提供了新思路。

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Effects of PTEN on the migration and invasion of endometrial carcinoma cells

LI Yun-yun1, HE Wen-feng1, HUANG Ting-ting2, SHEN Yang1, LIU Xiu-xia1, CAO Qing1(1.The Key Laboratory of Molecular Medicine of Jiangxi Province, the Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang Jiangxi 330006, China; 2.Department of Prenatal Diagnosis, Jiangxi Maternal and Child Health Hospital, Nanchang Jiangxi 330006, China)

CAO Qing E-mail: cao_qing29@163.com

Background and purpose: Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10 (PTEN) gene is a kind of tumor suppressors, which has been reported to be underexpressed in endometrial carcinoma (EC) tissues by several reports. However, the biological effects and possible mechanisms of PTEN on EC have been known less. In this study, we tried to investigate the effects and possible mechanisms of PTEN on the invasion and migration of endometrial carcinoma cells and to provide a potential target for endometrial carcinoma therapy. Methods: The recombinant plasmid pIRES2-ZsGreen1-PTEN was rebuilt by gene recombination technology; The plasmid was transferred into HEC-1B cells and the cells transfected with pIRES2-ZsGreen1 plasmid were used as control; The expression of PTEN was observed by fluorescence microscope and Western blot assay; Cell migration and invasion was determined by the wound healing assay, transwell migration and invasion assays respectively; The Western blot analysis was performed to detect the expression of ATP-dependent tyrosine kinase (AKT), phosphorylated-AKT (p-AKT) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2). Results: The agarose gel electrophoresis showed a stripe of 1.2kb which was same to PTEN cDNA; The sequence analysis showed the PCR products owned the same sequence with the coding region of PTEN cDNA in GenBank, suggesting the recombinant plasmid was constructed successfully; The green light of cells observed by fluorescence microscope and the Western blot analysis showed the expression of PTEN was upregulated in the cells transfected with the recombinant plasmid, suggesting the plasmid expressed successfully in HEC-1B cells; The wound healing assay as well as transwell migration assay showed ectopic expression of PTEN suppressed cell migration; The invasive capacity of HEC-1B cells was significantly decreased upon transfection with PTEN plasmid compared to control and untreated groups; Moreover, compared with the control groups, the expression of p-AKT and MMP-2 was downregulated, while there was no significant alteration of the expression of AKT. Conclusion: PTEN could suppress cell migratory and invasive ability of endometrial carcinoma cells by suppressing the phosphorylation of AKT followed by the decrease of MMP-2.

Endometrial carcinoma; Tumor invasion; Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10; AKT; MMP-2

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.10.006

R737.33

：A

：1007-3639(2013)10-0813-08

2013-07-02

2013-09-30）

曹青 E-mail:cao_qing29@163.com