郭 興，邢振楠，任廣明，高智濤

（黑龍江省伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江伊春 153000）

食用菌產(chǎn)業(yè)是一項(xiàng)集經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益和社會效益于一體的短平快農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展項(xiàng)目，專家們普遍認(rèn)為，進(jìn)入21世紀(jì)，隨著人們生活水平的不斷提高，危害人類健康的問題不是饑餓和營養(yǎng)不良，而是由于經(jīng)濟(jì)提高，食物富裕，體力活動減少而帶來的慢性疾病，如心血管、高血壓、糖尿病以等，而具有真核的菌類食品，以其能產(chǎn)生抗細(xì)菌、抗病毒作用，并對人體有保健功能而廣泛受到重視，受到越來越多人的青睞。目前國際市場對食用菌的需求正不斷上升，近幾年食用菌每年的產(chǎn)值達(dá)250～280億。食用菌產(chǎn)業(yè)被認(rèn)為是21世紀(jì)的朝陽產(chǎn)業(yè)。食用菌又是一類有機(jī)、營養(yǎng)和保健的綠色食品，發(fā)展食用菌產(chǎn)業(yè)，符合人們消費(fèi)增長和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的需要是農(nóng)民快速致富的有效途徑。

真菌多糖可以制成抗腫瘤、抗病毒藥品口服或者進(jìn)行注射，還可以作為保健品中的添加物能起到延緩衰老調(diào)節(jié)免疫力的作用，也是新藥開發(fā)的重要途徑之一?，F(xiàn)在多糖體也被廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)，例如多糖飲料，多糖面包等等，并且市場需求量較大。在保健品行業(yè)多糖應(yīng)用更為廣泛，配合蛋白質(zhì)、核酸等微量元素制成的多糖膠囊其抗衰老、抗疲勞免疫調(diào)節(jié)作用發(fā)揮的淋漓盡致。

1 材料

1.1 供試菌株

供試菌種見表1，由伊春林業(yè)科學(xué)院原生態(tài)食用菌研究所保藏。

1.2 試劑

實(shí)驗(yàn)用試劑見表2。

1.3 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)用儀器、設(shè)備見表3。

表1 15個香菇品種和8個靈芝品種Tab.1 15 mushrooms and 8 ganoderma lucidum varieties

表2 所用試劑Tab.2 Reagents used

表3 所用儀器Tab.3 Instruments used

2 方法

2.1 食用菌多糖的提取工藝流程

預(yù)處理→浸提→過濾→濃縮→醇析→去蛋白→食用菌多糖。

2.2 培養(yǎng)基的配制

CYM培養(yǎng)基含葡萄糖20 g、蛋白胨2 g、酵母膏2 g、硫酸鎂0.5 g、磷酸氫二鉀1 g、磷酸二氫鉀 0.46 g 和 1 000 mL 水。［1］

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

（1）CYM培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28℃，150 r/min，CYM培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)繁菌絲體，過濾，60℃干燥菌絲體，稱干重。

（2）按照水:干菌絲=30∶1沸煮菌絲5 h，過濾取上清濃縮，加入95%酒精至酒精終濃度達(dá)75%。－4℃過夜醇沉食用菌多糖。

（3）4 000 r/min離心15min沉淀食用菌多糖，30∶1水稀釋沉淀，按照體積比3∶1加入sevag試劑（氯仿:異戊醇 =24∶1），渦旋震蕩充分混勻，4 000 r/min離心15 min去除蛋白及雜質(zhì)，取上清，3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，4 000 r/min離心15 min后，沉淀物60℃烘干，所得即為食用菌多糖。

2.4 食用菌多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

以葡萄糖制作標(biāo)準(zhǔn)液，采用硫酸蒽酮比色法，取7支大試管，按表4數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。

表4 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液制作表Tab.4 The production table glucose standard solution

在每支試管中立即加入蒽酮試劑4.0 mL，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口封好，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸10 min取出，用流水冷卻，室溫放置10 min，在620 nm波長下比色。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量作橫坐標(biāo)，以吸光值作縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1 所示［2］。

2.5 食用菌多糖的提取率、多糖產(chǎn)量的測定

提取率計(jì)算如下:

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The glucose standard curve

式中:m1為紫外分光光度計(jì)檢測的多糖含量，g;m2為食用菌菌絲體的干重，g［3］。

因?yàn)榕囵B(yǎng)液體積不同會導(dǎo)致食用菌菌絲體產(chǎn)量不同，所以多糖產(chǎn)量為每100 mL培養(yǎng)液培養(yǎng)菌種所產(chǎn)生出來的。

3 結(jié)果

3.1 食用菌多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

經(jīng)紫外可見光分光光度計(jì)檢測，將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸處理，得到回歸方程Y=0.006 2X+0.1426（R2=0.996 1）

3.2 食用菌多糖的提取率、純度、多糖產(chǎn)量的測定

由表5可知，香菇15個品種中多糖產(chǎn)量最多的是品種9 608，單個三角燒瓶 （液體培養(yǎng)基300 mL）可產(chǎn)生干菌絲體2.04 g，去蛋白后多糖干重產(chǎn)量為0.36 g，提取率為7.2%，該品種多糖產(chǎn)量為48.96 mg/100 mL。

由表6可知，靈芝8個品種中多糖產(chǎn)量最多的是品種G9，單個三角燒瓶 （液體培養(yǎng)基300 mL）可產(chǎn)生干菌絲體3.55 g，去蛋白后多糖干重產(chǎn)量為0.49 g，提取率為4.7%，該品種多糖產(chǎn)量為55.62 mg/100 mL。

4 結(jié)論

通過選取15個香菇品種和8個靈芝品種進(jìn)行多糖含量檢測，得出其中香菇、靈芝多糖產(chǎn)量最高的品種是9 608和G9，多糖產(chǎn)量分別為48.96 mg/100 mL和55.62 mg/100 mL。

表5 香菇15個品種多糖提取數(shù)據(jù)表Tab.5 Polysaccharide extract data of 15 species of mushrooms

表6 靈芝8個品種多糖提取數(shù)據(jù)表Tab.6 Polysaccharide extraction data of 8 species of ganoderma lucidum

香菇和靈芝多糖含量差異在于相同培養(yǎng)條件下，靈芝液體培養(yǎng)產(chǎn)生菌絲稠密、量多，而香菇液體培養(yǎng)菌絲成球，量較靈芝少。以香菇9 608和靈芝G9為例，可以看出靈芝菌絲產(chǎn)量高于香菇，是香菇的1.74倍，而提取率卻為香菇的0.65倍，多糖產(chǎn)量是香菇的1.14倍，說明靈芝多糖產(chǎn)量高于香菇，而香菇多糖的純度較靈芝多糖的高。

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［1］樂 濤，陳鳳曾，姬松山.六個香菇菌株液體菌種代料栽培的比較試驗(yàn)［J］.食用菌，2006，8（2）:34 －37.

［2］郭曉蕾，朱思潮，翟旭峰，等.硫酸蒽酮法與硫酸苯酚法測定靈芝多糖含量比較［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010（9）:22－25.

［3］張素霞.香菇多糖提取工藝的比較研究［J］.長江蔬菜，2009（14）:52－55.