張淑靜,于芳,汪司右

(1.上海市針灸經(jīng)絡研究所,上海 200030;2.河北省保定易縣中醫(yī)院,河北 074200)

壓力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)是指在正常狀態(tài)下無遺尿,而在腹壓突然增高時尿液自動流出的表現(xiàn),是一種多因素參與的復雜疾病。目前SUI的公認病因主要與妊娠、陰道分娩、年齡、運動、盆腔內(nèi)腫物、婦科手術(shù)等有關(guān)。因基礎研究結(jié)果存在很多爭議,其確切的發(fā)病機制尚不十分清楚。以往研究表明[1-9],SUI的病機與盆底支持組織膠原蛋白異常改變有關(guān)。

本實驗在筆者所在課題組以往研究[10-11]基礎上,采用實時定量PCR法觀察電針對SUI大鼠盆底支持組織中DCN和MMP-1 mRNA表達的影響,臨床針灸治療SUI療效顯著[11-15],本實驗旨在探討針灸治療本病的機理,為臨床針灸治療本病提供實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對象

雌性SD大鼠(200～250 g)40只,SPF級,由上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院實驗動物中心提供。

1.2 造模方法

1.2.1 動物造模[16-17]

參照Hijaz A的SUI大鼠模型,將大鼠麻醉,仰臥位固定后排空膀胱,將8Fr弗萊氏導尿管插入陰道,并向氣囊注入2～2.5 mL生理鹽水過度撐開陰道維持該狀態(tài)4 h后撤出導尿管,然后按無菌操作原則進行雙側(cè)卵巢切除術(shù),常規(guī)飼養(yǎng)1個月。

1.2.2 檢驗模型是否成功方法

①所有大鼠均測量最大膀胱容量和漏尿點壓力。方法是利用硬脊膜外導管從尿道插入大鼠膀胱2～3 cm并固定,排空膀胱,通過三通管連接,一端通過微泵向膀胱注入生理鹽水,一端連接尿動力學檢測儀器,以尿道口出現(xiàn)的一滴液體為準,記錄當時的最大膀胱容量和漏尿點壓力值。②噴嚏實驗[18]。先排空大鼠膀胱,根據(jù)測得的最大膀胱容量,注入量為容量一半的混有美蘭的生理鹽水,刺激大鼠鼻孔或吸入胡椒粉,致其出現(xiàn)噴嚏實驗,仔細觀察噴嚏時有無藍色液體從尿道口流出。

1.3 動物分組與處理

將40只雌性SD大鼠隨機分成4組,每組10只。正常對照組(A組)未做任何處理;SUI模型組(B組)施陰道擴張和雙側(cè)卵巢切除;對照穴電針組(C組)施陰道擴張和雙側(cè)卵巢切除,用0.30 mm×25 mm一次性針灸針針刺雙側(cè)腎俞、膀胱俞并接G6805-2型電針儀,刺激參數(shù)、療程同D組;治療穴電針組(D組)施陰道擴張和雙側(cè)卵巢切除,用0.30 mm×40 mm一次性針灸針針刺雙側(cè)次髎、會陽并接G6805-2型電針儀,頻率5 Hz,連續(xù)波,強度4～6 V(以動物骶部和尾部顫動而不至全身顫動為宜),留針30 min,每日電針治療1次,連續(xù)治療l0 d。

1.4 組織取材和處理

治療結(jié)束后4組大鼠處死,取大鼠尿道下陰道壁、恥骨尿道韌帶、恥骨尾骨肌和尿道周圍結(jié)締組織各約400 mg,生理鹽水洗凈血液,置﹣70℃低溫保存,待測。

1.5 組織學觀察指標及方法

用實時定量PCR法,觀察尿道下陰道壁、恥骨尿道韌帶、恥骨尾骨肌和尿道周圍結(jié)締組織中DCN和MMP-1 mRNA的表達。

1.6 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示,并采用方差分析的方法對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理,以P＜O.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

所有需要造模的實驗動物均采用測量最大膀胱容量和漏尿點壓力和噴嚏實驗檢驗模型是否成功,B組、C組和D組的造模成功率均達到90%。

2.1 膠原蛋白調(diào)節(jié)物DCN mRNA的表達

B組、C組、D組大鼠盆底組織DCN mRNA表達均較 A組顯著增加(P＜0.05);B組大鼠盆底組織DCN mRNA表達較A組、C組、D組顯著增加(P＜0.05);A組與C組、D組大鼠盆底組織DCN mRNA表達有明顯差異(P＜0.05);C組、D組大鼠盆底組織DCN mRNA表達無明顯差異(P＞0.05)。說明電針對照穴位與治療穴位均可降低SUI大鼠盆底組織DCN mRNA的表達,但兩組比較無統(tǒng)計學意義。詳見表1。

2.2 膠原蛋白降解酶MMP-1 mRNA的表達

B組、C組大鼠盆底組織MMP-1 mRNA表達較A組和 D組顯著增加(P＜0.05);A組、D組大鼠盆底組織MMP-1 mRNA表達無明顯差異(P＞0.05);B組、C組大鼠盆底組織MMP-1 mRNA表達無明顯差異(P＞0.05)。說明電針對照穴位對 SUI大鼠盆底組織 MMP-1 mRNA的表達無明顯影響;而電針治療穴位可明顯降低 SUI大鼠盆底組織MMP-1 mRNA的表達。詳見表2。

表1 4組大鼠盆底組織DCN mRNA表達的變化 (x±s)

表2 4組大鼠盆底組織MMP-1mRNA表達的變化 (x±s)

3 討論

壓力性尿失禁是中老年婦女常見病,屬于盆底功能障礙性疾病,國際尿控協(xié)會將SUI定義為腹壓突然增加時(如咳嗽、大笑、打噴嚏)導致尿液不自主流出,同時不伴逼尿肌的收縮。它雖然不是威脅生命的疾病,但難以啟齒的癥狀嚴重影響婦女的生活質(zhì)量和身心健康,隨著人類壽命的延長和生活質(zhì)量的提高,SU1日益受到國內(nèi)外醫(yī)學界的關(guān)注[19-20]。SUI的發(fā)病機制尚不明確,隨著完整理論和吊床學說的提出,研究焦點逐漸從解剖改變轉(zhuǎn)移到超微結(jié)構(gòu)及功能改變[21]。盆底肌肉、筋膜及子宮韌帶維持盆腔器官于正常位置,并通過維持膀胱頸和尿道的位置及尿道的閉合,來維持排尿自禁功能,控制女性尿道關(guān)閉的所有結(jié)構(gòu)中,最重要的是尿道下陰道壁、恥骨尿道韌帶、恥骨尾骨肌和尿道周圍結(jié)締組織。膠原纖維是盆底筋膜、韌帶的主要成分,是連接肛提肌至尿道的主要組織,通過膠原、肌肉對尿道發(fā)揮收縮作用?，F(xiàn)已從各方面證實盆底結(jié)締組織膠原異常改變?yōu)镾UI的重要發(fā)病機制[1-9]。核心蛋白聚糖與膠原都是細胞外質(zhì)的組成部分,DCN通過其核心蛋白與膠原的相互作用從而調(diào)節(jié)膠原纖維的生成速度,影響膠原纖維的形成和結(jié)構(gòu),修飾膠原纖維表面的d帶和e帶,DCN可減少局部組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量,并使膠原纖維變細[22-23]?；|(zhì)金屬蛋白酶是重要的膠原降解酶,也是唯一可降解纖維素類膠原的降解酶,2006年張群芳等[24]又發(fā)現(xiàn)SUI患者陰道壁疏松結(jié)締組織基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2的mRNA增加及其組織抑制物TIMP-2 mRNA減少,認為二者的比例失衡,在SUI的發(fā)病過程中可能起重要作用。

本實驗結(jié)果顯示模型組、對照穴電針組、治療穴電針組大鼠盆底組織DCN mRNA表達均較正常組顯著增加(P＜0.05);模型組大鼠盆底組織DCN mRNA表達較正常組、對照穴電針組、治療穴電針組顯著增加(P＜0.05);對照穴電針組、治療穴電針組大鼠盆底組織DCN mRNA表達無明顯差異(P＞0.05)。模型組、對照穴電針組大鼠盆底組織MMP-1 mRNA表達較正常組、治療穴電針組顯著增加(P＜0.05),治療穴電針組大鼠盆底組織 MMP-1 mRNA表達與正常組無明顯差異(P＞0.05)。模型組、對照穴電針組兩組大鼠盆底組織MMP-1 mRNA表達無明顯差異(P＞0.05)。

針灸治療 SUI[11-14]臨床上常用的穴位有腎俞、次髎、會陽、中極、關(guān)元、足三里、三陰交等,我們選用臨床治療SUI的常用穴位次髎、會陽兩穴,本實驗結(jié)果顯示電針次髎、會陽可明顯降低SUI大鼠盆底支持組織 DCN和 MMP-1 mRNA表達,其中對降低 MMP-1 mRNA表達更為明顯,由此可推測電針次髎、會陽主要減少膠原蛋白的降解,進一步影響 SUI大鼠盆底支持組織膠原纖維的形成,增強盆底組織支持作用,改善其控尿能力,從而達到對壓力性尿失禁癥狀的改善。

[1] Edwall L, Carlstrom K, Jonasson AF. Markers of collagen synthesis and degradation in urogenital tissue from women with and without stress urinary incontinence[J]. Neurourol Urodyn, 2005,24(4):319-324.

[2] Rodriguez LV, Chen S. New objective measures to quantify- stress urinary incontinence in a novel durable animal model of intrinsic sphineter defieieney[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2005,288(5):1332-1338.

[3] MeKinnie, Swift SE, Wang W, et a1. The effect of pregnancyandmode of delivery on the prevalence of urinary and female incontinence[J]. Am J Obstet Gynecol, 2005,193(2):512-517.

[4] Birk DE, Mayne R. Localization of collage type Ⅰ, Ⅲ and V during tendon development changes in collage types Ⅰ and Ⅲ arecorrelated with changes in fibril diameter[J]. Eur J Cell Biol, 1997,72:352-361.

[5] Lang J, Zhu L, Sun Z, et a1. Clinial study on collagen and stressurinary incontinence[J]. Clin Exp Obstet Gynecol, 2002,29(3):180-182.

[6] Ulmasten U, Falconer C. Conective tissue in female urinary incontinence[J]. Culrr Opin Obstet Gynecol, 1999,11(5):509-515.

[7] Goepel C, Hefler L, Methfessel HD, et a1. Periurethral connectivetissue status of postmenopausal women with genital prolapse with and without stress incontinence[J]. Acta Obstet Gynecol Scand, 2003,82(7):659-664.

[8] Bakas Liapis A, Salamalekis E, et a1. Tension-free vaginal tape efficacy in relation to collagen quantity of pubocervical fascia[J].Gynecol Obstet Invest, 2004,57(3):149-152.

[9] Bakas PG, Liapis A, Zervolea I, et a1. mRNA assessment for procollagen production inwomen with genuine stress urinary incontinence[J].In Urogynecol J Pelvic Floor Dysfunct, 2004,15:429-431.

[10] 張淑靜,汪司右,王燕.電針對壓力性尿失禁大鼠盆底組織膠原蛋白表達的影響[J].上海針灸雜志,2010,29(6):408-410.

[11] Wang SY, Chen GM, Li LH. “Four sacral needles” therapy for female stress inxontinence[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2006,4(3):170-173.

[12] 葉靜芳,王宇新.補脾益腎方法治療中老年婦女尿失禁——附 56例療效觀察[J].中醫(yī)文獻雜志,2000,(4):46.

[13] 宓軼群,陳一.針灸治療女性壓力性尿失禁 36例[J].中國針灸,2003,23(11):640.

[14] 楊鵬飛.溫針灸加 TDP照射治療壓力性尿失禁療效觀察[J].中國針灸,2004,24(7):459-460.

[15] 楊廷輝,周清毅,趙開祝.電針治療女性壓力性尿失禁臨床研究[J].四川中醫(yī),2004,22(6):90-91.

[16] Hijaz A, Daneshgari F, Sievert KD, et a1. Animal models of female stress urinary incontinence[J]. J Urol, 2008,179(6):2103-2110.

[17] 鄧婕,方祖軍,丁強.壓力性尿失禁動物模型的建立[C].第十四屆全國泌尿外科學術(shù)會議(廈門)論文集,2007:74.

[18] Kaiho Y, Kamo I, Chancellor MB, et a1. Role of noradrenergic pathways in sneeze-induced urethral continence reflex in rats[J]. Am J Physiol Renal Physiol, 2007,292(2):639-646.

[19] 段繼宏,楊勇,吳士良,等.北京地區(qū)尿失禁發(fā)病率調(diào)查[J].北京醫(yī)科大學學報,2000,32(1):74-75.

[20] 古力米熱,夏吳,楊勇,等.新疆地區(qū)維吾爾族人群尿失禁發(fā)生率調(diào)查[J].中華泌尿外科雜志,2002,23(7):422-423.

[21] 張睿,羅來敏.產(chǎn)后壓力性尿失禁的病理生理機制[J].國外醫(yī)學:婦產(chǎn)科分冊,2005,32(1):25-28.

[22] Douglas T, Heinemann S, Bierbaum S, et al. Fribrillogenesis of collagen types Ⅰ, Ⅱ, and Ⅲ with small leucine-rich proteoglycans decorin and biglycan[J]. Biomacromolecules, 2006,7(8):2388-2393.

[23] 董黎,張曦,馬豫煥,等.晚孕期肛提?、?Ⅲ型膠原和基質(zhì)金屬蛋白酶﹣1表達研究[J].第三醫(yī)科大學學報,2008,30(12):1148-1150.

[24] 張群芳,宋巖峰,朱忠勇.壓力性尿失禁患者陰道壁結(jié)締組織MMP-2及其抑制物的表達[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展,2006,15(2):114-116,120.