錢沁佳

（海南省第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南三亞570000）

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見惡性疾病，臨床診斷除常規(guī)檢查外，基因檢測在臨床診斷中也起到積極作用。P27蛋白是細胞周期蛋白依賴激酶抑制劑因子，其在細胞周期調(diào)控中起重要作用，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制相關(guān)；P185蛋白是一種癌基因，臨床已應(yīng)用于多種惡性腫瘤診斷［1］。作者為研究應(yīng)用P27特異性單克隆抗體、P185特異性單克隆抗體聯(lián)合檢測在子宮內(nèi)膜癌診斷及判斷預(yù)后的應(yīng)用價值，對本院2008年1月至2010年3月收治的子宮內(nèi)膜癌、子宮非典型增生病變及同期正常子宮內(nèi)膜組織進行檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2008年1月至2010年3月收治的子宮內(nèi)膜癌患者66例（癌癥組），年齡42～82歲；子宮非典型增生病變患者29例（增生組），年齡41～83歲；正常子宮內(nèi)膜組織31例（對照組），年齡39～81歲。

1.2 試劑 S－P免疫組化試劑盒，P27單克隆抗體、c－erbB－2單克隆抗體，均購自福州邁新公司。

1.3 方法

1.3.1 采用S－P免疫組化方法 步驟：（1）石蠟切片4μm厚，脫蠟水化后，用磷酸鹽緩沖液（PBS），pH＝7.4沖洗3次，每次5min；（2）加入50μL過氧化酶阻斷溶液，室溫孵育10min；（3）用PBS沖洗3次，每次5min；（4）加非免疫性動物血清50 μL，室溫孵育5min，后用PBS沖洗；（5）加第一抗體50μL（P27抗體或P185抗體），室溫孵育60min；（6）用PBS沖洗3次，每次5min；（7）加生物素標記的第二抗體50μL，室溫孵育10min；（8）用PBS沖洗3次，每次5min；（9）加鏈親和素－過氧化物酶溶液50μL，室溫孵育10min；（10）用PBS沖洗3次，每次5min；（11）加新鮮配制的DAB溶液2滴顯色；（12）自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固。

1.3.2 結(jié)果判定 光鏡隨機觀察10個高倍視野，計數(shù)1 000個細胞，以細胞核／漿（P27）、細胞膜／漿（P185）陽性為棕黃色顆粒。計算陽性細胞百分率，陽性結(jié)果分級標準：＜10%為陰性，10%～50%（＋），＞50%（＋＋）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行分析，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 子宮內(nèi)膜癌組織中P27蛋白的表達 本組資料中癌癥組P27表達與增生組及子宮內(nèi)膜對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），對照組與增生組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2 P185蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達 癌癥組P185蛋白產(chǎn)物陽性表達率為83.3%，增生組陽性表達率為48.3%，對照組陽性表達率僅9.7%，且無強陽性表達。癌癥組P185的表達陽性率與增生組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；對照組與癌癥組及增生組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表2。

表1 3組P27蛋白的表達比較

表2 3組患者P185蛋白的表達比較

3 討 論

抑癌基因和癌基因在腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過程中起到了極大的影響。P27蛋白是細胞G1期負向調(diào)節(jié)因子，是cdk2／cykclin E復(fù)合物的抑制劑，可使細胞周期停滯于G1期。有實驗證實，如P27缺失的小鼠易發(fā)生垂體腫瘤，表明P27與腫瘤發(fā)生有關(guān)［3］。近年來有報道稱 P27蛋白高表達預(yù)后較好［4－7］；本研究發(fā)現(xiàn)，P27蛋白陽性著色于細胞質(zhì)及細胞核，正常子宮內(nèi)膜亦呈陽性并可作為內(nèi)對照，本組資料中子宮內(nèi)膜癌組織P27陽性表達率53%，在非典型增生病變中陽性表達率為75.8%，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），子宮內(nèi)膜癌與正常子宮內(nèi)膜對照組比較，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），表明隨P27蛋白含量的減少或缺失，正常細胞向癌細胞轉(zhuǎn)化速度加快，其惡性度增高，預(yù)后不良，表明P27對腫瘤發(fā)生起著一定的調(diào)控作用。P185是編碼1255的氨基酸蛋白，其激活方式主要是擴增及產(chǎn)物的過度表達，現(xiàn)較多用于乳腺癌、卵巢癌判定預(yù)后的檢測，用于消化道癌［8］、甲狀腺癌［9］已有報道，本研究與報道相一致。本研究應(yīng)用P185對子宮內(nèi)膜癌進行檢測，其陽性率83.3%；在非典型病變中陽性率48.3%；對照組陽性率9.7%，這些結(jié)果表明隨著P185蛋白的擴增或表達過度增高時，惡性度增加，提示預(yù)后不良，說明P185對腫瘤發(fā)生和調(diào)控亦起一定作用。

本組資料中，子宮內(nèi)膜疾病惡性程度越高，P27蛋白表達陽性水平越低；而子宮內(nèi)膜疾病惡性程度越低，P185蛋白表達陽性率也越低，正常對照組P185蛋白無強陽性表達，表明子宮內(nèi)膜癌中P185蛋白與P27蛋白表達表達呈負相關(guān)。他們從不同的角度為臨床提供了有價值的腫瘤標志物。P27蛋白作為抑癌基因、P185作為癌基因?qū)δ[瘤的發(fā)生與調(diào)控有重要作用，兩者的聯(lián)合檢測對子宮內(nèi)膜疾病的鑒別診斷及治療起積極意義。

［1］ 張旭，李小毛.Survivin基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40（19）：1954－1957.

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［3］ Dellas A，Jundt G，Sartorius G，et al.Combined PTEN and p27kip1protein expression patterns are associated with obesity and prognosisin endometrial carcinomas［J］.Clin Cancer Res，2009，15（7）：2456－2462.

［4］ 張穎，陳海玲，梁艷紅.GLUT1與PCNA蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達及相關(guān)研究［J］.海南醫(yī)學(xué)，2011，22（6）：131－111.

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［7］ 張穎，陳海玲，梁艷紅.GLUT1與PCNA蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達及相關(guān)研究［J］.海南醫(yī)學(xué)，2011，22（6）：169－171.