劉安石 黃洪波 黃迪輝 張成軍 殷建建 劉進輝

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，長沙 410128；

2.湖南省南縣畜牧水產(chǎn)局廠窖動物防疫站，南縣 413200；

3.湖南省沅江市畜牧水產(chǎn)局草尾動物防疫站，沅江 413100；

4.湖南省芷江縣畜牧水產(chǎn)局，芷江 419100）

草分枝桿菌協(xié)同抗生素對豬支原體和放線桿菌的控制研究

劉安石1黃洪波2黃迪輝3張成軍4殷建建1劉進輝1

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，長沙 410128；

2.湖南省南縣畜牧水產(chǎn)局廠窖動物防疫站，南縣 413200；

3.湖南省沅江市畜牧水產(chǎn)局草尾動物防疫站，沅江 413100；

4.湖南省芷江縣畜牧水產(chǎn)局，芷江 419100）

為探討草分枝桿菌協(xié)同抗生素對因感染支原體肺炎、放線桿菌引起的豬呼吸道疾病的治療作用。試驗選用60日齡左右經(jīng)實驗室確診感染了支原體或放線桿菌的保育豬群，隨機分為草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治療組、草分枝桿菌治療組和泰妙菌素+磷酸替米考星治療組，并從臨床癥狀、治愈率和增重3個方面考察試驗效果。試驗結(jié)果表明：草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治療組能在短時間內(nèi)控制其臨床癥狀（咳嗽、喘氣和體溫等），增重效果最好，且治愈率均顯著高于泰妙菌素+磷酸替米考星治療組（P＜0.05），極顯著高于草分枝桿菌治療組（P＜0.01），說明草分枝桿菌對因感染支原體肺炎、放線桿菌的豬呼吸道疾病有極好的輔助治療作用，但單用效果不理想。

草分枝桿菌 泰妙菌素 替米考星 豬支原體肺炎 豬、放線桿菌 治愈率 輔助治療

豬支原體肺炎（MPS）又稱豬氣喘病，是由豬肺炎支原體（Mhp）引起豬的一種接觸性呼吸系統(tǒng)傳染病，在我國廣泛存在，是造成養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟損失最重要的疾病之一[1]。長期以來人們對本病的認識不是十分清楚，直至1965年Mare、Switzer和Goodwin[2]等才證實本病的病原為肺炎支原體。豬放線桿菌引起的豬傳染性胸膜肺炎（PCPP），近年來呈逐年增強的趨勢，其發(fā)病率和死亡率逐漸升高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了極大的損失[3]。豬氣喘病和豬傳染性胸膜肺炎的主要臨床癥狀表現(xiàn)為咳嗽，呼吸困難，生長緩慢，飼料轉(zhuǎn)化率降低和抵抗力下降。急性豬傳染性胸膜肺炎出現(xiàn)體溫升高，死亡率增加。如發(fā)生繼發(fā)感染，可能出現(xiàn)食欲不振，呼吸極度困難，咳嗽加重，體溫升高及衰竭和死亡。此兩病是造成養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟損失的重大疾病之一。

草分枝桿菌是抗酸分枝桿菌中的一種，基于其同結(jié)核分枝桿菌的生物親緣性，可介入動物的免疫過程，調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)的免疫能力。滅活的草分枝桿菌進入動物體后可刺激T淋巴細胞釋放出多種淋巴因子如MAF、MIF、MCF、MMF等[4]，這些因子作用于單核巨噬細胞系統(tǒng)，使之向病灶部位聚集、活化，對病原菌進行吞噬、殺傷和清除；同時，自然殺傷（NK）細胞、B淋巴細胞也活化、增多；IgM、IgG趨正常，持久的介入動物體的免疫過程，不斷的調(diào)節(jié)細胞及體液免疫系統(tǒng)[5]。草分枝桿菌是一種非病原性細菌，在人醫(yī)臨床上主要用于治療免疫功能低下的疾病，如肺和肺外結(jié)核、慢性支氣管炎、支氣管哮喘、支氣管擴張、胸膜炎、風濕性關節(jié)炎、胃炎、腸炎、肝炎、慢性扁桃體炎和糖尿病[6]等。20世紀90年代來，作為1種生物調(diào)節(jié)劑用于惡性腫瘤的治療[6]。同時還能促進淋巴細胞的增殖并提高其殺傷活性，明顯改善細胞免疫功能，而且效果迅速，持續(xù)時間長[7]。草分枝桿菌注射液聯(lián)合特異性免疫治療對呼吸道疾病有較顯著療效[8-10]，但國內(nèi)外對草分枝桿菌在動物呼吸道疾病方面的療效認識仍存在較大空白，還有待進一步的研究。

本課題試驗研究主要是將草分枝桿菌用于對豬呼吸道疾病的治療與研究，打破常規(guī)西醫(yī)治療豬呼吸道疾病的現(xiàn)狀，減少西藥藥物殘留和對機體臟器功能的損傷。試驗結(jié)果如果呈現(xiàn)積極作用，那么使用草分枝桿菌協(xié)同抗生素治療豬的呼吸道疾病將縮短療程，減少用藥量，提高豬自身抵抗免疫力，避免豬因其他呼吸道疾病引起的反復發(fā)作，提升治療效果，控制豬場呼吸道疾病。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥品

滅活草分枝桿菌粉劑：含量≥20.0%，湖南圣雅凱生物科技有限公司；磷酸替米考星粉劑：含量≥75.0%，山東久隆恒信藥業(yè)有限公司；支原凈（泰妙菌素）：含量≥99%，上海諾華生產(chǎn)。

1.1.2 試驗動物

長沙縣、南縣、芷江縣規(guī)模豬場，60日齡左右經(jīng)實驗室確診患支原體肺炎（氣喘病）的保育仔豬60頭，患支原體肺炎和放線桿菌胸膜肺炎仔豬60頭，體重為23.0±0.5 kg。

1.1.3 主要儀器

PCR儀：ABI公司；MOTIC2.0光學顯微鏡：北京中顯恒業(yè)儀器儀表有限公司；FA1104N 電子天平：成都一科儀器設備有限公司；TG16型高速離心機：長沙英泰儀器有限責任公司；SW—CJ—IC超凈工作臺：蘇州安泰空氣技術有限公司。

表1 試驗豬的分組與處理

1.2 方法

1.2.1 試驗動物的篩選與分組

選擇湖南長沙縣、南縣和芷江縣幾個規(guī)模豬場的患有呼吸道疾病的60日齡左右，體重為23 kg左右的保育發(fā)病豬400頭，從中再經(jīng)臨床診斷和實驗室確診后選擇患有豬支原體肺炎的病60頭，患支原體肺炎和胸膜肺炎的病豬60頭，按照隨機分組的原則，分為泰妙菌素+磷酸替米考星治療組（1、2組），草分枝桿菌治療組（3、4組），草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治療組（5、6組），分組情況見表1。

1.2.2 試驗藥物使用方法

磷酸替米考星拌料添加比例是每1 t飼料加入100 g，泰妙菌素拌料添加比例是每1 t飼料加入125 g，草分枝桿菌粉劑拌料添加比例是每1 t飼料加入2.5 kg，連續(xù)使用7 d。

1.2.3 療效評價標準與體重變化

治愈：在試驗期間，仔豬經(jīng)給藥后，咳嗽、喘氣、腹式呼吸、精神不振、食欲減退等臨床癥狀均消失。根據(jù)每組治愈豬頭數(shù)占整組試驗豬頭數(shù)的比率計算治愈率。

有效：癥狀減輕，停藥后有復發(fā)。

無效：在試驗期間，試驗豬臨床癥狀沒有消失甚至出現(xiàn)死亡。根據(jù)每組沒有治愈的豬頭數(shù)占整組試驗豬頭數(shù)的比率計算無效率。

增重：根據(jù)開始時及20 d試驗結(jié)束時每頭豬的體重，計算每頭豬的增重，然后計算每組試驗豬的平均增重。

1.2.4 數(shù)據(jù)的分析與處理

用SPSS13.0進行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗，其中，治愈率用卡方檢驗（卡方值=n[（A11/n1n1+A12/n1n2+...+Arc/nrnc）-1]），初始體重、終末體重和日增重用方差分析，并進行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗治療效果

各組試驗豬只治療效果如表2所示。對單純患支原體肺炎和患支原體肺炎與胸膜肺炎混合感染的試驗豬只，草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治療組的治愈率最高達97.5%。而單純的草分枝桿菌試驗組治愈率最低，僅為47.5%，泰妙菌素+磷酸替米考星治療組的治愈率為87.5%。試驗結(jié)果表明：草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治療組治愈率顯著高于泰妙菌素+磷酸替米考星治療組（P＜0.05），極顯著高于草分枝桿菌治療組（P＜0.01）。而泰妙菌素+磷酸替米考星治療組也極顯著高于草分枝桿菌組（P＜0.01）。

2.2 試驗增重結(jié)果

試驗結(jié)束時稱重，各組豬的增重效果如表3所示。初始體重各組差異均不顯著（P＞0.05），但試驗增重效果以5、6組既草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治療組最好，草分枝桿菌組增重最差，但各組之間差異不顯著（P＜0.05）。

2.3 臨床癥狀觀察

藥物治療各組的臨床癥狀均能在用藥后得到緩解或消除，但草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星治療組的臨床癥狀減輕和消失的最快，用藥第1 d就有明顯好轉(zhuǎn)，第2 d、第3 d臨床癥狀恢復正常。泰妙菌素+磷酸替米考星治療組大部分咳喘豬連續(xù)咳喘轉(zhuǎn)為斷續(xù)咳喘，第3～5 d癥狀明顯減輕。而草分枝桿菌組治療組恢復較慢。

3 討論

3.1 試驗結(jié)果表明，泰妙菌素+磷酸替米考星試驗治療組相比草分枝桿菌治療組在豬支原體肺炎和放線桿菌胸膜肺炎的呼吸道疾病治療方面有顯著的療效。在分組試驗中，其治愈率和平均豬終重均好于單獨草分枝桿菌治療，這一結(jié)果與我們試驗前的預想是一致的。替米考星是20世紀80年代由英國Elanco動物保健品公司開發(fā)成功的一種由泰樂菌素半合成的畜禽專用抗生素[11]，具有與泰樂菌素類似的分子結(jié)構(gòu)和抗菌譜。其作用機理是與細菌核糖體或其反應底物（如tRNA、mRNA）相互所用，抑制蛋白質(zhì)的合成——這意味著細胞存活所必需的結(jié)構(gòu)蛋白和酶不能被合成[12]。泰妙菌素對豬支原體有較強的抑殺作用?？股仉m然是一種有效的殺菌藥物，但是一味的使用和增加抗生素的使用時間和劑量，會使其產(chǎn)生耐藥性和導致藥物殘留，以至于進化成超級病毒或者細菌，威脅豬的健康與安全[13]。

而草分枝桿菌的作用主要是免疫增強，它可刺激動物機體內(nèi)的T淋巴細胞釋放多種淋巴因子，作用于單核巨噬細胞系統(tǒng)，使之向病灶部位聚集活化，對細菌和病毒進行吞噬、殺傷和清除；草分枝桿菌可使自然殺傷細胞、B淋巴細胞活化增多，IgM、IgG趨于正常，草分枝桿菌持久的介入動物體的免疫過程，不斷的調(diào)節(jié)細胞免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫功能[6-7]。從試驗結(jié)果來看，第3組和4組中的患豬，其治愈率僅為47.5%，說明單獨的草分枝桿菌在治療豬呼吸道疾病上具有一定的作用，但沒有起到較好的療效，主要原因在于草分枝桿菌只具調(diào)節(jié)機體免疫的作用，不具有抑制和殺滅作用。所以，可以考慮草分枝桿菌單獨長期飼料拌喂用于豬呼吸道疾病和其他疾病的預防，以提高豬的抵抗力，從而降低豬只疾病的發(fā)生。

表2 各藥物治療效果比較

表3 試驗豬群體重比較（kg/頭）

3.2 從試驗結(jié)果來看，草分枝桿菌+泰妙菌素+磷酸替米考星在患病豬的治愈率、平均日增量中均高于其他組，其中，一組治愈率達到了100%，每頭病豬的平均日增量也都達到0.45 kg，治療效果顯著。常規(guī)藥物在治療過程中，病原往往在動物體內(nèi)血液循環(huán)較差，加之耐藥性問題，對這幾種病的急性病例用常規(guī)抗生素處理，往往效果不很理想，這增加了菌苗免疫預防和治療的難度，目前豬源致病性細菌的耐藥程度比較嚴重[14-16]。由于草分枝桿菌能增強豬的免疫力，將草分枝桿菌與藥物按一定比例混合飼喂，不僅提高藥物對疾病的治療效果，而且能縮短病程，提高生豬的生長速度，也避免了因長期使用抗生素帶來的細菌、病毒的變異，也可減少耐藥性的產(chǎn)生。

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果表明：采用草分枝桿菌粉劑拌料對豬感染支原體肺炎和放線桿菌引起的呼吸道疾病具有顯著輔助治療作用，可作為臨床上對豬感染支原體肺炎和放線桿菌的輔助治療藥物。

[1] 李連敏，裴愛民，葛海芬，等.豬呼吸道疾病綜合征的防治[J].河南畜牧獸醫(yī)（綜合版），2008，（2）：24-25.

[2] 周宗清，鄒勇.豬呼吸道疾病復合征的研究現(xiàn)狀與綜合防制[J].國外畜牧學（豬與禽），2007，（2）56-59.

[3] 李慧蓮，高學文.豬呼吸道疾病綜合癥的防治[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2010，（6）：24-25.

[4] 程相鐸，雍磊，梅海豫.草分枝桿菌注射液輔助治療支氣管哮喘[J].實用醫(yī)藥雜志，2009，26（2）：132-135.

[5] 郭素娟，李超乾，黃錫奎，等.霧化吸入滅活草分枝桿菌治療中度支氣管哮喘的臨床研究[J].中華急診醫(yī)學雜志，2011，20（4）：1671-0282.

[6] 劉福坤，祁曉平，陳徹.新的免疫增強劑——草分枝桿菌的實驗和臨床研究[J].實用癌癥雜志，2003，（2）：126-128.

[7] 趙永前，劉茂軍，周勇歧，等.替米考星預混劑對人工誘發(fā)豬氣喘病的療效試驗[J].畜牧與獸醫(yī)，2007，39（11）：60-62.

[8] 謝慶閣，翟中和主編.畜禽重大疫病免疫研究進展[M].北京，中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1996.

[9] 張國強，張立昌，余平良.豬氣喘病最新研究進展[J].豬與禽，2002，（1-2）：54-59.

[10] 李宏勝，張繼瑜，周旭正，等.替米考星對雛雞增重及預防人工感染禽巴氏桿菌的效果觀察[J].畜牧與獸醫(yī)，2004，36（12）：10-12.

[11] 逮忠新，趙萍，柳紀省，等.豬傳染性胸膜肺炎三價滅活苗的研究——效力、最小免疫量、免疫持續(xù)期和保存期試驗[J].中國獸醫(yī)科技，2002，32（5）：8-10.

[12] 孫永學，陳杖榴.替米考星在獸醫(yī)臨床上應用的研究概況[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2003，（2）：18-20.

[13] 白新勝，盧景良主編.畜禽重大疫病生物技術防制研究[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社.1998.

[14] 楊靜，蔣玉紅，張秋業(yè).烏體林斯對哮喘患兒外周血Th1/Th2功能的影響[J].中國全科醫(yī)學，2007，10（3）：205-207.

[15] 張立昌.豬傳染性胸膜肺炎研究進展[J].養(yǎng)豬，2001，（1）：42-45.

[16] 劉秀玲.中西藥結(jié)合治療豬傳染性胸膜炎[J].中獸醫(yī)學雜志，2006，（2）：20-21.