楊曉敏 董德瓊 楊渝浩 (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸一科，貴州 遵義 563000)

肺結(jié)核的發(fā)生與機體細(xì)胞免疫功能失衡有關(guān)，Th1/Th2應(yīng)答平衡對結(jié)核病的進(jìn)展、惡化、控制和預(yù)防起著決定作用〔1〕。老年肺結(jié)核由于患病率高、菌陽率高、死亡率高而治愈率低，已成為我國結(jié)核病控制難題。已有研究表明血管活性腸肽(VIP)參與機體免疫功能調(diào)節(jié)，并在Th細(xì)胞分化調(diào)節(jié)方面起著相當(dāng)重要的作用。本研究旨在探討VIP在老年肺結(jié)核患者血清中的表達(dá)及其與Th1型細(xì)胞因子γ-干擾素(IFN-γ)和Th2型細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL)-4的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象 老年活動性肺結(jié)核患者40例，男性24例，女16例，年齡(66.5±11.7)歲，老年非活動性肺結(jié)核患者30例，男性16例，女14例，年齡(64.3±8.5)歲，中青年活動性肺結(jié)核患者30例，男性18例，女12例，年齡(40.5±10.7)歲，為2007年5月至2008年5月我院住院和門診患者。老年活動性肺結(jié)核患者經(jīng)胸部CT診斷病灶在2個肺野內(nèi)患者23例，男性13例，女10例，年齡(65.3±9.8)歲，病灶超過2個肺野或有空洞形成患者17例，男性11例，女6例，年齡(67.4±12.3)歲?；顒有苑谓Y(jié)核患者均為初治繼發(fā)型肺結(jié)核，診斷符合2001年中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔2〕，并除外心、肝、腎等臟器并發(fā)癥及其感染，無糖尿病、腫瘤等免疫相關(guān)性或免疫性疾病，4個月內(nèi)未用過糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑，均抗結(jié)核治療前采血。非活動性肺結(jié)核患者診斷符合以下標(biāo)準(zhǔn):①無明顯結(jié)核中毒癥狀;②CT顯示病灶已消失或處于穩(wěn)定狀態(tài);③痰抗酸染色涂片陰性3次以上。健康組，25例，為健康體檢者，年齡(68.8±7.8)歲。本研究經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 方法 抽空腹靜脈血8 ml，低溫以2 500 r/min離心15 min，分離血清放置-70℃保存，測定前取出復(fù)蘇至室溫。采用放射免疫分析(RIA)法測定VIP，試劑盒由第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室提供，按照說明書的要求進(jìn)行操作;采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定IFN-γ和IL-4，試劑盒由美國ADL公司提供，按照說明書的要求進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗數(shù)據(jù)以±s表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較用方差分析，兩組間相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 老年肺結(jié)核患者血清VIP等細(xì)胞因子的測定結(jié)果 老年活動性肺結(jié)核組血清VIP、IL-4水平均明顯高于老年非活動性肺結(jié)核組及健康組，IFN-γ水平低于健康組(P＜0.01，P＜0.05)，見表1。老年活動性肺結(jié)核組IFN-γ水平與老年非活動性肺結(jié)核組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 病情嚴(yán)重程度與血清中VIP等細(xì)胞因子的關(guān)系 病灶超過2個肺野或有空洞形成的患者血清VIP、IL-4水平高于病灶范圍小的患者(均P＜0.05)，見表2。兩組IFN-γ水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 不同年齡患者血清中VIP等細(xì)胞因子的比較 老年活動性肺結(jié)核組血清VIP、IL-4及IFN-γ水平均稍高于中青年活動性肺結(jié)核組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，見表3。

表1 老年肺結(jié)核患者血清中VIP、IFN-γ及IL-4含量(ng/L，±s)

表1 老年肺結(jié)核患者血清中VIP、IFN-γ及IL-4含量(ng/L，±s)

與健康組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05;與老年非活動性肺結(jié)核組比較:3)P＜0.01

組別 n VIP IL-4 IFN-γ老年活動性肺結(jié)核組 40 36.8±15.31)3)28.8±12.21)3)43.5±18.22)20 16.5±7.0 14.3±6.8 60.7±23.1老年非活動性肺結(jié)核組 30 20.6±10.2 15.7±7.9 54.7±19.8健康組

表2 不同病情程度患者血清VIP、IFN-γ、IL-4水平比較(ng/L，±s)

表2 不同病情程度患者血清VIP、IFN-γ、IL-4水平比較(ng/L，±s)

與病灶在2個肺野內(nèi)組比較:1)P＜0.05

組別 n VIP IL-4 IFN-γ病灶超過2個肺野或有空洞形成38.5±13.2病灶在2個肺野內(nèi)17 40.8±17.31) 31.8±14.21)23 28.6±14.2 21.7±8.9 45.7±15.8

表3 不同年齡患者血清中VIP、IFN-γ、IL-4 水平(ng/L，±s)

表3 不同年齡患者血清中VIP、IFN-γ、IL-4 水平(ng/L，±s)

組別 n VIP IL-4 IFN-γ 40 36.8±15.3 28.8±12.2 43.5±18.2中青年活動性肺結(jié)核組老年活動性肺結(jié)核組30 34.6±11.8 24.3±11.9 35.3±19.4

2.4 血清VIP與IL-4、IFN-γ水平的相關(guān)性 老年活動性肺結(jié)核患者治療前VIP與IL-4呈正相關(guān)(r=0.672，P＜0.01)，與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)(r=-0.406，P＜0.01)。老年非活動性肺結(jié)核組血清VIP與IL-4、IFN-γ之間均無相關(guān)性(r值分別為0.256、-0.240，均 P ＞0.05)，健康組血清 VIP 與 IL-4、IFN-γ 之間均無相關(guān)性(r值分別為0.204、-0.130，均P＞0.05)。

3 討論

老年人因機體退行性病變出現(xiàn)胸腺萎縮、骨髓造血干細(xì)胞減少，外周血免疫細(xì)胞數(shù)量及功能下降，免疫細(xì)胞之間相互調(diào)節(jié)失去平衡，導(dǎo)致機體免疫功能紊亂與衰退，使得老年人成為結(jié)核桿菌的易感人群。其中淋巴細(xì)胞亞群的免疫變化，尤其是老年人感染結(jié)核分枝桿菌后T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫殺傷作用減退，成為老年人結(jié)核病高發(fā)的重要原因之一。本研究提示老年肺結(jié)核患者確實存在Th1/Th2失衡，Th1保護性免疫反應(yīng)減弱，Th2反應(yīng)增強，繼而出現(xiàn)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，伴隨免疫病理損傷。研究還顯示病變范圍大或出現(xiàn)空洞患者Th2優(yōu)勢表達(dá)明顯，表明Th2反應(yīng)優(yōu)勢使病灶趨于擴大和加重。

本研究結(jié)果顯示，老年活動性肺結(jié)核患者血清VIP水平顯著增高。VIP是體內(nèi)重要的內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)肽，在特異性抗原刺激后優(yōu)先由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，通過作用于抗原遞呈細(xì)胞和Th細(xì)胞本身，調(diào)節(jié)Th細(xì)胞分化及Th1/Th2應(yīng)答反應(yīng)。VIP可優(yōu)先誘導(dǎo)抗原遞呈細(xì)胞表面上的共刺激分子B7-2在靜止巨噬細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞的表達(dá)，促進(jìn)Th2型免疫應(yīng)答〔3，4〕，并可維持Th2效應(yīng)細(xì)胞的存活和記憶性Th2細(xì)胞的產(chǎn)生，通過抑制顆粒酶及Fas1配體的表達(dá)使Th2型細(xì)胞免遭克隆清除〔5〕。另一方面，IL-12是Th1細(xì)胞分化的主要驅(qū)動因素，VIP通過抑制活化巨噬細(xì)胞分泌IL-12，并直接干涉T細(xì)胞IL-12的 JAK2/STAT4信號通路，抑制Th1分化〔6〕。在肺結(jié)核病變時Th2優(yōu)勢表達(dá)可能促進(jìn)VIP的分泌，導(dǎo)致血清中VIP水平增高。

特異性的細(xì)胞因子在Th細(xì)胞分化過程中被認(rèn)為是最主要的因素，VIP通過多種途徑影響IFN-γ、IL-4等細(xì)胞因子的水平，以促進(jìn)Th2細(xì)胞的分化，抑制Th1細(xì)胞增殖。Voice等〔7〕研究發(fā)現(xiàn)VIP通過血管活性腸肽受體2受體顯著上調(diào)IL-4轉(zhuǎn)錄因子c-Maf和Junb水平，IL-4的高表達(dá)導(dǎo)致Th2細(xì)胞免疫的應(yīng)答。VIP抑制Th1特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet，使IFN-γ基因轉(zhuǎn)錄失活，影響機體IFN-γ水平，Th細(xì)胞分化向Th2方向偏移〔8〕。本研究結(jié)果提示在老年活動性肺結(jié)核患者VIP水平可能是誘發(fā)IFN-γ降低而IL-4增高的重要因素，進(jìn)而導(dǎo)致了機體的Th1/Th2失衡。

本研究結(jié)果提示不同年齡段活動性肺結(jié)核患者均可能存在Th1/Th2失衡，導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能紊亂。老年活動性肺結(jié)核患者肺部病變越重，則細(xì)胞免疫功能改變越明顯，VIP水平增高越顯著。隨著結(jié)核病變的控制好轉(zhuǎn)，Th1/Th2失衡糾正，細(xì)胞免疫功能逐漸恢復(fù)。因此，對于老年肺結(jié)核患者血清VIP水平的檢測可能對評價病變嚴(yán)重程度、活動性以及判斷其轉(zhuǎn)歸具有一定的參考意義。

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