李紫薇，張藝，張月梅，高翠

（伊犁師范學院化學與生物科學學院，新疆伊寧 835000）

薰衣草（Lavender），又名香草、靈香草，屬于多年生半陰性亞灌木[1]，原產(chǎn)于地中海沿岸，是一種珍貴的香料作物[2]。薰衣草富含揮發(fā)油、香豆素、單寧、類黃酮[3]及多種對人體有重要保健作用的微量元素等[4]，可用于烹調(diào)、藥用[5]、美容等[6]各方面，具有靜心安神，鎮(zhèn)定情緒，治療失眠，減輕疲勞感，緩和神經(jīng)痛等功效[7]。薰衣草花茶不加任何甜味物質(zhì)就可產(chǎn)生甘甜的口感，還具有鎮(zhèn)靜、清涼、助消化、預防感冒等眾多功效[8]。但目前關于溫度對薰衣草花茶水提物抗氧化活性影響的研究未見文獻報道。本試驗以伊犁產(chǎn)薰衣草花茶水提物為研究對象，采用清除二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）、羥基自由基（OH·）、超氧陰離子自由基（O2-·）及抑制亞油酸過氧化等四種抗氧化能力的評價方法，對薰衣草花茶水提物的抗氧化活性進行初步研究，旨在為薰衣草花茶作為抗氧化、抗衰老保健食品的開發(fā)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1，1－二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH·）：化成工業(yè)開發(fā)有限公司AR；亞油酸：天津大茂化學試劑廠，AR；蕓香葉苷：上海國藥集團化學試劑有限公司，AR；水楊酸：成都化學試劑廠，AR；焦性沒食子酸：天津福晨化學試劑廠，AR；三羥甲基胺基甲烷：北京雙環(huán)化學試劑廠，AR；抗壞血酸：天津光友精細化工研究所，AR；硫氰酸按：北京雙環(huán)化學試劑廠，AR。本實驗所用樣品為伊犁產(chǎn)薰衣草。試驗用水均為去離子水。

VOS-60A型真空干燥箱：上海施都凱儀器設備有限公司；FW-80型高速萬能粉碎機：北京市永光明醫(yī)療儀器廠；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；QYC系列全溫培養(yǎng)搖床：上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；F2104N分析天平：上海儀器制造廠；723PC可見分光光度計：上海舜宇恒平科學儀

1.3.2 對亞油酸過氧化的抑制試驗

在10 mL具比色管中分別加入1.50 mL 2.5%亞油酸，4.50 mL 40 mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0），0.75 mL無水乙醇，0.75 mL蒸餾水，0.50 mL樣液（1.0 mg/mL），混合均勻，制得樣液混合反應液，密封后于37℃恒溫避光氧化。空白混合反應液以無水乙醇溶液代替樣液，方法同上。每間隔24 h，在10 mL比色管中加入0.10 mL混合反應液、7.00 mL 75%乙醇、0.20 mL 30%硫氰酸胺、0.20 mL氯化亞鐵溶液（20 mmol/L，以3.5%鹽酸為溶劑），準確反應3 min后，以蒸餾水為空白，在484 nm測定吸光度At樣品。在相同條件下用空白混合反應液代替樣品混合反應液，測定吸光度值At空白，并按以下公式計算清除率：器有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵：上海亞榮生化儀器廠。

1.2 薰衣草花茶水提物的制備

薰衣草花茶→干燥→粉碎→過篩（60目）→干花粉末→恒溫浸提2 h（固液比1：15）→抽濾→旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮（45℃）→真空干燥（45℃）→粗提物。連續(xù)提取3次，合并提取物。浸提溫度分別為 50、60、70、80、90 ℃。粗提物用蒸餾水稀釋并定容，得樣品供試液備用。

1.3 抗氧化性實驗[9-10]

1.3.1 清除DPPH·的試驗

精確吸取0.50 mL樣品溶液（1.0 mg/mL）于10 mL比色管，加入3.5 mL 2×10-4mol/L的DPPH·溶液混合，搖勻后避光放置30min，以無水乙醇為參比，在517nm處的測吸光度值（Ax）。并測定0.50 mL樣品溶液與3.50 mL乙醇的混合液的吸光值（Ax0）和3.50 mL 0.2 mmol/L DPPH·溶液與0.05 mL乙醇的吸光值（A0）。將以上數(shù)據(jù)代入下列公式計算其清除率。

式中：A0樣品、A0空白分別為零時刻測定值。

1.3.3 清除OH·的試驗

依次在10 mL比色管中加入1.00 mL 4.5 mmol/L FeSO4，加1.00 mL 4.5 mmol/L水楊酸-乙醇溶液，加1.00 mL樣品溶液（1.0 mg/mL），最后加入1.00 mL 4.4 mmol/LH2O2。上述混合液在37℃水浴中反應0.5 h，在510 nm處測吸光度Ax；以蒸餾水代替樣品溶液，同上述方法，測得A0?？紤]到待測溶液本身的吸光值，以蒸餾水代替H2O2，測得溶液的本底吸收值Ax0；并按以下公式計算清除率：

1.3.4 清除O2-·的試驗

在4.50 mLTris-HCl緩沖液（pH8.2）中，加入2.00 mL樣品溶液，30℃恒溫水浴30 min后。加入1.00 mL鄰苯三酚（2 mmol/L），反應 5 min后，加入1.00 mL濃HCl。在420 nm處測定吸光度值，并按下式計算清除率。

式中：A0為4.50 mLTris-HCl+2.00 mL蒸餾水+1.00 mL鄰苯三酚+1.00 mLHCl；Ax為 4.50 mLTris-HCl+2.00 mL不同濃度樣品+1.00 mL鄰苯三酚+1.00 mL HCl；Ax0為 4.50 mLTris-HCl+2.00 mL 不同濃度樣品+1.00 mL蒸餾水+1.00 mLHCl。

2 結(jié)果與分析

2.1 薰衣草花茶水提物對DPPH·的清除作用

試液濃度為1.0 mg/mL時，試驗考察了浸提溫度（50、60、70、80、90 ℃）對薰衣草花茶水提物清除DPPH·作用的影響。按標“1.3.1”項，在517 nm處分別測定吸光度Ax、A0，計算清除率。結(jié)果如圖1所示。

圖1 浸提溫度對清除DPPH·作用的影響Fig.1 The effects of extraction temperature on the DPPH·scavenging rate

由圖1可見，在試驗溫度范圍內(nèi)，60℃提取物對DPPH·清除率最高，清除率為87.16%。

2.2 薰衣草花茶水提物抑制亞油酸過氧化作用

當試液濃度為10.0 mg/mL時，按標“1.3.2”項，在一周時間內(nèi)，考察不同浸提溫度薰衣草花茶水提物抑制亞油酸過氧化作用，結(jié)果見圖2。

結(jié)果表明，薰衣草花茶水提物有較好的抗氧化活性。不同溫度的水提物抑制亞油酸過氧化能力隨時間的增加呈現(xiàn)下降趨勢，在前三天變化幅度較大。低溫下的提取物抑制亞油酸過氧化能力較高，其中70℃水提物抑制亞油酸過氧化作用最好。

圖2 浸提溫度對抑制亞油酸過氧化作用的影響Fig.2 The effects of extraction temperature on antioxidants of the linoleic acid

2.3 薰衣草花茶水提物對羥基自由基（OH·）的清除作用

當試液濃度為1.0 mg/mL時，試驗考察不同浸提溫度（50、60、70、80、90 ℃）對薰衣草花茶水提物清除OH·作用的影響。按標“1.3.3”項，在520 nm處分別測定吸光度Ax、Ax0、A0，計算清除率。結(jié)果如圖3所示。

圖3 浸提溫度對清除OH·作用的影響Fig.3 The effects of extrected temperature on the OH·scavenging rate of the Lavender extracts

由圖3可知，60℃水提物清除OH·作用最強。

2.4 薰衣草花茶水提物對超氧陰離子（O2-·）清除作用

當供試液濃度為1.0 mg/mL時，試驗考察不同浸提溫度（50、60、70、80、90 ℃）對薰衣草花茶水提物清除O2-·作用的影響。按標“1.3.4”項，在520 nm處分別測定吸光度Ax，A0，Ax0，依據(jù)公式計算清除率。結(jié)果如圖4所示。

由圖4可知，浸提溫度越高，提取物對超氧陰離子清除能力越好，90℃的水體物效果最佳，清除率為35.519%。

3 結(jié)論

圖4 浸提溫度對清除O2-·作用的影響Fig.4 The effects of extrected temperature on the O2-·scavenging rate of the Lavender extracts

通過薰衣草花茶水提物清除DPPH·、超氧陰離子、羥基自由基作用的試驗，并用亞油酸過氧化評價體系進一步驗證，薰衣草花茶水提物具有良好的抗氧化活性。試驗比較了不同浸提溫度（50、60、70、80、90℃）對薰衣草花茶水提物抗氧化活性的影響。結(jié)果顯示，60℃的水提物對DPPH·和OH·清除效果最好，70℃的水提物抑制亞油酸過氧化效果最佳。浸提溫度越高，水提物對超氧陰離子的清除作用越強?？寡趸钚晕镔|(zhì)可以清除體內(nèi)自由基，預防疾病，抵抗衰老，所以研究薰衣草花茶水提物抗氧化活性可為薰衣草作為抗氧化、抗衰老保健食品的開發(fā)提供理論參考。

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