張 偉 秦玉花 趙紅衛(wèi) 董根山 孟憲麗 張丹丹 李金偉 曹 瑋

1.河南省人民醫(yī)院，河南鄭州 450003；2.河南中醫(yī)學(xué)院，河南鄭州 450003

羅紅霉素是第二代大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，體內(nèi)的抗菌活性比紅霉素要強(qiáng)1～4 倍[1]，其作用機(jī)制為大環(huán)內(nèi)酯刺激帶著肽鏈的tRNA，使其在肽鏈伸長(zhǎng)過(guò)程中從核蛋白體解離，從而抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成。主要作用于革蘭陽(yáng)性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等常見(jiàn)致病菌[2]。淋球菌和嗜肺軍團(tuán)菌對(duì)羅紅霉素的MIC90均約0.25mg/L，對(duì)類(lèi)桿菌屬的MIC90為24 mg/L，對(duì)梭菌屬的MIC90為3.3 mg/L，肺炎衣原體MIC90為0.25mg/L，肺炎支原體MIC90為0.03 mg/L，溶脲脲原體MIC90為1 mg/L[3]。對(duì)于由衣原體、支原體、軍團(tuán)菌等病原體所引發(fā)的呼吸道感染、咽炎、喉炎及皮膚軟組織感染等作為首選藥物，在臨床上有著廣泛的應(yīng)用[4]。眼部藥物傳遞系統(tǒng)作為控制釋放領(lǐng)域的重要分支，一直受到人們的關(guān)注，眼部的有效保護(hù)機(jī)制與高密度的敏感性促使人們開(kāi)發(fā)安全合理的給藥系統(tǒng)[5]。為延長(zhǎng)藥物在眼內(nèi)的生物利用度及作用持續(xù)時(shí)間，筆者選用羅紅霉素為模型藥物，通過(guò)實(shí)驗(yàn)將其制備成原位膠化滴眼劑。給藥后藥液與淚液中的Ca2+等陽(yáng)離子接觸迅速轉(zhuǎn)型為凝膠，能有效延長(zhǎng)藥物停留時(shí)間，增加療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV2102C 型分光光度計(jì)（尤尼柯儀器有限公司（UNICO），81-2 型磁力攪拌器（上海司樂(lè)儀器有限公司），pHS-3數(shù)字式酸度計(jì)（金壇市國(guó)旺實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

1.2 試藥

羅紅霉素（湖北興銀河化工有限公司，批號(hào)：091102），羅紅霉素對(duì)照品（河南省藥檢所提供，批號(hào)120221-200901，含量97.8%），海藻酸鈉（佳麥化工有限公司，批號(hào)100311）；硼酸（湖南華日制藥有限公司，批號(hào)100117），其余輔料為藥用規(guī)格，試劑為分析純。水選用注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與制備

2.1.1 處方 羅紅霉素1 g；海藻酸鈉10 g；硼酸18 g；土溫-80 20 g；尼泊金乙酯0.1 g；注射用水加至1 000 mL。

2.1.2 制備 取處方量海藻酸鈉加水至100 mL，加熱、攪拌使其溶解，靜置備用；精密稱取羅紅霉素1 g、硼酸18 g 用適量吐溫-80 研磨均勻，加入尼泊金乙酯0.1 g 緩慢攪拌加入熱注射用水使溶解。在迅速攪拌下將羅紅霉素溶液緩緩加入海藻酸鈉溶液中，用濃度為0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液將pH 調(diào)節(jié)至5.0～7.0，攪拌至均勻，抽濾，經(jīng)濾器加注射用水至1 000 mL，100℃流通蒸汽滅菌30 min，無(wú)菌分裝，即得羅紅霉素原位膠化滴眼液。

2.2 性狀

羅紅霉素原位膠化滴眼液為無(wú)色澄明液體，其他均符合《中國(guó)藥典》2010年版有關(guān)滴眼液項(xiàng)下之規(guī)定。

2.3 鑒別

2.3.1 性狀鑒別 取本品加入適量濃硫酸5 滴，緩緩搖勻，1 min 內(nèi)溶液顏色呈深墨綠色。

2.3.2 光譜鑒別 精密量取羅紅霉素原位膠化滴眼液適量，用濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液使之溶解，然后加入50 mL硫酸，再用濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液稀釋為35μg/mL。在（482±1）nm 波長(zhǎng)處有最大吸收。

2.4 含量測(cè)定

2.4.1 溶液配制 精密量取羅紅霉素原位膠化滴眼液及羅紅霉素對(duì)照品適量，分別置100 mL 容量瓶中，加入濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液使之溶解，然后加入50 mL 硫酸，用濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液定容，放置約50 min，備用。

2.4.2 波長(zhǎng)的選擇[6]以濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液作為空白溶液，前平行測(cè)定作為空白。于200～520 nm 波長(zhǎng)范圍掃描記錄紫外吸收光譜，結(jié)果表明羅紅霉素于482 nm 波長(zhǎng)處有最大吸收，并且在此波長(zhǎng)處輔料無(wú)吸收，因此確定測(cè)定波長(zhǎng)為482 nm。

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取干燥至恒重的羅紅霉素對(duì)照品15mg 于100 mL 容量瓶中，加入濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液使之溶解﹑定容，再精密量取續(xù)濾液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分別置于10 mL 容量瓶中，加入5mL 硫酸再用0.1 mol/L 鹽酸定容，放置約50 min，各取適量溶液于482 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定，以濃度（C）對(duì)吸收度（A）作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為C=45.288A-0.667 6（r=0.999 6），結(jié)果顯示：羅紅霉素在15～60 μg/mL 范圍內(nèi)其線性關(guān)系良好。

2.4.4 精密度試驗(yàn) 取同一份所制樣品溶液，測(cè)定吸收度，連續(xù)測(cè)定5次。結(jié)果RSD=0.65%。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 所包裝完好的制樣品于室溫放置6個(gè)月后，觀察其性狀、色澤和含量等指標(biāo)均符合《中國(guó)藥典》2010年版滴眼劑項(xiàng)下各項(xiàng)規(guī)定。

2.4.6 回收率試驗(yàn) 按處方比例精密稱取主藥和輔藥，定量配制高、中、低3 種濃度，每種濃度各取樣3次照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=3）

2.4.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密量取同一批樣品，按“2.4.3”項(xiàng)下方法連續(xù)測(cè)定5次，分別記錄峰面積，結(jié)果顯示含量平均值為 96.94%，RSD=1.88%（n=5）。

2.4.8 樣品的含量測(cè)定 精密量取所制樣品4.0 mL 置于100 mL 容量瓶中，用濃度為0.1 mol/L 鹽酸溶液溶解﹑搖勻，加5mL 硫酸，再用濃度為0.1 mol/L 鹽酸溶液定容，取續(xù)濾液放置約30 min，照分光光度法在波長(zhǎng)（482±10）nm 處分別測(cè)定吸收度，同時(shí)以0.1 mol/L 鹽酸溶液同法處理作為空白，分別按二者吸收度的比值計(jì)算羅紅霉素含量，經(jīng)測(cè)定批號(hào)為110216，110422，110919 三批樣品，含量分別為標(biāo)示量的96.85%，98.24%，98.77%。

2.5 刺激性實(shí)驗(yàn)

取健康成年家兔[河南省人民醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，SCXK（豫）-2011-0023]5只，體重為（2.5±0.5）kg，每只兔右眼結(jié)膜囊內(nèi)滴入本品1～2 滴，左眼滴入0.9%氯化鈉作為對(duì)照，分別于30、45min 和1、24 h 時(shí)觀察兔眼角膜有無(wú)充血、紅腫、渾濁等現(xiàn)象，結(jié)果雙眼無(wú)明顯變化，家兔無(wú)明顯躁動(dòng)。結(jié)果表明本品無(wú)刺激性，用藥安全。

3 討論

普通滴眼劑給藥后，在異物的刺激下，眼瞼不由自主的快速眨動(dòng)同時(shí)大量的分泌淚液，導(dǎo)致滴眼劑因淚水的沖洗、眼瞼的眨動(dòng)而迅速被清除，普通滴眼劑的生物利用度一般都低于1%[7]。眼部原位膠化給藥系統(tǒng)能有效避免上述缺點(diǎn)，按照其形成凝膠的原理可分為溫度敏感型凝膠、pH敏感型凝膠和離子敏感型凝膠[8]。在滴入眼睛后，受到溫度、pH 和離子強(qiáng)度的影響，立即轉(zhuǎn)型為凝膠，通過(guò)眼瞼的眨動(dòng)迅速在眼球表面形成一層均勻的保護(hù)膜，不易被淚水沖走，既能避免突發(fā)釋放藥物和流入鼻淚管而引起不適，又能在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)緩慢釋放藥物，提供平穩(wěn)有效的藥物濃度[9]。從而達(dá)到了緩釋效果，且無(wú)眼膏劑的油膩感和不易涂布均勻，使用不便等缺點(diǎn)，增加了患者用藥的依從性，保證了治療效果，使該藥更有效、更安全地用于臨床，因此值得推廣應(yīng)用。

本品屬于離子敏感型凝膠，海藻酸鈉是一種親水性多聚糖，通過(guò)與人體淚液中所含有的Na+、K+、Ca2+等陽(yáng)離子的絡(luò)合，引發(fā)構(gòu)象改變，在眼中可以使滴眼劑由溶液型迅速轉(zhuǎn)化為凝膠型，能顯著增加藥物在眼睛里的停留時(shí)間，增加療效。滴眼液本身是溶液型便于臨床給藥和分劑量，實(shí)驗(yàn)表明海藻酸鈉是一種良好的藥物載體，所形成的凝膠的強(qiáng)度依賴于海藻酸鈉的濃度和β-D 甘露糖酸所占的比例[10]。

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